ברזולוציה גבוהה מדידה של התנהגות ריח מונחה על הזחלים תסיסנית

שלום, שמי מאט לואי. אני עמית פוסט-דוקטורט במעבדתה של לסלי סאל באוניברסיטת רוקפלר. והיום ארצה לספר לכם על הניסויים שביצענו כדי לחקור כימוטקסיס של זחלים.

הבעיה שמעניינת אותנו היא פשוטה למדי. היא למעשה מיוצגת כאן בהגדרות אלו. הרגע העברתי קבוצה של זחלי Joseph על פני השטח של agros.

סביבה זו עוינת למדי והם קרובים לרעב. בדרך כלל, בעלי החיים הללו יצטרכו למצוא את דרכם למקור המזון הקרוב ביותר, וכאן ישנם בננות הפולטות ריח שימשוך את הזחלים. סביבה זו אינה אידיאלית לחקר התנהגות כימותקסית, לכן השיפור הראשון יהיה החלפת הבננה בחומר כימי.

כימיקל זה הוא iso acetate והוא אחד מהטעמים הדומיננטיים בבננה. זהו הטעם המלאכותי שלנו, ובאמצעותו אנו משיגים שליטה טובה בהרבה בגירוי ה후ולטורי (חוש הריח). השיפור הבא הוא שימוש בסביבה סגורה בניסיון למנוע באופן זה תנודות בפיזור של החומר.

זהו המבחן שבו השתמשנו במעבדה במשך זמן רב למדי. זוהי צלחת פטרי עם שכבת אגר בתחתיתה. אגר הוא אידיאלי עבור זחלים למסע של מושכי כימיים מכיוון שהוא שומר עליהם לחים.

בשני צדי הפיתה, תמצאו מכסה נוסף העשוי מטפלון; כעת נחדיר isoamyl acetate לצד אחד, בעוד שהצד השני יישאר ללא ריח. לאחר מכן, נסגור את פיתח הפטרי, נמתין זמן קצר כדי שהריח יתפשט, ולאחר מכן נפתח את הפיתח. נכניס לכאן בעל חיים, ונאפשר לו לנוע למשך פרק זמן מסוים.

בדיקה זו מתבססת על ההנחה שעל ידי הוספת theodor בצד אחד של הצלחת, נוצר מפל (גרדיאנט) שמתבסס במהירות רבה ויישאר יציב למשך תקופת הבדיקה. כעת, הבעיה העיקרית היא שאיש מעולם לא הדגים שהמפל אכן קיים בצלחת. ייתכן מאוד שזמן קצר לאחר הוספת theodor, תהיה התפלגות הומוגנית של theodor בצלחת באופן שבו המפל יהיה רדוד מאוד, או שייתכן שנדרשות מספר דקות עד שהמפל יתבסס.

דבר זה יהיה תלוי, כמובן, בעיקר בלחץ האדים של התיאדור שבו משתמשים. הסוגיה השנייה קשורה למה שנמדד במהלך הניסוי. דמיינו שבעל חיים מתחיל מכאן, מה-X, ואחרי שלוש דקות נמצא בלוח הקצה הזה, ה-X האדום. כעת ישנן שתי גישות אפשריות.

דבר אחד שניתן לעשות הוא לתעד רק את המיקום הסופי של החיה לאחר פרק זמן מסוים, שלוש או חמש דקות. במקרה כזה, המידע היחיד שיירשם הוא מיקום ההתחלה והסוף, ואנו מאמינים שחשוב להשיג רזולוציה טובה לגבי התנהגות החיה לאורך זמן. לדוגמה, חיה עשויה להיות בקושי להניע את עצמה ממיקום ההתחלה למיקום הסיום, כפי שניתן לראות כאן, או שייתכן מאוד שביקרה באזור שסביב theodor למשך חלק משמעותי מהזמן וחזרה ממנו לפני סיום הניסוי.

המסקנה שנגזור משני המצבים הללו שונה מאוד. במקרה אחד, ייתכן שהחיה לא הגיבה לגירוי, בעוד שבמקרה השני היא ודאי הגיבה. שני השיפורים שאנו מנסים להשיג הם ראשית, בקרת הצורה והיציבות של הגרדיאנט השני בזירה.

שנית, עקבו אחר התנהגות בעל החיים בזמן אמת ושמרו את כל המידע הזה. ברצף הבא, סילביה תדגים בפניכם כיצד אנו מכינים דילול מדורג. שמי הוא S ti.

אני עוזר מחקר במעבדת ה-VAs העובד עבור material lui. היום אראה לכם כיצד להכין את החומרים עבור מערכת התאים שבה אנו משתמשים למעקב אחר בעלי חיים. הבעיה העיקרית במערכת התאים שלנו היא שאנו משתמשים בריח המפוזר באוויר.

פירוש הדבר הוא למשל, אם פלטות האגר שבהן אנו משתמשים אינן שטוחות, אתם עלולים לקבל תנודות בריכוז בין ניסויים שונים, מה שיכניס רעש למערכת. לכן, אראה לכם ואתן לכם טיפים קטנים כדי לנסות להפחית את הרעש במערכת. החומרים להכנת דילול הריח הם צנצנת זכוכית, רצוי מזכוכית כהה במקרה שאתם משתמשים בריחות הרגישים לאור, יחד עם אליקוט של הריח שבו אתם מעוניינים.

פיפטות זכוכית להכנת מנה זו ועזר מכני מתאים לפיפטה. לאחר מכן טיפים לפיפטה עם שמן פראפין, פיפטמן סטנדרטי ומבחנות קטנות לדילול. שוב, אלו חייבות להיות עשויות זכוכית ורצוי שיהיו כהות, ולאחר מכן מאזניים לביצוע מדידות מדויקות ולהפחתת רעשים בין ניסויים.

מכיוון שריחות הם נדיפים ביותר וחלקם רעילים, הפעולות מבוצעות בתוך מנדף. השלב הראשון בהכנת דילול של ריח הוא חלוקה למנות (aliquoting) של הריח שאתם עומדים לדלל. כדי להכין דילולים מדויקים ולמזער את השונות בין הניסויים, יש לשקול את כל הרכיבים.

נתחיל בסימון; נכין ריכוז של 1 M של ethyl butyrate. ראשית, מכינים את שמן הפרפין. שמן פרפין הוא צמיגי מאוד, לכן חשוב לנסות לטבול את קצה הפיפטה בתוך שמן הפרפין כמה שפחות, רק מספיק כדי שניתן יהיה לשאוב את שמן הפרפין ללא יצירת בועות.

לאחר מכן, מומלץ לנגב את עודפי שמן הפרפין מדפנות הבקבוק. שוב, מכיוון ששמן פרפין הוא צמיגי, חשוב מאוד להוציאו באיטיות אל תוך המבחנה. לאחר שפפלטתם את שמן הפרפין אל תוך הבקבוק, אל תשליכו את הטיפ מיד, כיוון שכמות נוספת תצטבר בתחתיתו.

מומלץ להכין גיליון חישובים לפני תחילת המיהול, שבו כבר מדדתם את נפח שמן הפרפין שעליכם להוסיף ואת משקלו, ולעשות את אותו הדבר גם עבור החומר הריחני, כולל משקלו. בדרך זו תוכלו לוודא באמצעות המשקל שיש לכם את כל שמן הפרפין הדרוש וגם את כל החומר הריחני. במידת הצורך, שפכו שמן פרפין נוסף ומדדו שוב עד שתגיעו למשקל הנכון.

ברגע שיש בידיכם את המשקל הנכון של שמן הבסיס, כל שעליכם לעשות הוא להוסיף את החומר הריחני תוך שימוש באותם עקרונות. טוב, כעת אראה כיצד להכין זחלים למעקב.

בדרך כלל אנו משתמשים בזחלים בני שישה ימים. אנו עושים זאת מכיוון שהם גדולים מספיק כדי שתוכנה שלנו תזהה אותם בקלות, והם עדיין פעילים מאוד. כדי לקבוע אם הזחלים ישנים מדי לשימוש במעקב, יש לבדוק אם ישנם זחלים המטפסים על הדפנות. אם ישנם זחלים המטפסים על הדופן, הרי שהם ישנים מדי ולא יהיו פעילים במיוחד.

השלב הראשון בהכנת הזחלים הוא טבילתם ב-15%sucrose. הסיבה לשימוש ב-15%sucrose היא שהזחלים יצופו בתמיסה זו, בעוד שהמזון יתמוסס בה חלקית או ישקע לתחתית. יש למזוג כמות מספקת של sucrose כך שייגמר כמעט אינץ' מתחת לחלק העליון של הבקבוק או המבחנה.

לאחר מכן קחו שפכטל. ניתן כבר לראות את הטיפולים צפים למעלה; חפרו בעדינות בתוך המצע כדי לשחרר בעלי חיים שחפרו לתוכו, סבבו אותו מעט כדי להפריד אותם מהמזון, ולאחר מכן המתינו מספר דקות. ברגע שהמזון והזחלים הופרדו כראוי, קחו צלחת פטרי מסומנת מראש ושפכו אותם לחלק העמוק יותר.

שמרו את המכסה של פטריית הפטרי, שכן תמלאו אותה במים ותשתמשו בה כמיכל לזחלים שעוקבנו, כדי שתוכלו להבדיל בין אלו שכבר עקבתם אחריהם לאלו שטרם עקבתם אחריהם. כעת, לאחר ששפכתם את הזחלים לתוך פטריית הפטרי, עליכם להמתין 30 דקות עד שהם יסתגלו לסוכרוז ויגיעו למצב של הרעבה. המשמעות היא שהם יגיבו טוב יותר במערך המעקב במהלך 30 הדקות שבהן הזחלים מסתגלים.

השלב עם הסוכרוז הוא זמן טוב להכין את הפלטות למעקב. אלו הם מכסים של פלטות עם 96 בארות. ניתן לרכוש אותם בנפרד, וזהו תמיסת agarose בריכוז 3% שכבר חוממה.

אנו משתמשים בריכוז של 3% מכיוון שהוא מונע מהזחלים לחפור, אך הוא גם דחוס מספיק כדי שיוכלו ללכת עליו ולהישאר לחים על פני כל פיתח. יש להעביר בפיפט 25 ml של agarose. חשוב לנסות להימנע מיצירת בועות גדולות בתוך הג'ל.

חשוב גם להניח את הצלחות על משטח ישר, אחרת עלולים להיווצר ג'לים בשיפוע שעלולים להשפיע על התנהגות הזחלים. לאחר שהג'ל התקשה, נערם את המכסים ועוטפים אותם בניילון נצמד כדי למנוע מהם להתייבש. פעולה זו אמורה לשמור עליהם במצב תקין לצורך מעקב במשך מספר ימים.

ברצף זה, אציג בפניכם את הבדיקה ההתנהגותית שלנו, השונה מעט מבדיקת פטריות הפטרי, עליה סיפרתי לכם קודם לכן. אתם תזדקקו למכסים של פלטות 96 בארות, כמו גם לאלו המכילים את שכבת האגרו. הבדיקות מורכבות משלושה מכסים, המונחים זה על גבי זה.

השכבה הראשונה ריקה ומשמשת אך ורק כדי לבודד את המערכת מהמשטח שעליו היא מונחת. השכבה השנייה מכילה את משטח ה-Diego agro. כאן ימוקמו בעלי החיים על פני השטח, וכעת, כפי שאראה לכם בהמשך, נחדיר את ה-theodor אל תוך הצלחת.

חשוב להשתמש במכסה רענן וחדש בכל פעם שמעמיסים את theodor. זאת כדי למנוע זיהום מניסוי אחד למשנהו. תזדקקו גם לדילול נוסף.

בדרך כלל איננו משתמשים בצבע כדי להעמיס את theodor, אך כאן אשתמש בו לצורך ההדגמה. זהו ריכוז גבוה של theodor. בעוד שזהו מידלל מאוד, מטרתי תהיה ליצור מדרגה (gradient) לאורך קו.

נא לומר שורה זו, כאשר אנו שואפים להשיג ריכוז העולה משמאל לימין. כדי לבצע זאת, אשתמש במספר טיפות מסודרות בטבעת העיבוי בריכוזים עולים. אתחיל בריכוז הגבוה ביותר, שיוצב בקצה.

חשוב לפזר זאת בטבעת. כעת אני ממשיך לריכוז הבא, המדולל פי שניים בהשוואה לראשון, ומניח אותו בטבעת זו. כך שאין, יש לי שש טיפות.

הראשון מכיל ריכוז של נניח 1. השני הוא בריכוז של 0.5, מחצית מהריכוז של הראשון. השלישי הוא בריכוז של 0.25, וכן הלאה.

לפיכך, יש לנו סדרה גיאומטרית לאורך הקו. השלב הבא כולל היפוך של המכסה על פני השטח של ה-AAL, וכעת, בשל מתח פנים, כל הטיפות נשארות תלויות מהחלק העליון של המכסה. פיתחנו טכניקה המבוססת על ספקטרוסקופיה באינפרא-אדום כדי למדוד את כל הריכוזים בצלחת.

באמצעות יישום טכניקה זו, הצלחנו להראות שאם קיימת סדרה גיאומטרית לאורך קו הריח כאן, מתקבלת ריכוז של הריח לאורך המסלול העולה באופן מעריכי כפי שמוצג כאן, ולאורך רוחב הפלטה נקבל פרופיל שהגיע לשיאו בדיוק מתחת לקו הריח. כך נראה המבנה הגיאומטרי בפועל של המדרג.

אם בוחנים את ריכוז התיאודור באוויר, הנקודה החיובית היא שהצלחנו להראות שהגיאומטריה של הגרדיאנט יציבה למשך 15 דקות לפחות. לאחר סגירת המכסה העליון, ממתינים 30 שניות כדי לאפשר לגרדיאנט להתבסס. לאחר מכן, מכניסים את בעל החיים לזירה.

החיה מוכנסת תחת קו הקצה השני בין עמדה שלוש לארבע; אנו משתמשים בסיכה קטנה כדי להעביר את הזחלים מתמיסת הסוכרוז למשטח האגר. ההעברה מתבצעת על ידי דייג של זחל סביב ראש המסמר. אנו פותחים במהירות את המכסה, והזחל מונח על פני השטח של האגר.

לאחר מכן נסגור את המכסה. חשוב לצמצם ככל הניתן את הזמן שבו המכסה נשאר פתוח. בשלב הבא, נבצע הקלטה של תנועת החיה למשך שלוש או חמש דקות.

ההקלטה בפועל מתבצעת. בהגדרת מעקב זו, יש לנו מצלמה המחוברת למחשב. תוכנת מעקב התמונה שבה אנו משתמשים היא Aton vision מבית Nordis, כדי לאסוף מידע על תנועת החיה ולאחסן אותו כקובץ דיגיטלי.

כעת אנו עומדים להתחיל בניסוי ההתנהגותי. ברשותנו המכסה עם שכבת ה-aro. ברשותנו המולתות.

דיאגו תקוע במכסה הראשון. לפני טעינת theodor, חשוב לבצע וורטקס לכל מבחנה. אנו משתמשים בדילול שלנו, כאשר הדילול הנמוך ביותר נמצא משמאל והגבוה ביותר כאן מימין.

כל שש הטיפות יוטענו על הפלטה בו-זמנית. כדי למנוע איבוד ריח, נשתמש כאן בפיפט רב-ערוצי; נלקח 10 µL של הריח מכל דגימת דילול, והריח יוטען בו-זמנית. לאחר ההטענה, המכסה יהפוך כעת על פני השטח של האגרוס.

המדרג נוצר בצלחת במהלך 30 השניות האחרונות, כפי שהראיתי לכם קודם לכן. כעת אני עומד להכניס בעל חיים למשטח ה-Diego. ברגע שבעל החיים הוכנס, אני מתחיל בהקלטה.

החיה נמצאת כאן ותנועתה מנוטרת כעת. כפי שניתן לראות, החיה עוקבת אחר קו הריח ופונה לעבר נקודת הריכוז הגבוהה ביותר של הגרדיאנט. זכרו כי הריכוז עולה משמאל לימין בצורה מעריכית.

כפי שניתן לראות, כיוון התנועה מתוקן ללא הרף. ביחס לגירוי, בעל החיים הגיע כעת לנקודה בעלת הריכוז הגבוה ביותר של הגרדיאנט, ואנו מוציאים אותו מהצלחת. בעל החיים מועבר לצלחת אחרת כדי להבטיח שאיננו עוקבים אחר אותו פרט פעמיים ברצף.

לאחר שמכניסים זחל חדש ומתחילים הקלטה רעננה, אלה הם הכללים שבהם אנו פועלים למעקב. אנו עוצרים את המעקב ברגע שהחיה מגיעה לשורת הריכוז הגבוה ביותר בלוחית, המתאימה לזו, לזו כאן. כמו כן, אם חיה פוגעת בדופן, המעקב מופסק מכיוון שברצוננו למנוע כל הפרעה.

השאלה הראשונה שבדקנו הייתה פשוטה למדי. רצינו לדעת האם בעל חיים מסוגל להריח ריח מסוים בריכוז נתון. כדי לבצע בדיקה כזו, מה שאנו עושים בדרך כלל הוא להשתמש במקור ריח יחיד במקום במספר מקורות.

דבר זה מאפשר לכם דרגת חופש אחת בשינוי הריכוז בטיפה של Theodor. כך למשל, כאן יש לכם טיפה בריכוז גבוה, וכאן יש לכם טיפה בריכוז נמוך. מה שאנו עושים בדרך כלל הוא להכניס את בעל החיים למשטח של Diego בדיוק מתחת לטיפה של Theodor, ולבדוק האם בעל החיים מסוגל לזהות את נוכחותה ולהישאר בסביבתה.

כעת אשמח להדגים שימוש מתקדם יותר במערך הבדיקה שלנו. דמיינו שיש לכם טיפה אחת של סדר, ובדוקו מספר מסלולים המוצגים כאן כחפיפה, כאשר ישנם שלושה מהם. יש לכם פרט אחד אשר מייצר את העקבה הירוקה הזו.

ישנו מסלול כתום זה שפחות מרכזי, ולאחר מכן ישנה מסלול ורוד המייצג בעל שנראה כמי שמקיף את המקור. אנו מאמינים שיש מידע רב שניתן להסיק לגבי פרטי המסלולים. מסיבה זו, אנו מייבאים את המסלול כסדרה של מיקומים ל-matlab, ומבצעים את הניתוח באמצעות matlab.

כאן מוצג המרחק מהמקור, ככל הנראה כפונקציה של הזמן. עבור שלושת המסלולים שהוצגו קודם לכן, ניתן לראות את המסלול הירוק, שנותר קרוב מאוד למקור. ניתן לראות את המסלול הכתום, המציג רמות רעש גבוהות משמעותית.

ולאחר מכן יש את המסלול הסגול, אשר באופן מעניין הראה שהחיה עזבה את המקור כדי להישאר במרחק מסוים, מה שכנראה תאם ריכוז שהיה אופטימלי. כאן אתם רואים איור של 10 מסלולים של חיות שאינן מסוגלות להריח. אלו הם מוטנטים או מוטנטים של three B, שאינם מריחים.

וכפי שניתן לראות, כל המסלולים הללו ממחישים כי בעלי החיים נכשלו בזיהוי מקור הריח ופשוט התרחקו ממנו. כעת, בניגוד מוחלט לכך, הקלטנו כאן 10 מסלולים רצופים של בעלי חיים מסוג white tap. בעלי חיים אלו מסוגלים כמובן להריח, וכפי שניתן לראות, כולם מצטברים ממש מתחת למקור הדאודורנט.

20 המסלולים שהוצגו כעת נרכשו למעשה מבלי לדעת את זהותן של החיות. דבר זה מדגים את היעילות והמהימנות של הבדיקה שלנו. כדי לקבוע אם מוטנטים מסוימים מסוגלים להריח כאן תוך שימוש במדרג מעריכי (Exponential gradient), אנו מייצרים מספר עקבות ורוצים להבין עד כמה החיות מסוגלות לעקוב אחר הגירוי בקצה השני.

כעת אראה לכם 15 מסלולים שהוקלטו בנפרד, וכפי שניתן לראות, בעלי החיים מבצעים עבודה מצוינת במעקב אחר הגירוי תחת קו הקצה השני. כעת נרצה להמשיך בבקרת פשוטה. ייתכן מאוד שבעלי החיים במעבר המעריכי עקבו אחר הקו פשוט משום שהיה שם גירוי כלשהו ללא קשר לריכוזו, ובעלי החיים פשוט הלכו בקו ישר.

כדי להראות שהם אכן מחשבים את הריכוז או גורם הקשור לריכוז ומשתמשים בו כדי להנחות את תנועתם, הגדרנו כעת גיאומטריה זו, הדומית לגג. הזחל מוכנס כאן כרגיל, והצפי שלנו הוא שהם ינועו לאורך הקו, יזהו לאחר נקודה זו שהריכוז יורד ויחזרו אליה. ביצענו את הבדיקה עם חמישה בעלי חיים.

אספנו את המסלולים, וכעת אנו מציגים אותם כשהם מ superimposed על השקף הזה. וכפי שניתן לראות, בעלי החיים התחילו מכאן, נעו לאורך הקו, ולאחר מכן חקרו את האזור המתאים לריכוז הגבוה ביותר ונשארו בעיקר שם. הדבר מרמז בבירור כי הם מסוגלים לחשב ריכוזים אחרים בזמן אמת באמצעות בדיקת המקור הבודד.

הצלחנו לשאול בעיקר שאלה מרכזית אחת: האם בעל חיים מסוגל לזהות ריח בריכוז מסוים באמצעות מכשיר רב-מקורות? כעת, יש לנו גמישות רבה יותר בשינוי צורת הגרדיאנט ובקביעה האם בעל החיים מסוגל להשתמש במידע זה או לא.

ברצוני להדגים רעיון זה באמצעות ביצוע ניסוי פשוט. במדרוגים שהקמנו עד כה, הייתה לנו צורה מעריכית לאורך העדשה. כעת השאלה היא, אם נאתגר את ה-al יותר על ידי הגדלת הריכוז באופן ליניארי לאורך העדשה, האם הם עדיין יוכלו למצוא את דרכם אל קו הקצה השני?

גרף זה מייצג את שני סוגי הגרדיאנטים. בדקנו את הגרדיאנט האקספוננציאלי בסגול ואת הגרדיאנט הליניארי בירוק. זהו הגרדיאנט הליניארי, ואני עומד לכתוב את הריכוזים השונים של isam acetate המדולל ב-paren oil.

זוהי סדרה חשבונית. נוצר כאן מדרג ריכוזים ליניארי וכפי שניתן לראות, השיפוע הוא רדוד למדי בהשוואה למדרג הריכוזים האקספוננציאלי כאן, שבו ריכוז הקצוות הוא גם הוא 0.5, אך הוא עולה ל-0.03. השאלה היא, האם תאי navi מסוגלים לבצע chemo attacks כאשר הם ניצבים בפני מדרג ריכוזים רדוד שכן?

כאן מוצג הריכוז בפועל של אצטט שנעשה בו שימוש בשישה טיפות עבור המדרג המעריכי ועבור המדרג הליניארי. כפי שניתן לראות, למרות שהריכוזים הגבוהים ביותר זהים בשני המקרים עבור המדרג הליניארי, הריכוז הנמוך ביותר כאן הוא גבוה למדי. ביצענו את הניסוי עם המדרג הליניארי, וכאן מוצגות 15 מסלולים של בעלי חיים מסוג wild type, ואנו סבורים שזה ברור למדי שבעלי חיים אלה היו מסוגלים לזהות את המדרג הליניארי ולעקוב אחר אות זה לאורך קו הריח.

אני סבור שהנקודה שלנו ברורה. לפני שנסיים כאן, ברצוני לדבר בקצרה על כיוונים עתידיים עבור מערך המעקב הזה. למרות שמערך מעקב זה מאפשר לבצע דברים מעניינים רבים, למשל, צפייה בהתנהגות מורכבת בזחלים לאורך תקופה ארוכה ורחבה יותר, יש לו כמה מגבלות.

לדוגמה, אתם מוגבלים לגודל של הצלחת, מה שמגביל את משך הזמן שבו ניתן לעקוב ואת ההתנהגויות המורכבות שניתן לבחון. לכן, יהיה זה רצוי אם נוכל לפתח מערכת שבה הצלחת תהיה גדולה יותר, או שלא תהיו מוגבלים כלל על ידי גבולות הצלחת. בעיה נוספת היא שבעזרת התוכנה שברשותנו כעת, קשה לעקוב אחר יותר מבעל חיים אחד בו-זמנית, ולכן לא ניתן לצפות בהתנהגויות של אוכלוסיות בזמן אמת.

היבט מעניין נוסף של ההתנהגות שאיננו יכולים לבחון באמצעות מערך זה הוא התנועות התלת-ממדיות בפועל של הזחלים במרחב. בעת מעקב אחר בעלי החיים, תבחינו כי לדוגמה, כאשר הם מגיעים לטיפת ריח, הם עשויים להרים את ראשם או להניע את ראשם מצד לצד בניסיון לזהות שינויים בריכוז. ייתכן שדבר זה אינו אפשרי במערך הספציפי שלנו כעת, ולכן יהיה זה רצוי לפתח פתרון שיאפשר לנו לעשות זאת.