Test Drosophila Olfatto con un test Y-maze

L'obiettivo generale di questa procedura è fornire un semplice saggio del labirinto a Y per testare l'olfatto nel melone Drosophila Gaster. Ciò si ottiene facendo morire di fame le mosche per 16-18 ore, in modo che siano motivate a esplorare nuovi ambienti con stimoli volatili. Il secondo passo della procedura consiste nell'assemblare la configurazione del labirinto a Y contenente le fonti di odore su carta da filtro, come l'acido acetico nel solvente rispetto al solo solvente.

Il terzo passo consiste nell'introdurre rapidamente e delicatamente le mosche nella fiala di caricamento. Dopo diverse ore, il passo finale è quello di segnare la posizione delle mosche nel labirinto. In definitiva, i risultati possono mostrare una risposta all'odorizzante dai dati ottenuti con il labirinto a Y.

Abbiamo avuto l'idea di questo metodo quando abbiamo deciso di avere un metodo semplice ed economico per testare la risposta olfattiva dei phyla. Un vantaggio di questa tecnica rispetto ad altre opzioni è che consente alle mosche di decidere se stressarsi troppo A dimostrare la procedura sarà Megan Simon, una dottoranda del mio laboratorio Per questo protocollo ho pronta una linea di mosca ISO inized con fenotipi comportamentali stabili e robusti. Qualsiasi stock di questo tipo servirà come controllo di riferimento per il test olfattivo, per ogni ceppo genetico da utilizzare per l'esperimento, incrociare il ceppo con il ceppo di riferimento per cinque generazioni.

Accoppia le femmine di un singolo ceppo sperimentale con alcuni maschi isogenici per ogni incrocio posteriore. Per gli esperimenti olfattivi, mantenere la drosophila su un terreno di farina di mais standard con un antibiotico sotto il ciclo di luce 1212. E a 25 gradi Celsius.

Gli esperimenti dovrebbero essere sempre eseguiti a 25 gradi Celsius e sotto luce negli spettri rossi lontani, non visibili alla drosofila. Deve inoltre essere possibile ventilare completamente la stanza tra un esperimento e l'altro prima di eseguire il test la mattina seguente. Alla fine della giornata, trasferire coorti di 10-20 linee sperimentali in fiale di vetro con l'umidità fornita da un asciugamano bagnato.

Le mosche devono essere testate in 16-18 ore, altrimenti potrebbero morire a causa della morte o della fame il giorno successivo. Assembla il labirinto a Y. Inizia unendo il connettore a forma di Y a due fiale di vetro utilizzando connettori in schiuma con puntali per pipette tagliati, che rendono i condotti la loro forma affusolata rende questi passaggi unidirezionali.

Il terzo ramo della Y è attaccato a un tubo di caricamento costituito dalla grande porzione di un puntale di pipetta e consente il passaggio dalla fiala di carico al punto di scelta del labirinto. Al di là di ogni tunnel di rastremazione c'è una fiala di vetro, una delle quali deve essere caricata con un carico di odorizzante. Questi come boli da 40 microlitri imbevuti in quadrati di carta velina da 28 millimetri.

Quale dei due contiene l'odorante dovrebbe alternarsi in modo casuale per condurre il test per primo. Bello. Le mosche sul ghiaccio brevemente, quindi le mosche sono rallentate. Questo dovrebbe essere sotto la luce rossa lontana delle lampadine a LED e, a 25 gradi Celsius, far cadere delicatamente la coorte di mosche nella fiala di caricamento e caricare il labirinto a Y con le mosche di prova.

Non usare l'anestesia gassosa. È davvero fondamentale trasferire le mosche nella fiala di caricamento in modo rapido e delicato. In realtà è il passo più difficile di questo esperimento perché le mosche devono svegliarsi rapidamente prima della diffusione di altre nella massa Y.

Le mosche dovrebbero essere lasciate esplorare il labirinto per 24 ore, in modo che un numero massimo di mosche si sposti su una o l'altra fiala di vetro. Il numero di mosche presenti nelle diverse tube serve a calcolare l'indice olfattivo. A questo valore dovrebbero essere applicati metodi statistici standard raccolti dal comportamento di un massimo di 10 mosche.

Se 10 coorti di mosca non forniscono risultati coerenti, le prove possono essere eseguite con 20 coorti di mosca. Per ripulire i componenti del labirinto, immergerli smontati in RBS 35 MD durante la notte. Seguire con risciacqui in acqua di rubinetto e un risciacquo finale in acqua deionizzata prima dell'asciugatura all'aria.

Risposte standard a un odorante. L'uso del labirinto a Y include l'attrazione, l'indifferenza o l'evitamento. Ad esempio, i cantoni evitano fortemente il 10% di acido acetico, mentre non evitano il 10% di acido fenoacetico.

Mentre si tenta questa procedura, è importante ricordare che queste onde rappresentano un ambiente artificiale per le mosche. Seguendo questa procedura come metodo per i compagni di squadra, è possibile eseguire saggi interni o sull'arena per confermare le risposte olfattive dei moscerini e le diverse condizioni. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come testare semplicemente le risposte olfattive del filano gaste utilizzando il saggio SW.