尾懸垂テスト

尾懸垂試験は、さまざまな実験的操作による抗うつ効果を予測するために用いられる一般的な行動試験です。この動画では、本試験の手順を実演します。尾懸垂試験はマウスにおいて妥当性が確認されており、より大型の齧歯類には推奨されません。

尾懸垂試験では、マウスを尾で吊り下げます。マウスを6分間吊り下げた状態で保持し、その間の被験体の行動を記録します。

6分間のテスト期間が終了したら、被験体の尾からテープを取り除きます。テスト完了後、視覚的な記録をコンピューターまたはビデオモニターに転送します。解析のため、観察者はマウスが6分間のセッション全体でもがいていた時間を測定します。

抗うつ作用を持つ化合物は、マウスが抗う（struggling）時間を増加させます。これは、不動時間が短縮されることで反映されます。例えば、補助的な抗うつ薬として臨床的に有用な気分安定薬であるリチウムが、尾懸垂試験において不動時間を減少させたことを報告しています。

こんにちは。私はボルチモアにあるメリーランド大学医学部精神科、Todd Gould博士の研究室のSeanです。こんにちは、同じ研究室のChantelです。このビデオでは、尾懸垂試験の実施方法とスコアリングについて説明します。

尾懸垂試験は、抗うつ治療の潜在的な有効性を評価するために用いられます。それでは、実験室へ移動して、実験の手順を説明しましょう。必須ではありませんが、ここでは特別に設計された尾懸垂用ボックスを使用します。

この試験では、尾懸垂ボックスを4つのコンパートメントに分割し、各マウスをそれぞれ独立して配置します。この仕切りにより、試験中にマウス同士が互いを視認することを防ぎます。

ただし、棚やその他の構造物を使用してマウスを吊るすことも可能です。尾懸垂試験ボックスの寸法は、マウスが縁に届いて掴まることができないように選択します。実験を開始する前に、十分な量のテープ断片を切り、尾への接着に使用する部分に印を付けておきます。

当研究室では、17 centimeterのテープ断片を使用します。このテープ断片の端から2 centimeterの箇所に印を付け、ここを尾への接着に使用します。この2 centimeterの範囲の中央に尾を配置します。

尾懸垂試験装置とビデオカメラを配置します。動物を導入する前に、前の被験体による臭いを中和するため、装置内を滅菌溶液で十分に洗浄してください。当研究室では、色の点を除いてすべて同一の、2種類の異なる尾懸垂試験装置を使用しています。

アルビノマウスの場合、ビデオ録画にはダークグレーのボックスが良好なコントラストを提供します。色の濃いマウス系統には、白いボックスが適しています。ホワイトノイズマシンを起動してください。

断続的な音を遮断する必要があります。マウスを処置室に連れていき、環境に慣らしてください。室内の条件は一定に保ち、騒音や照度の変化、その他の妨げとなる要因がないようにしてください。

この期間は通常、少なくとも1時間とします。順化期間が終了したら、特定のマウス系統が自分の尾に登るのを防ぐために、テストを進行させることができます。尾懸垂テストでは、尾の上に配置するプラスチック製シリンダーを使用します。

これらのシリンダーは、テスト中に尾の基部に配置されます。当研究室では、長さ4 cm、直径1 cm、重量1.5 gのプラスチック製シリンダーを使用しています。登攀を防止するためにプラスチック製シリンダーを使用する場合は、テープを貼る前に尾に配置してください。

尾の先端から2〜3 mmだけ外に出るようにして、テープを貼付します。マウスをホームケージに入れた状態で、尾にテープを貼り付けてください。テープの印がついた端を使用し、テープが尾に密着し、さらにテープ同士が重なって固定されていることを確認してください。

テープを貼付した後、異なる個体に貼ったテープが絡まり合わないよう、各マウスをケージの壁面に固定します。この操作は迅速に行ってください。さもなければ、マウスに不必要なストレスを与えることになります。

動物を吊り下げる前に録画を開始してください。テープの自由端を吊り下げバーに掛け、動物を吊り下げます。この際、治療群間でカウンターバランスをとった順序で、かつカメラの視界を妨げないように配置してください。マウスは1匹ずつ吊り下げるため、個体によってテストの開始時間がわずかに異なります。

各マウスの懸垂期間の開始と同時に、正確にスコアリングを開始してください。カメラの視野を遮らないことが重要です。尾懸垂セッション全体を通じてスコアリングを行うため、カメラの視野が遮られるとデータの欠落につながる可能性があります。

すべてのテープの端が吊り下げバーに対して垂直であり、緩みの長さが均一であることを確認してください。被験者ごとにタイマーを開始します。尾懸垂試験の時間は6分間です。

6分間のテスト時間が経過したら、各マウスの尾の端からテープを取り除き、ホームケージに戻します。テスト終了時に、被験体情報をビデオ記録してください。マウスをコロニー室に戻した後、テストボックスを徹底的に洗浄し、滅菌溶液で拭き上げてください。

テストが完了しましたので、行動のスコアリングについて説明します。尾懸垂テストのスコアリングにおいて通常評価される唯一の変数は、動物が不動であった時間です。不動時間を算出するために、マウスが動作していた時間を測定し、それを6分間のテスト時間から差し引きます。テストの全6分間をスコアリングします。

まず、評価対象ではないマウスを覆い、各マウスの測定時間において観察者が1匹の動物だけに集中できるようにします。活動性は、ゲームパッドデバイスで制御する画面上のストップウォッチで測定します。ここでは、ご覧のように、同時に制御される2つの独立した画面上のストップウォッチが表示されています。

1つ目のストップウォッチは360秒からカウントダウンし、観察者に試験時間を知らせます。2つ目のストップウォッチは、被験者が活動的に動いている時間を測定します。見ての通り、2つ目のストップウォッチは1つ目のストップウォッチに覆われており、観察者にはミリ秒の小数点以下のみが見えるようになっています。

これにより、観察者はストップウォッチが作動しているかを確認できますが、スコアリングが完了するまで総移動時間を見ることはできません。これは、観察者のバイアスが結果に影響を与えるのを防ぐために行います。マウスは、特にセッションの開始時に、脱出に関連する行動を示します。

これらの行動には、装置の壁や懸垂バーに到達しようとする試み、強い身体の震え、および走行に似た肢の動きが含まれます。これらの動きは明らかに運動能を示しています。しかし、試験が進むにつれて、動きはよりわずかなものになります。

当研究室では、後肢の動きを伴わず、前肢のみに限定された小さな動きは移動としてカウントしません。また、前回の移動時の慣性によって生じる振り子のような揺れも、移動とはみなしません。それでは、実際の尾懸垂試験セッションにおけるスコアリングを確認しましょう。

一般的に報告されるのは、移動時間ではなく不動時間です。不動時間は、360秒の試験時間から総移動時間を差し引くことで算出できます。スコアリング。テールサスペンション試験にはトレーニングと習熟が必要です。

内部ラボ基準を確立し、新しい観察者が高い信頼性に達するまでトレーニングを行うことが重要です。本論文では、尾懸垂試験の実施方法とスコアリングについて説明します。今後の実験の成功を願っています。