יחידנית או משולבת הדמיה גישה המבוססת על מיקרו-CT וקרינה פלואורסצנטית טומוגרפיה מולקולרית להערכת האורך של ריאות הנגרמת Bleomycin פיברוזיס בעכברים

המטרה הכוללת של מחקר זה על מודל עכבר דמוי IPF היא לנטר לאורך זמן פיברוזיס ריאתי באמצעות טכניקות הדמיה לא פולשניות כגון FMT ומיקרו-CT. שיטה זו יכולה לקדם את הרצף בהתייחס לאירועים מולקולריים ספציפיים אלה המתרחשים בפיברוזיס ריאתי. היתרון העיקרי של טכניקות אלה הוא שניתן לנטר שינויים אנטומיים של אירועים מולקולריים ספציפיים באופן לא פולשני.

היישומים של טכנולוגיות אלה מתרחבים לטיפול בפתולוגיה של IPF מכיוון שהמיזוג של FMT ומיקרו-CT מייצג את האפשרות לחקור את התקדמות המחלה והערכת טיפול חדש. התחל במיקום עכבר מורדם על פלטפורמת האינטובציה ותלה אותו על ידי החותכות שלו המונחות על החוט. הפעל את הגרון, ואז קח זוג מלקחיים קהים ופתח בעדינות את הפה.

הנח את להב הגרון לכיוון החלק האחורי של הפה עד לדמיון של פתח קנה הנשימה. השתמש ביד השנייה כדי להכניס את צינור המסירה המחובר לקצה צינור ה-PE לקנה הנשימה. סובב את השסתום התלת-כיווני כדי לספק 50 מיקרוליטר בלאומיצין.

לאחר ההתקנה, הסר במהירות את הצינור מקנה הנשימה כדי למנוע חנק. החזק את העכברים זקוף למשך מספר שניות. להזרקת בדיקה קח את העכבר בזנב ואפשר לו לאחוז במכסה הכלוב.

לאחר מכן אחוז בכתפיים והחזק את העכבר בשרוול. טבלו את הזנב בכוס מים חמים כדי לגרום לוורידים להתנפח להדמיה קלה יותר והחדרת מחט. מצא את שני הוורידים הזנביים משני צידי הזנב, לא את העורק בצד התחתון של הזנב.

הכנס את המחט בגודל 26 של מזרק 1 מיליליטר טעון MMP לווריד והזריק את תמיסת בדיקת MMP ב-10 מיליליטר לק"ג משקל גוף. להתחיל לאתחל את תוכנת רכישת התאריכים ולפתוח מחקר חדש במסד הנתונים עבור הניסוי. לפני תחילת ההדמיה, העבר את העכבר המגולח והמורדם לאמצע קלטת ההדמיה.

שמור על העכבר שטוח, מאובטח ודחוס בעדינות כנגד שני החלונות של קלטת ההדמיה. לאחר מכן בחלון הסריקה של התוכנה, לחץ על נושא"ולאחר מכן תצוגה מקדימה כדי לראות את התמונה החיה. צייר את אזור הסריקה גדול מספיק כדי שהרקמות המקיפות את אזור הקרינה הצפוי יילכדו.

לאחר ציור ה-ROY, לחץ על הוסף לתור השחזור "ולאחר מכן לחץ על סריקה" כדי לדמות את העכבר. לאחר השלמת רכישת התמונה, הסר את העכבר מקלטת ההדמיה והחזר לכלוב הביתי. כמת את הפיקומולים של הקרינה באמצעות כלי ה-ROY והפחית את ה-ROY בסביבות 700 עד 800 מילימטרים מעוקבים על האות המגיע מאזור הריאות.

חזור על ההדמיה כל שבעה ימים או לפי הצורך. כדי לצלם באמצעות מיקרו-CT, הפעל תחילה את המיקרו-CT על ידי לחיצה על כפתור ההפעלה הירוק והפעל את התוכנה כדי לחמם את מקור הרנטגן. צור את מסד הנתונים על ידי לחיצה על מסד נתונים חדש"ובנה את הדפדפן על סמך מספר העכברים בניסוי.

לפני תחילת הסריקה, בחר פרמטרי רכישה בחלון בקרת התוכנה באופן הבא. הגדר את מתח צינור הרנטגן ל-90 קילו-וולט, זרם צינור הרנטגן CT ל-160 מיקרו אנגסטרום, זרם צינור רנטגן חי ל-80 מיקרו אנגסטרומים ושדה הראייה ל-36 מילימטרים. בחר ללא טכניקת שער "ורזולוציה גבוהה" וארבע דקות לטכניקת סריקה.

לאחר הרדמת העכבר בשאיפה של 3% איזופלורן, הנח אותו על מיטת החי המוחדרת לתוך הקדח הקטן עם חרוט אף המספק אספקה קבועה של חומר הרדמה. קבעו את הכפות בעזרת סרט על המיטה כדי לאפשר לחשוף את החזה. בצד הבא דלת המכשירים נסגרה והפעילו מצב חי כדי לראות את מיקום העכבר בזמן אמת על ידי לחיצה על כפתור הצילום.

הזז את מיטת החיות כדי ליישר את החזה עם שדה הראייה באמצעות הכפתורים במכשיר ה-CT. לאחר שהעכבר ממורכז, סובב את השער כדי לאשר את מיקום המיטה האופטימלי על ידי בחירה ב-90 מעלות ולחיצה על הגדר"לאחר מכן לחץ על כפתור סריקת ה-CT. לחץ על כן"להודעה המודיעה שמקור הרנטגן יופעל.

לאחר ההדמיה, הכניסו את בעלי החיים בחזרה לכלוב ועקבו אחריהם עד להתאוששות מלאה מההרדמה. חזור על ההדמיה כל שבעה ימים או לפי הצורך. צביעה בטריכרום של מאסון חושפת את המורפולוגיה ברקמת הריאה.

תמונות של הקבוצה שטופלה בבלאומיצין הראו דפוס בולט של פיברוזיס החל מהיום השביעי בעיקר כגושים פיברוטיים בודדים והתקדם ביום ה-14 לקונגלומרטים של קולגן מוחלף ונותר ללא שינוי עד היום ה-21. הדמיית מיקרו-CT חוזרת ונשנית אפשרה כימות ופילוח של דרכי הנשימה באונות ריאה של פיברוזיס. דרכי הנשימה חולקו לחלק מרכזי ודיסטלי.

החלק הדיסטלי של דרכי הנשימה הוא מערכת התוך ריאה ומתפצל לאונות הריאה כמו אונת הגולגולת הימנית, האונה האמצעית הימנית, אונת הזנב הימנית, אונת האביזר הימנית והריאה השמאלית. כימות רדיוס דרכי הנשימה הראה רדיוס מוגבר בעכברים שטופלו בבלאומיצין בהשוואה לבקרות מלוחות. כל נקודה מייצגת את שגיאת התקן הממוצעת של ממוצע של חמישה בעלי חיים בסך הכל 30 עכברים.

כימות פיברוזיס ריאתי כולל של עכברים שטופלו בבלאומיצין בנקודות זמן שונות מוכיח כי פרמטרי מיקרו-CT אלה תואמים את הממצאים ההיסטולוגיים. לאחר שליטה בטכניקה זו ניתן לבצע לבדיקת סמים באופן שגרתי. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום מחלת פיברוזיס ריאתית לחקור את היעילות של הטיפול החוזר במודלים של בעלי חיים דמויי IPF.