$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
マウスの脳の背側を上にします。
顕微鏡下で、大脳半球を分離します。皮質を引き離し、次に海馬を引き離して、側脳室と第3脳室を露出させます。
2つの外側脈絡叢を収集します。これらは、側脳室を長いベールのように覆う免疫細胞が豊富な脳構造です。
粒
状表面を持つ短い構造である第3脳室脈絡叢を収集します。
小
脳を剥離して第4脳室を露出させます。
粒
状表面を持つ長い球状構造である第4脳室脈絡叢を収集します。
組織の完全性を維持するために、すべての脈絡叢を緩衝生理食塩水を入れたチューブに入れます。
消化酵素溶液を加え、攪拌しながらインキュベートします。
酵素は細胞外マトリックスを分解し、細胞を緩めます。
酵素を不活性化するために適切なバッファーを追加します。
遠心分離機で細胞を沈殿させます。上清を廃棄し、さらなる分析のために細胞を新しいバッファーに再懸濁します。
まず、C57黒6マウスの背側を上にして解剖した脳をペトリ皿に置き、皿を双眼ルーペの対物レンズの下に置きます。鉗子を使用して脳を所定の位置に維持しながら、別の鉗子の両端を半球間の正中線から下に挿入します。
鉗子を使用して、脳梁と海馬を含む皮質を中隔から引き離し、側脳室と第3脳室の一部を露出させます。外側脈絡叢を、側脳室を覆い、両端でフレアする長いベールとして識別します。次に、細い鉗子の両端を使用して、外側脈絡叢を収集します。海馬の後襞に隠れている三角形の後部を集めるように注意してください。
次に、対側半球の脳梁と海馬のある皮質を中隔から引き離して、第3脳室全体と反対側の側脳室を露出させます。細い鉗子を使用して、粒状表面の側面を持つ短い構造として識別された第3脈絡叢を収集します。次に、もう一方の外側脈絡叢を収集します。
次に、鉗子の両端を小脳と中脳の間に挿入し、小脳を橋と髄質から切り離して第4脳室を露出させます。次に、第4脈絡叢を、小脳と髄質の間の右外側から左端まで第4脳室を裏打ちする粒状の表面面を持つ長い球状構造として識別します。細い鉗子を使用して、4番目の脈絡叢を収集します。
収集したすべての脈絡叢をコラゲナーゼIVでインキュベートした後、約10回ゆっくりと上下にピペットを切って解離を完了します。次に、チューブを 1.5 ミリリットルまで MACS バッファーで満たして、コラゲナーゼ IV 活性を停止します。次に、細胞を遠心分離し、上清を廃棄してから、細胞を1.5ミリリットルのMACSバッファーで洗浄します。適切な補償ビーズと抗体溶液を加えた後、サンプルを氷上で30〜45分間インキュベートし、光への露出から保護します。次に、チューブに1.5ミリリットルのMACSバッファーを入れます。