טכניקות יעילות לדגימה מקיפה של רקמות נגישות בקסנופוס בוגר

עבודה זו נועדה ליצור שיטה ניתנת לשכפול לאיסוף מהיר של חדר הלב Xenopus, תא המטען העורקי, אונת הכבד השמאלית, כיס המרה, הריאות, הלבלב, הטחול, הגרון, הוושט, הקיבה, המעיים, האשכים, גוף השומן, צינור הביצית, הכליות המזווגות, מקלעת הסיאטית, העור, התימוס והעין כולה תוך פחות משעה. אתגר ניסיוני הוא אופטימיזציה של טריות הרקמות. מסיבה זו, הפרוטוקול תוכנן להסתיים תוך פחות משעה. על ידי מתן עדיפות לטריות הרקמות, ניתן להשתמש ברקמות אלה להשלמת ניתוחים ביוכימיים באיכות גבוהה כגון פרוטאומיקה, תוך מזעור מספר בעלי החיים המשמשים. בעתיד, נכתוב פרוטוקול על רקמות שקשה יותר לגשת אליהן, כמו המוח, השריר והעצם.

[מדריך] כדי להתחיל, מקם את הצפרדע המורדמת להליך הדיסקציה והצמד את הגפיים. בעזרת מספריים לדיסקציה חותכים את העור לאורך קו האמצע, ואז לרוחב ליצירת שני דשי עור. בעזרת מלקחיים, אחוז בלינאה אלבה ומשוך אותה הרחק מהחלל הקולומי. חותכים בזהירות את השרירים לכיוון הראש ויוצרים שני דשים של דופן החלל. צמצם את עצמות הקורקואיד כדי לקבל גישה טובה יותר ללב. מותחים את קרום הלב, מחוררים אותו ומקלפים אותו בחזרה כדי לחשוף את שלושת חדרי הלב. כעת חתוך את האורקלים בצומת שבו הם פוגשים את החדר ואת תא המטען העורקי. השתמש במלקחיים כדי לתפוס את קודקוד החדר וחתוך אותו ממש מתחת לצומת שלו עם תא המטען העורקי, והשאיר שוליים. תוך התבוננות בהתפצלות תא המטען העורקי, משוך את תא המטען מתוח וחתך את גזעי אבי העורקים מיד לאחר הנקודות שבהן הם מתפצלים לקשתות. לאחר מכן, אחוז בשפה של אונת הכבד השמאלית והרם אותה בעדינות כדי לחשוף את צינורות הכבד והציסטיות. דגימו את שני השלישים התחתונים של האונה השמאלית מתחת לקבצים מצורפים אלה. לאחר זיהוי כיס המרה, אחוז ומשוך אותו הרחק מאונה הכבד הימנית וחתך את חיבורו. ואז תפסו את קודקוד הריאה ומשכו אותו מתוח. חותכים את הריאה בגבול שבו היא עוברת לסימפונות. הסר את הסימפונות מהגרון. להסרת שחלות, העבר את אונות השחלה לצדדים שלהן כדי לדמיין את אתרי ההתקשרות הגחון לכליות. בעזרת מספריים הסר את השחלות קרוב לכליות מבלי לגרום נזק. לאחר מכן, בדוק את האונה הקדמית של הכבד, המכונה גם האונה החציונית, וצפה בחיבור שלה לתריסריון דרך המזנטריה. השתמש במספריים לכריתת אירידקטומיה כדי לנתק את המזנטריה ואת רצועת הכבד בתריסריון. המסה הבשרנית שנותרה היא הלבלב וצינור המרה המשותף. נתק את החיבור של הלבלב וצינור המרה המשותף מאונה הכבד הקדמית, והשאיר שוליים. אחוז בבטן עם מלקחיים עם שיניים וקצה אחד של הלבלב עם מלקחיים לרקמות. בהגדלה, יש להקניט בעדינות את הלבלב הרחק מהקיבה. לאחר מכן זהה את הטחול ודגום אותו על ידי חיתוך הצמדתו לצפק. אחוז בגרון בקצהו התחתון והתחל להרים אותו מהחלל, תוך חיתוך כל חיבורי הצפק כאשר הם נתקלים בהם. ככל שהגרון מוגבה, השתמש במספריים מעוקלים לכריתת הוושט כדי להפריד ולחתוך בזהירות את רקמת הוושט מהגרון. לאחר מכן משוך את הגרון כלפי מטה וחתוך אותו מחלל הפה תוך ניתוק החיבורים הגלויים שנותרו. שימו לב לעקמומיות הקיבה, המבדילה אותה מהוושט ומההגבלה הפילורי המסמנת את תחילת המעי. חותכים את תעלת העיכול ממש לפני עקמומיות הקיבה כדי להפריד אותה מהוושט. פתח את הפה ואתר את הפתח המשותף של צינורות האוסטכיוס על גגו. תוך שמירה על הפה פתוח, משוך את הוושט כדי להתבונן בהתקשרותו. לאחר מכן חותכים את הוושט מחלל הבוקאלי ממש מתחת לפתח האוסטכיה. ואז הסר את הוושט. עכשיו תפסו את הקיבה וחתכו אותה בהגבלה הפילורית, שם היא מתחברת לתריסריון. משוך את המעי הגס מתוח וחתוך אותו קרוב ככל האפשר לקלואקה. הסר את המעיים, וחתוך את כל החיבורים הצפוניים הגלויים לאורך הדרך. אם הצפרדע היא זכר, זהה את האשכים והסר אחד באמצעות מספריים לכריתת אירית, כדי להבטיח שהכליה תישאר שלמה. הפרידו את גופי השומן ומקמו אותם בצדדים שלהם כדי לחשוף את החיבור הצפק ליד הכליה. אחזו בבסיס גוף שומן וחתכו אותו מהצפק, והשאירו שוליים. כדי להסיר את שלפוחית השתן, חותכים קרוב ככל האפשר לקלואקה. אם הצפרדע היא נקבה או שיש לה שריד ביצית גלוי, אחוז בקצה התחתון של צינור הביצית ומשוך אותו הרחק מהקלואקה. חותכים את צינור הביצית ליד הקלואקה ואז משוכים אותה החוצה מהחלל הקולומי, ומנתקים את כל החיבורים הצפקיים. בעזרת מלקחיים, אחוז בכליות הזוגיות הרטרופריטונאליות וחתך את הצפק בבסיסן. הרם את הכליות מהחלל וניתוק כל חיבורי הצפק. לאחר מכן, אחזו בצרור העצבים במקלעת הסיאטית בעזרת מלקחיים וחתכו את העצבים במקום בו הם יוצאים מהחלל הקולומי. הרם את צרור העצבים וחתוך אותו שוב בחיבורו לעמוד החוליות. כעת הסר את הסיכות והפוך את החיה על צד הגחון שלה. הצמד מחדש את הגפיים ובחר גפה אחורית אחת לדגימה, הצמד את כף רגלה. יש לכרות קטע עור בצורת שקד מעל אזור הגסטרוקנמיוס והטיביו. אחוז בעור הגב ובצע חתך רוחבי סביב החלק האמצעי של החיה. ליצירת חתך מעגלי רציף. הסר את הסיכות, אבטח את הרגליים ביד אחת והשתמש במלקחיים עם שיני חולדה כדי לאחוז בעור הגב הקדמי. עור החיה על ידי משיכה בכוח של עור הגב מעל הראש והזרועות. כדי לדגום את התימוס, זהה את המסה השומנית המכסה את מפרק הלסת וחתוך את הקצה האחורי של המסה במקום שבו הוא מתמזג עם רקמת השריר הוורודה. השתמש במספריים לכריתת אירידקטומיה כדי לחתוך את המסה מהעצם וחושף אשכולות מלנופור, אם קיימים. לאחר מכן חתוך את הרקמה כדי לחסל כל שריר או סחוס. לאחר מכן, החזר את החיה ובחר עין. הכנס מספריים מעוקלים לכריתת אירית למסלול וחתוך בעדינות סביב עקמומיות העין כדי לשחרר חיבורי שרירים. לבסוף, החלק את המספריים עמוק יותר לתוך המסלול וחתוך את עצב הראייה מאחורי העין. עקרו את העין מארובתה, וחתכו את כל השרירים שנותרו. על ידי ביצוע הליך זה, כל האיברים העיקריים חולצו, נשטפו ונחתכו תוך שעה אחת מהמתת החסד.