Contrazione Arteria mesenterica e Studi Relax Utilizzando Myography automatica Wire

Questa procedura utilizza ratti sensibili e resistenti al sale per confrontare la reattività delle arterie di resistenza mesenteriche alla tensione indotta da fenilefrina in presenza di calcio extracellulare. Questo viene ottenuto isolando innanzitutto l'arcata mesenterica dagli animali ed estraendo i rami delle arterie di resistenza. Successivamente, un primo dei due fili di acciaio inossidabile viene inserito attraverso un breve segmento dell'arteria dissezionata e il vaso viene montato nella camera del miografo.

Successivamente, un secondo filo di acciaio inossidabile viene inserito nel lume del vaso in parallelo al primo filo. Poi, il vaso montato viene allungato fino a raggiungere una circonferenza interna normalizzata. L'ultimo passaggio della procedura consiste nel riattivare il vaso sottoponendolo a ripetute applicazioni di fenilefrina e rilassandolo con applicazioni cumulative di calcio.

In definitiva, i risultati mostrano variazioni della tensione nel vaso, che possono essere convertite in una curva di risposta al calcio e utilizzate per determinare i valori di CE 50. A scopo comparativo. Abbiamo avuto per la prima volta l'idea di utilizzare questo metodo quando abbiamo scoperto che la rete nev del ratto delle batterie Masonary esprimeva un recettore sensibile al calcio di tipo gpro rame.

Questo può essere studiato nello stesso modo dei recettori AIC amari, che vengono attivati da un agonista. In generale, le persone nuove a questo metodo potrebbero incontrare difficoltà poiché l'endotelio e gli strati di muscolo liscio sono ridotti. I vasi sanguigni si danneggiano facilmente.

Se ciò si verifica, le proprietà meccaniche di questi vasi possono essere compromesse. Per iniziare, preparare l'area di lavoro e gli strumenti chirurgici. Posizionare un animale anestetizzato in posizione supina e detergere l'addome con alcol.

Dopo aver eseguito una laparotomia mediana, utilizzare le forbici per rimuovere circa 85 centimetri di intestino, inclusa l'arteria mesenterica superiore. Recidere l'estremità prossimale vicino al piloro e l'estremità distale in prossimità della giunzione ileocecale. Posizionare il segmento escisso in una capsula di Petri rivestita contenente soluzione salina fisiologica o PSS a temperatura ambiente.

Fissare l'estremità prossimale dell'intestino a destra, quindi fissare il resto dell'intestino in senso antiorario. Successivamente, dissezionare un segmento dell'arteria mesenterica contenente il ramo due e tre e un pezzo di intestino dall'estremità prossimale. Identificare il punto di biforcazione a forma di V dell'arteria mesenterica e dissezionarlo dalla vena.

Utilizzare pinzette per rimuovere delicatamente il tessuto adiposo e connettivale, evitando il contatto diretto con l'arteria. Per iniziare il montaggio del vaso, tagliare due segmenti di arteria lunghi circa due millimetri. La punta di un filo di acciaio inossidabile privo di tungsteno lungo quattro centimetri e di 40 micrometri di diametro può essere utilizzata per aprire la luz dell'arteria.

Quindi utilizzare pinzette fini per inserire il filo nella luz di ciascuna arteria. Avendo cura di non danneggiare l'endotelio, riempire la camera del trapianto miografica con PSS a 37 gradi Celsius. Utilizzare le pinzette per trasferire il segmento vascolare infilato nella camera.

Successivamente, trasferire il segmento vascolare prossimale escisso nella camera del miografo e spostare l'estremità lungo il filo per inserirla nel vaso. Evitare di stirare il vaso. Fissare l'estremità vicina del filo in senso antiorario sotto la vite di fissaggio anteriore sulla mandibola destra collegata al micrometro.

Prendere con pinzette l'estremità libera del filo e fissarla in senso orario sotto la vite di fissaggio distale sulla mascella destra, assicurandosi che il segmento del vaso lungo il filo sia posizionato nella fessura tra le mascelle senza entrare in contatto con la mascella stessa. Ruotare le mascelle allontanandole tra loro. Allineare il secondo filo parallelamente al vaso e inserirlo nell'estremità distale della luz.

Introdurre delicatamente il filo all'interno della cavità del segmento vascolare con un unico movimento, utilizzando il filo già posizionato come guida. Tenere il filo a circa un centimetro dal vaso per evitare di allungarlo durante la manovra ed evitare di toccare l'endotelio. Avvitare le ganasce tra loro ed assicurarsi che il secondo filo di montaggio passi sotto il primo, che è già fissato sul lato destro.

Fissare l'estremità vicina del secondo filo in senso orario sotto la vite di fissaggio anteriore della mandibola sinistra collegata al trasduttore. Fissare l'estremità lontana del filo sotto la vite di fissaggio sulla mandibola sinistra e stringere per tendere il filo. Una volta completato il montaggio, attendere 30 minuti per l'equilibrazione a 37 gradi Celsius.

Dopo l'equilibrio, il motore viene ripristinato dal menu di montaggio e viene avviata la procedura di normalizzazione, che allunga il vaso fino a raggiungere una circonferenza interna normalizzata. Per iniziare, aprire il menu di normalizzazione e impostare la pressione transmurale obiettivo a 13,3 kilopascal. Successivamente, impostare la durata di ciascun passaggio di normalizzazione a 60 secondi.

Il rapporto tra IC uno e IC 100 deve essere pari a 0,9 e la calibrazione IP deve essere impostata su due stelle delta. Misurare la lunghezza dell'arteria mesenterica montata utilizzando le letture dell'oculare del microscopio quando le linee sottili sono posizionate sulle estremità e sui neuroni del segmento vascolare. Dopo la normalizzazione, i vasi vengono riattivati eseguendo un avvio standard costituito da una serie di stimolazioni e periodi di lavaggio.

Prima di tutto, sostituire il coperchio della camera miografica e iniziare l'aerazione con una miscela di 95% di aria e 5% di anidride carbonica. Riempire la camera con PSS fresco contenente 100 micromolar di acido ascorbico. Indurre la contrazione del vaso con cinque micromolar di fenilefrina (PE) per cinque minuti e lavare quattro volte con tampone PSS. Dopo l'ultimo lavaggio, riempire nuovamente la camera con PSS e attendere tre minuti prima di ricaricare la camera con PSS e indurre una nuova contrazione con PE. Come mostrato in precedenza, l'arteria è ora pronta per l'esperimento.

Misurare il rilassamento dei vasi contratti aggiungendo in modo cumulativo concentrazioni crescenti di cloruro di calcio. Questa tabella mostra che le tensioni di base dopo l'applicazione di fenilefrina variavano tra ratti Wistar DS o Doll sensibili al sale e ratti DR o Doll resistenti al sale. Questo tracciato ottenuto da un ratto Wistar mostra il rilassamento delle arterie contratte da PE mediante aggiunte cumulative di calcio; il rilassamento risulta gravemente compromesso nei tessuti dei ratti DS rispetto ai ratti Wistar e rispetto ai ratti DR. Come mostrato qui, le differenze nella sensibilità al calcio possono essere osservate nelle curve di risposta al calcio e nuovamente nel calcolo dei valori di CE 50.

Infine, i ratti DS mostrano una riduzione dell'espressione del recettore del calcio nelle arterie rispetto ai ratti Dr.Rats una volta padroneggiata la tecnica. Questa tecnica può essere eseguita in due ore se svolta correttamente. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come confrontare la reattività vascolare di piccole arterie enteriche a composti esogeni in condizioni isometriche.