2012年1月29日
強制水泳試験は、げっ歯類の潜在的な抗うつ効果を評価するための実験的なアプローチとして検証されます。実験動物は、水のタンクに配置され、エスケープ関連のモビリティの挙動が定量化される。この試験のマウスのバージョンに共通の手順が説明されています。
マウス強制水泳試験は、抗うつ薬の有効性を予測するために一般的に用いられる試験です。この動画では、強制水泳試験のマウス版の手順を解説します。マウス版はラップ版とは異なるため、互換的に使用してはいけません。
強制水泳試験では、マウスを水で満たされたタンクに入れます。マウスを6分間タンク内に留まらせ、その間の被験体の行動を記録します。
6分間のテスト期間が終了したら、被験体を水から取り出します。テスト完了後、視覚的記録をコンピュータまたはビデオモニターに転送します。解析では、観察者が6分間のセッションのうち最後の4分間にマウスがもがいていた時間を測定します。
抗うつ薬は、抵抗して過ごす時間を増加させます。これは、不動時間の短縮に反映されます。こんにちは。メリーランド大学医学部のTodd Gould博士の研究室のSeanです。
こんにちは。同じ研究室のシャンテルです。このビデオでは、マウス版の強制水泳試験の実施方法とスコア付けについて解説します。マウス強制水泳試験は、抗うつ治療の潜在的な有効性を評価するために用いられます。
それでは、具体的に見ていきましょう。プレキシガラスなどの丈夫な素材で作られた透明な円筒形タンクを使用します。タンクのサイズは、マウスが脱出することや、足や尾が底に触れることがないように選択します。あらかじめ決定し印を付けた水位までタンクに水道水を満たし、水温を調整します。
温度は23〜25°Cに保つ必要があります。ビデオ撮影ができるように水槽を配置してください。当研究室では、水槽の間に4〜5匹の被験者を配置し、強制水泳試験を実施しています。
被験者が互いに視認できないように仕切りを設置します。また、これらの仕切りはマウスとの背景コントラストを確保する役割も果たします。アルビノマウスの場合、ビデオ録画には黒色が良好なコントラストを提供します。
色の濃いマウス系統の場合、背景には白またはクリーム色が適しています。実験を開始する前に、ホワイトノイズマシンを起動してください。音量が大きすぎないことを確認してください。
間欠的な騒音のみを遮断するようにしてください。被験者を実験室に案内します。順応させるため、この期間は通常、少なくとも1時間設けます。
実験室の環境は、ノイズや照度の変化、その他の妨げとなる要因がないよう、一定に保つ必要があります。馴化期間が終了したら、テストを開始できます。セッション名を記録しておくことが重要です。まず、マウスを尾を持って持ち上げ、慎重にタンクの中に入れます。
動物が水面に触れた際に方向を確認できるよう、この操作はゆっくりと行うことが重要です。6分間のテスト期間の終了時に、動物の識別をビデオ録画し、録画を停止します。マウスを投入したときと同じ順序で取り出し、ペーパータオルで優しく水分を拭き取ってから、ケージに戻します。
タンク内の水は再利用しないでください。テストが完了しましたので、次は強制水泳試験における行動のスコアリングに進みます。評価される主な変数は、試行中に動物が不動状態で留まった時間です。
一般的に、マウス強制水泳試験では、全6分間のセッションのうち最後の4分間をスコア化します。その理由は、処置に関わらず、ほとんどのマウスが試験の初期段階では絶えず活動的であるためです。この活動が、潜在的な処置の効果をかき消してしまうためです。
このビデオでわかるように、マウスはテストの初期段階では非常に活発です。この活動性は、各マウスの経過時間において最初の2分後に減少します。移動性は、ゲームパッドで操作される画面上のストップウォッチによって測定されます。
もう一方のストップウォッチで240秒をカウントダウンします。テスト中の移動性は、「身体のバランスを保ち、頭を水面上に出しておくために必要な動き以外のあらゆる動き」と定義されます。それでは、トライアルのスコアリング例を見てみましょう。
まず、混乱を防ぐために、評価対象外のマウスをカバーで覆います。マウスは一般的に水に容易に浮きますが、体のバランスを取り、頭を水面上に保つために、わずかな動作を見せます。
これらの行動は脱出を試みているものではなく、運動性としてスコア付けしてはいけません。また、マウスが一度運動した後、本質的には不動の状態であっても、それ以前に得た慣性によって水中で漂うことがありますが、これらの動きも運動性としてスコア付けしてはいけません。それでは、次のビデオに進みましょう。
このビデオのマウスは、画面上のラベルにある通り、活動期と不動期の両方の期間を示しており、観察者は活動時間を記録します。理論的には不動時間を直接測定することも可能ですが、動きがない状態よりも、能動的な動きを検出して測定する方が容易です。慣例として、報告されるのは不動時間です。
不動時間は、240秒から運動時間を差し引くことで決定します。4回目の水泳テストのスコアリングには、多くのトレーニングと練習が必要です。高い信頼性を達成するためには、内部的な判定基準を作成し、各新しい観察者が高い信頼性に達するまでトレーニングすることが重要です。
このビデオでは、マウスを用いた強制水泳試験について解説します。今後の実験の成功をお祈りいたします。
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強制水泳試験は、げっ歯類における抗うつ薬の潜在的な有効性を評価するための検証済み手法です。この試験では、マウスを水槽に入れ、脱出に関連する運動行動を定量化します。
マウス強制水泳試験は、抗うつ薬の有効性を評価するために広く用いられている前臨床行動解析法であり、脱出に関連する運動性を定量的に測定することで、初期創薬段階におけるターゲットの妥当性確認やメカニズムのリスク低減をサポートします。標準化された手順により、うつ様状態に対する化合物の効果を再現性高く評価でき、抗うつ薬パイプラインの優先順位付けにおけるgo/no-go判断の根拠となります。また、本試験は簡便で必要設備が最小限であるため、創薬ワークフロー全体でのスケーラブルな導入が容易です。
マウス強制水泳試験は、ターゲットバリデーションとリード化合物同定を繋ぐディスカバリー段階の行動アッセイとして機能し、前臨床有効性試験へ進む前にメカニズムに関する知見を提供します。