Shock Wave Application to Cell Culture

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di evitare effetti fisici fastidiosi durante il trattamento con onde d'urto in vitro al fine di ottenere risultati riproducibili. Ciò si ottiene riempiendo prima completamente un pallone di coltura cellulare con terreno di coltura e quindi ponendo il pallone in un bagno d'acqua riscaldato. Il secondo passo consiste nell'utilizzare una generosa quantità di gel per ultrasuoni quando si accoppia l'applicatore al bagnomaria.

Successivamente, l'applicatore viene posizionato orizzontalmente contro la membrana del bagnomaria. Il passaggio finale consiste nell'assicurarsi che la sorgente dell'onda d'urto sia in linea con il centro del pallone di coltura cellulare in modo che le cellule siano posizionate all'interno del fuoco dell'onda. In definitiva, l'analisi delle cellule può essere eseguita come esempio con la PCR in tempo reale e un array di citochine per mostrare un'alterazione nei geni e nelle citochine di interesse.

Abbiamo avuto l'idea di questo modello quando abbiamo visto che i metodi esistenti per applicare le onde corte direttamente alle colture cellulari non considerano l'effetto della riflessione delle onde nel passaggio dal terreno di coltura all'aria ambiente. A dimostrare la procedura sarà il dottorando Dr.Chante del mio gruppo di ricerca. Per iniziare, scaldare 3,5 litri di acqua del rubinetto a 37 gradi Celsius.

Quindi trasferire l'acqua riscaldata nel bagnomaria. Il livello dell'acqua dovrebbe essere tre centimetri sotto la parte superiore del bagnomaria e dovrebbe coprire completamente la membrana. Quindi, collegare il sensore di temperatura a un alimentatore e posizionare il sensore di temperatura nel raccordo sulla parete posteriore del bagnomaria.

Quindi, mentre si mescola l'acqua, collegare continuamente il riscaldatore a una presa di corrente e riscaldare l'acqua a una temperatura stabile di 37 gradi Celsius. In condizioni sterili. Cellule di sede in fiasche di coltura T 25.

Quindi raggiungeranno il 90% di fluidità dopo l'incubazione notturna. Quindi posizionare i palloni verticalmente e riempirli con terreno di coltura fino al fondo del collo del pallone per evitare contaminazioni. Evitare che il fluido entri in contatto con il collo del pallone o il tappo di chiusura.

Successivamente chiudere i palloni con un tappo solido senza filtro per evitare la contaminazione dell'acqua nella vasca. Quindi sigillare i tappi con paraform. Dopo che le boccette sono state sigillate, fissarle in un supporto.

Quindi inserire i palloni fissi nel bagnomaria e allineare il centro del pallone per coltura cellulare. Con il centro della membrana dell'applicatore di onde d'urto, applicare ampie quantità di gel di trasmissione degli ultrasuoni sull'applicatore di onde d'urto e sulla membrana del bagnomaria. Quindi collegare l'applicatore alla membrana e assicurarsi che non ci siano bolle d'aria tra di loro.

Quindi, tenere l'applicatore di onde d'urto al centro della membrana e assicurarsi che sia rivestito orizzontalmente e verticalmente con il pallone di coltura cellulare per garantire il trattamento dell'intera area di crescita cellulare. Quindi condurre un esperimento pilota per determinare la distanza ideale tra l'applicatore di onde d'urto e il pallone di coltura, nonché per definire i parametri di trattamento corretti. Assicurarsi di mantenere il pallone di coltura e l'applicatore in una posizione stabile durante l'attivazione del dispositivo a onde d'urto.

Una volta determinata la distanza ideale, eseguire l'esperimento con i parametri di trattamento con onde d'urto desiderati. Al termine del trattamento con onde d'urto, rimuovere il pallone per coltura cellulare dal bagnomaria, asciugarlo con carta assorbente e disinfettare la superficie esterna del pallone. Quindi, trasferire il terreno dal pallone in una provetta da centrifuga.

Pellettare le celle secondo i normali parametri della centrifuga. Resus sospendere il pellet cellulare in due millilitri di terreno di coltura cellulare, quindi trasferire nuovamente la sospensione cellulare nel pallone contenente cinque millilitri di terreno di coltura cellulare e far crescere le cellule fino alla cofluenza richiesta per gli esperimenti di analisi cellulare. L'analisi PCR in tempo reale delle cellule endoteliali della vena ombelicale umana ha rivelato una sovraregolazione dei livelli di mRNA di Tie Two dopo il trattamento con onde d'urto.

Ciò suggerisce il trattamento con onde d'urto, l'aumento della proliferazione delle cellule endoteliali e l'angiogenesi. I livelli di citochine nella vena ombelicale. Le cellule endoteliali sono state quantificate utilizzando un array di citochine.

Anche le due citochine infiammatorie IL sei e IL otto sono risultate significativamente aumentate, entrambe coinvolte nell'infiammazione che accompagna il processo angiogenico dopo il suo sviluppo. Questa tecnica ha aperto la strada a numerosi ricercatori nel campo della scienza di base delle onde d'urto per esplorare gli effetti su un singolo tipo di cellula in esperimenti in vitro. Speriamo di convincere ancora più ricercatori a utilizzare questo modello al fine di ottenere risultati riproducibili e comparabili nella scienza delle onde d'urto.