リモートハイスループット表現型解析のためのマウスの目の摘出

このビデオでは、マウスの眼球および、眼窩からの眼球の摘出（nucleation）について説明します。眼球は下眼瞼縁によって境界づけられています。こちらが内眼角（鼻側眼角）です。

後方は側眼角（外眥）です。上方は上眼瞼縁です。こちらは手術検体です。

針先が透明な角膜を指しています。虹彩の向こう側に水晶体がわずかに突き出ているのが見えます。茶色い部分が虹彩であり、水晶体を覆っています。

最も重要な外科的指標は、この白い線、すなわち角膜輪線であり、その直後に穿刺創を作成します。眼球の後方は角膜輪線の後ろにあり、ここでは筋肉の付着部を指しています。ここで眼球に接している筋肉と、眼窩を満たし涙腺を含む結合組織を確認できます。

最後に、鈍的剥離によって得られた白く長い視神経のストリップです。先端を鋭利に加工した曲がったドレッシング鉗子を用いて、まずまぶたを広げます。これにより、眼球が押し出され、離れた状態になります。

ピンセットを慎重に眼窩内に挿入し、眼球の後方に向けます。眼球を圧迫しないように注意しながら後方で緩やかに挟み、前方へ引き出します。このとき、眼球ではなく結合組織を把持できているはずです。眼球を横に回転させると、眼窩組織と共に白い視神経を確認することができます。

これは2回目の解剖であり、再度手順を示すためのものです。眼窩隅角から進入し、ピンセットを眼球の背後に押し込み、結合組織を掴んで、眼球自体を圧迫せずに前方へ引き出します。ここでも、白い視神経の長い帯状の部分に結合組織が見て取れます。穿刺創を作るには、筋肉の停止部を持って眼球を固定し、眼球を安定させている位置のすぐ隣にある角膜縁の背後に針を刺入します。

これにより、固定液が眼球内に浸透します。眼球を保持している位置から離れた場所を穿刺すると、眼球が非常に不安定になり、眼球を圧迫したり過度な圧力をかけたりすることなく、十分な長さの切開創を作ることが困難になります。また、眼球自体の直後にある結合組織をすべて把持することも可能です。

固定液によっては、穿刺創を必要としないものもあります。一般的に、眼球が完全に浸るように、少なくとも 3 cc の固定液を入れた 5 cc のシンチレーションバイアルに眼球を入れます。灌流固定した動物の場合は、鋭利な解剖操作が必要です。

湾曲カリブリ鉗子と湾曲ウェスコット剪刀を使用します。カリブリ鉗子で下眼瞼を把持します。眼窩骨に沿って剪刀を挿入し、結合組織の切断を開始します。

眼球から離れた曲線を用い、サイズ調整時の干渉を避けます。内眼角から外眼角まで、下眼瞼縁に沿ったどの部位でも使用可能です。ある程度まで結締組織が除去されると、眼球の背後にハサミを滑り込ませて、眼球を引き離すことができます。

もう一つの例を示します。眼窩に鋏を挿入しますが、眼球ではなく眼窩骨に沿わせ、結合組織を切り離します。これにより、バスケットの中のバスケットボールのような状態で固定されている眼球が解放され始めます。ピンセットで眼瞼を牽引し、眼球の周囲を短く慎重に切開してください。

ここでCollibraを用いて結合組織または筋肉の付着部を把握し、眼球を眼窩結合組織から切り離して取り出します。眼球を適切に固定した後、輸送が必要な場合は、保存瓶の周囲にパラフィルムを巻きます。

梱包は、所属大学および政府の規制に従って行う必要があります。通常、液体を吸収させるために綿を入れた容器に封入し、この容器をしっかりと密閉します。その後、この輸送用容器を気泡緩衝材（バブルラップ）の袋に入れます。

これを液体輸送用ラボパックに入れ、必要書類と一緒に梱包します。