ורידי ארנב מודל האינטרפוזיציה מחקה ניתוח מחדש באמצעות שתלי וריד כדי להעריך את היפרפלזיה באמצעות לחץ דם עורקי
15 במאי 2020
הפרוטוקול הנוכחי שואפת ניסויים ליצור היפרפלזיה של הוורידים ורידים על ידי הקרבת ורידים ללחץ דם עורקי לפיתוח אסטרטגיות להחליש את היפרפלזיה בתוך ורידים בעקבות ניתוח revascularization באמצעות שתלי וריד.
הפרוטוקול שלנו מספק מודל רלוונטי קל, חסכוני, ניתן לשחזור וקליני לחוקרים בתחום ההיפרפלזיה האנטימלית הוורירית. הפרוטוקול שלנו מאוזן כלכלית, קלינית וטכנית. לכן, מומלץ מאוד עבור חוקרים שרוצים ליישם את התוצאות במבחנה שלהם על הגדרת in vivo.
אנו מאמינים כי ניתן ליישם את הפרוטוקול שלנו על מודל גדול יותר של בעלי חיים לפיתוח אסטרטגיות טיפול חדשות בלב איסכמי ומחלות גפיים נמוכות יותר. הפרוטוקול שלנו רלוונטי בעיקר לתחום ניתוחי הלב וכלי הדם. עם זאת, זה עשוי לשמש גם כדי לטפל בשינויים ניווניים פיסטולות arteriovenous בחולים עם מחלת כליות בשלב הסופי.
לאחר הרדמה מקומית, ניהול משכך כאבים אנטיביוטי מניעתי, לחטא את האתר הכירורגי עם 10%povidone-יוד. ולעשות חתך של 50 עד 60 מילימטר עם אזמל כירורגי באזור צוואר הרחם של הארנב הלבן היפני המותר. לנתח בבוטות את הרקמות התת עוריות ואת fascia לחשוף קטע 20 עד 30 מילימטר של וריד הצוואר.
ולהשתמש 4-0 תפרים משי כדי ligate כל הענפים של וריד חשוף. מניחים תפר משי 2-0 סביב הוורידים הצוואריים הפנימיים וחיצוניים ולעשות חתך מילימטר אחד בקיר הווריד של הצד הדיסטלי של הווריד. הכנס קטטר בלון 2 צרפתי מן החתך לכיוון הצד הפרוקסימלי של וריד.
ו ligate תפר משי 2-0 באתרים דיסטליים של ורידים הצוואר. לנפח את הבלון עם 200 microliters של אוויר. ולהשתמש בבלון כדי denude את האטימה של וריד שלוש פעמים עבור פילינג אנדותל.
לאחר המעבר השלישי, ligate הקצה הפרוקסימלי של וריד לחתוך את וריד באתר דיסטל. לאחר מכן הכנס קטטר תוך וריד 20 מד לתוך הווריד שנקטף מן הדיסטל לכיוון proximal, לחתוך את הווריד באתר proximal. כדי לחבל את העורק הראשי עם וריד הצוואר הקציר, לחשוף קטע 20 עד 30 מילימטר של עורק התולדות ipsilateral.
ולהפריד את העורק בזהירות מן הוריד והעצב הסמוכים. Ligate כל הענפים של וריד חשוף עם תפר משי 4-0. ולנהל דרך הווריד 200 יחידות בינלאומיות לקילוגרם של נתרן הפרין.
מהדקים את הקצוות הפרוקסימליים והדיסטליים של העורק עם מהדקי גומי כירורגיים. וחותכים את העורק בין המהדקים. להזריק מלוחים רגילים לתוך העורק הראשי חרוט proximally ו distally כדי להניף את העורק.
ולמקום את וריד הקציר ליד העורק כדי anastomose הכלי בצורה הפוכה מקצה לקצה. כדי anastomose הקצה הפרוקסימלי של וריד לקצה הדיסטלי של העורק, מניחים שני תפרים עוגן של 8-0 פוליפרופילן באתר ובאתר הנגדי. הוסף תפרים בצד העליון של קו האנטומיה בין תפרי העוגן.
הפוך את העורק ואת שתל וריד במהופך. ולהוסיף תפרים על החלק הנותר של קו האנטומיה. לאחר מכן, להסיר את קטטר תוך וריד מן הווריד ומהדק את שתל הווריד proximally.
תדהים את העורק הראשי בצורה חדה. ותבוננו אם שתל הווריד מתרחב בהדרגה. שימוש ב- 8-0 פוליפרופילן קטע תפרים, anastomose הקצה הדיסטלי של וריד לקצה הפרוקסימלי של העורק.
ולפענח את העורק כדי לבדוק אם יש דימום מאתרי האנטומיה. לבסוף, ligate העורק הראשי הפנימי עם תפר משי 4-0 כדי לדמות מצב נגר עניים כדי להקל על היפרפלזיה intimal. ואז לנקות את הפצע עם מלוחים.
סגור את החתך עם 3-0 פוליגלקטין 910 בשכבות. ולאפשר לארנב להחלים לחלוטין עם ניטור לפני החזרת החיה לכלוב הבית שלה. בתמונה מייצגת זו, היפרפלזיה אטימלית מוצלחת ב 2 שבועות לאחר ניתוח אינטרפוזיציה הווריד ניתן לראות.
כאן, ניתן לראות את ההשפעות הטיפוליות של מיקרו-רנ"א-145 פולין טעון (חומצה לקטית-שיתוף-גליקולית) על המורפולוגיה ההיפרפלזיה האטימלית. ואכן, טיפול במיקרו-רנים עמוסים בננו-חלקיקים פולי(חומצה לקטית-שיתוף-גליקולית) גורם להכרתה משמעותית של היפרפלזיה אינטית. בנוסף, immunostaining עבור Ki-67, סמן התפשטות התא, מגלה פחות תאים חיוביים Ki-67 בתוך הקבוצה microRNA-145 מטופלים המציין שינוי פנוטיפ בתאי שריר חלק כלי הדם מן המצב שגשוג לא בוגר למצב התכווצות בוגרת.
המטרה העיקרית של הפרוטוקול שלנו היא להשיג patency של השתל המושתל. חשוב גם לאשר כי השתל מתרחב לאחר declamping העורק הראשי.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
פרוטוקול זה מספק מודל יעיל כלכלית וניתן לשחזור לחקר היפרפלזיה של האינטימה הורידית (venous intimal hyperplasia) באמצעות חשיפת ורידים ללחץ דם עורקי. הוא רלוונטי לחוקרים השואפים לפתח אסטרטגיות טיפול למצבים הקשורים למחלות לב איסכמיות ומחלות של הגפיים התחתונות.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום המדע
- כירורגיה קרדיווסקולרית
- היפרפלזיה אינטימלית ורידית
- ניתוח רבסולקולריזציה
רקע
- היפרפלזיה אינטימלית ורידית היא סיבוך נפוץ לאחר פרוצדורות של השתקת וריד.
- הבנת המנגנונים העומדים מאחורי מצב זה היא חיונית לשיפור התוצאות הכירורגיות.
- ייתכן שהמודלים הנוכחיים אינם משחזרים באופן מספיק את התרחיש הקליני.
- פרוטוקול זה נועד למלא פער זה על ידי אספקת מודל ניסויי רלוונטי.
מטרת המחקר
- ליצירת מודל של היפרפלזיה אינטימלית ורידית.
- לפיתוח אסטרטגיות להפחתת מצב זה לאחר ניתוח.
- לקידום התרגום של ממצאים in vitro ליישומים in vivo.
שיטות שנעשה בהן שימוש
- החלת לחץ דם עורקי על ורידים.
- הערכת התפתחות היפרפלזיה אינטימלית.
- בחינה של אסטרטגיות טיפול פוטנציאליות.
- שימוש במודל בעלי חיים גדול יותר למחקרים המשכיים.
תוצאות עיקריות
- הפרוטוקול מאוזן מבחינה כלכלית וקלינית.
- הוא מאפשר קבלת תוצאות הניתנות לשחזור הרלוונטיות למצבים אנושיים.
- יישומים פוטנציאליים בטיפול בשינויים דגנרטיביים בפסטולות עורקיות-ורידיות.
- מעודד מחקר נוסף על מחלות איסכמיות.
מסקנות
- מודל זה יכול לסייע באופן משמעותי בהבנת היפרפלזיה אינטימלית ורידית.
- זהו כלי בעל ערך עבור חוקרים בתחום הכירורגיה קרדיווסקולרית.
- מחקרים עתידיים עשויים להוביל לאסטרטגיות טיפול משופרות עבור מטופלים מושפעים.
שאלות נפוצות
רלוונטיות תעשייתית להנהלה
מודל זה מאפשר הערכה פרה-קלינית של אסטרטגיות טיפוליות המכוונות להיפרפלזיה אינטימלית ורידית, מצב המהווה גורם מרכזי לכישלון ברבסקולריזציה של מעקפים כלי דם. על ידי שכפול חשיפה ללחץ עורקי במערכת השתלת וריד הנגישה בניתוח, המודל תומך בהסרת סיכונים מכניסטית של התערבויות אנטי-פרוליפרטיביות לפני בדיקות יקרות בבעלי חיים גדולים או בניסויים קליניים. הפלטפורמה מגבירה את הביטחון החזיוני בתיקוף יעדים לאפנון הפנוטיפ של שריר חלק בכלי דם, ובכך מספקת מידע ישיר לקבלת החלטות לגבי המשכיות הפיתוח של טיפולים קרדיו-וסקולריים.
יישומים אסטרטגיים במחקר ופיתוח בביופארמה
גילוי מוקדם ותיקוף מטרה
- ערך מדעי: מאפשר בדיקה של היפותזות טיפוליות המתמקדות בשינוי הפנוטיפ של תאי שריר חלק בכלי דם ממצב פרוליפרטיבי למצב כיווצי.
- ערך תפעולי: מספק מערכת in vivo הניתנת לשחזור לצורך תיקוף של מעורבות המטרה וההשפעה התפקודית של התערבויות מולקולריות, כגון הולכת miR-145.
סריקה ופיתוח בדיקות
- ערך מדעי: מייצר נקודות קצה היסטופתולוגיות כמותיות (עובי האינטימה, חיוביות ל-Ki-67) לצורך הערכת תגובה למינון של תרופות מועמדות.
- ערך תפעולי: תומך בסטנדרטיזציה של הכנת השתלה ורידית וחיבור עורקי לקבלת תוצאות פנוטיפיות עקביות בין מחקרים.
מחקר תרגומי ופרה-קליני
- ערך מדעי: מקשר בין ממצאים in vitro (למשל, השפעות של miR-145 על VSMCs) לתנאי לחץ עורקי רלוונטיים פיזיולוגית in vivo.
- ערך תפעולי: מאפשר ניטור אורך של פתוחות השתל והתקדמות ההיפרפלזיה, ובכך מסייע למחקרי יעילות ארוכי טווח.
שילוב תהליכי עבודה וצנרת עיבוד
המודל משתלב ברצף הגילוי הקרדיווסקולרי, ותומך בתיקוף של מטרה לאחר סינון in vitro ולפני בדיקות יעילות פרה-קליניות במודלים גדולים יותר או תרגום קליני.
- ביולוגיה של גילוי: בוחן היפותזות מכניסטיות על מסלולי עיצוב מחדש של כלי דם תחת מאמץ מכני פתולוגי.
- סינון: מספק תוצרי היסטולוגיה ואימונוהיסטוכימיה כמותיים לצורך דירוג מועמדים טיפוליים.
- אנליטיקה: מאפשר ניתוח מורפומטרי ומדד פרוליפרציה (למשל, שטח היפרפלזיה אינטימלית, Ki-67+) להשוואת השפעות טיפוליות.
- מחקר תרגומי: מספק סביבת השתלה של וריד הרלוונטית למחלה כדי להעריך את רציפות המנגנון מתרביות תאים לתוצאות ברמת הרקמה.
- שימוש חוזר ארגוני: מבסס פלטפורמה כירורגית סטנדרטית הניתנת להתאמה למספר שיטות טיפול (חומצות גרעיניות, תרופות, ביולוגיים) לשיפור השתלות כלי דם.
השפעה תפעולית ועסקית
- ערך מדעי: מפחית עמימות מכניסטית בכשל של שתלים כלי דם על ידי בידוד היפרפלזיה אינטימלית כתהליך התלוי בלחץ.
- ערך תפעולי: מציע מודל יעיל מבחינה כלכלית וניתן לשחזור עם פולשנות מוגבלת, התומך במחקרים אורך ומפחית את מספר החיות בשימוש.
- ערך אסטרטגי: משפר את קריטריוני ה-go/no-go על ידי חיזוי הסיכון לכשל קליני של השתל בהתבסס על יעילות הפחתת ההיפרפלזיה.
- השפעה על הפורטפוליו: מאפשר תיעדוף מותאם סיכונים של מועמדים לטיפולים בכלי דם המכוונים למודולציה של פנוטיפ שריר חלק.
שיקולי יישום
- דורש מומחיות בטכניקות כירורגיות מיקרו-וסקולריות ובאנסטומוזיס ורידי/עורקי ביונקים קטנים.
- תלוי בגישה לציוד כירורגי (מכשירים למיקרו-כירורגיה, תפרי, קטטרי בלון, הפרין) ובמתקנים לניטור לאחר ניתוח.
- מחייב פרוטוקולים סטנדרטיים להוצאת וריד, הסרה של השכבה האינטימלית (intimal denudation) וחיבור עורקי כדי להבטיח שחזור של המודל.
- התאמה למודלים של בעלי חיים גדולים יותר עשויה לדרוש התאמה של גודל כלי הדם, עובי התפר ומינון נוגדי הקרישה, תוך שימור החשיפה ללחץ עורקי.
- הערכת התוצאות תלויה ביכולות עיבוד היסטולוגי וצביעה אימונוהיסטוכימית עבור נקודות סיום כגון עובי האינטימה ו-Ki-67.
