L'alcool polivinilico Sponge impianto modello

L'obiettivo generale di questa procedura è utilizzare una spugna di alcol polivinilico per modellare la guarigione delle ferite nei topi. Questo viene ottenuto innanzitutto idratando e caricando la spugna per l'innesto. Successivamente, la spugna viene inserita in una tasca tra il muscolo addominale e la pelle del topo.

Dopo l'impianto, ogni spugna può essere iniettata con un trattamento. L'ultimo passaggio consiste nel rimuovere le spugne dal topo. Infine, possono essere eseguite analisi istologiche, colorazioni e saggi quantitativi per osservare modifiche e variazioni nel processo di guarigione della ferita.

Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sul processo di guarigione delle ferite, può essere applicato anche ad altre aree di studio, come l'angiogenesi tumorale, il rilascio di farmaci e la sopravvivenza delle cellule impiantate. Per iniziare l'innesto, idratare le spugne mediante agitazione notturna in una soluzione acquosa di cloruro di sodio allo 0,9%. Quindi sottoporre a sterilizzazione in autoclave 75 millilitri della sospensione di spugna idratata per 25 minuti a 121 gradi Celsius.

Per sterilizzare le spugne, posizionare la soluzione per spugne in autoclave in una cappa sterile; quindi utilizzare pinze sterili per prendere una spugna, comprimere la spugna con le pinze ed usare una punta da vuoto per rimuovere dalla spugna la maggior quantità possibile di soluzione. A questo punto, posizionare la spugna ben strizzata in una piastra per colture cellulari, avendo cura di lasciare spazio tra le spugne, e pipettare direttamente al centro di ogni spugna la soluzione da applicare. Quindi premere delicatamente sulla spugna con la punta della pipetta per favorire l'assorbimento della soluzione da parte della spugna.

Una volta caricati tutti i dischetti, conservare la piastra in ghiaccio fino al momento dell'impianto nei topi. Dopo aver confermato la sedazione mediante il test del riflesso da pizzicotto, posizionare il topo in posizione supina all'interno di un cono nasale. Quindi, utilizzando un rasoio elettrico, rimuovere un'area di peli di dimensioni pari a un pollice quadrato sul lato ventrale inferiore del topo, al di sotto della gabbia toracica.

Pulire la zona rimuovendo i capelli tagliati. Sterilizzare l'area rasata con Betadine, seguito da alcol al 70%. Successivamente, tenere la pelle in tensione.

Utilizzare il bisturi per praticare un'incisione verticale, una volta e mezza a due volte il diametro delle spugne da inserire, facendo attenzione a non tagliare attraverso la cavità corporea. Utilizzare le pinzette per afferrare il bordo della pelle.

Quindi utilizzare forbici di Metzenbaum per separare lentamente la pelle dal muscolo su entrambi i lati dell'incisione. Estendere la tasca lungo tutta la larghezza del topo e dalla gabbia toracica fino alle zampe posteriori. A questo punto, utilizzare la pinzetta per prendere la prima spugna da posizionare nell'animale, afferrandola lateralmente.

Quindi trasferire la spugna su una coppia di pinzette dritte in modo che venga tenuta dall'alto e dal basso. Successivamente, afferrare e sollevare il bordo della pelle con un'altra coppia di pinzette ed inserire lentamente la spugna, evitando di toccare la pelle o il muscolo sottostante. Dopo aver inserito tutte le spugne, utilizzare un paio di pinzette per tenere insieme entrambi i lati dell'incisione, quindi far passare il filo di sutura attraverso entrambi gli strati della pelle.

Stringere il primo nodo appena sufficiente per chiudere i margini della pelle e completare il nodo quadrato con un altro nodo dalla direzione opposta, questa volta tirando bene il nodo. Quindi annodare altri due nodi quadrati per completare la sutura.

Posizionare punti di sutura aggiuntivi per chiudere completamente l'incisione. Infine, rimuovere l'animale dal sistema di anestesia e monitorarlo fino al ripristino della coscienza. Il topo dovrebbe iniziare rapidamente a muoversi e tornare alla mobilità preoperatoria.

Cominciare riempiendo una siringa con la soluzione desiderata e attaccare un ago da 28 gauge alla siringa. Dopo aver confermato la sedazione mediante pizzicotto al dito del piede, inserire l'ago nell'animale con un angolo di 45 gradi attraverso la cute al centro delle spugne per assicurarsi che l'ago sia all'interno della spugna. Sollevare lentamente l'ago in posizione verticale.

Se l'ago è nella spugna, la spugna si solleverà insieme all'ago. Iniettare quindi lentamente la sostanza nella spugna ed estrarre l'ago. Dopo che l'animale è stato sacrificato, afferrare la pelle con un paio di pinzette ed effettuare un'incisione vicino alla spugna desiderata.

Infine, separare con cura le spugne dalla capsula circostante, evitando di prelevare tessuto aggiuntivo intorno alla spugna rimossa. Le spugne possono essere conservate in diverse condizioni a seconda del tipo di analisi che verrà effettuata. Per la sezionatura, le spugne recuperate possono essere incluse in un mezzo di congelamento, come il composto per temperatura di taglio ottimale, oppure collocate in formalina al 10% per l'inclusione e la sezionatura in blocchetti di paraffina, come è stato fatto per queste spugne colorate con ematossilina e eosina.

In queste sezioni di spugne trireme colorate, i migliori risultati per il taglio si ottengono quando la spugna viene divisa a metà lungo il diametro, come mostrato qui, e poi inclusa con la superficie tagliata rivolta verso il basso. Come illustrato qui, le sezioni della spugna devono essere effettuate in modo che l'intera larghezza della spugna sia presente in questa figura. La spugna a sinistra è stata inclusa o sezionata in modo errato, come dimostrato dal bordo del tessuto alterato lungo il lato destro della sezione, mentre la spugna integra a destra è stata processata correttamente.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come preparare, impiantare, iniettare e rimuovere spugne di alcool polivinilico per lo studio della guarigione delle ferite nei topi.