凍結保存サンプルの回復のための日曜大工のデバイスが誤って低温貯蔵タンクに落とし

この手順の目的は、簡便に作製可能なデバイスを使用して、液体窒素を満たしたデュオタンクからクライオボックスおよびクライオバイアルに入ったサンプルを容易に取り出すことです。まず、操作スペースを確保するためにデュオタンクから1〜2段のフリーザーラックを取り除き、デバイスをタンク内に垂直に挿入します。次に、デバイスを用いてタンクの底に沿って静かにかき出します。

次に、デバイスを容器の壁に沿って垂直に引き上げます。フリーザーボックスをタンクから取り出すための最終ステップは、容器の底から回収したボックスを掴み、取り出したフリーザーラックを元に戻すことです。デカンターや液体窒素充填バーなどの既存の手法に対する本手法の主な利点は、簡単かつ安全で迅速な代替手段であり、サンプルの完全性を維持できること、および一人のオペレーターで実施可能であることです。耐低温デバイスの組み立てを開始するには、プライヤーを使用して3辺強結紮材の一辺をまっすぐに伸ばし、L字型強結紮材を作成します。

ここで示されているように、ストロングタイの寸法は、ドイヤーのネック径に応じて選択できます。5.5×5.5インチのクライオボックスを回収できるように、このようなストロングタイを2本作成してください。これらをクラウンボルト、ナットワッシャー、およびネジを用いてストロングタイTSTストラップで固定し、クライオスクープのベースを形成します。

デバイスがこの図のように配置されます。次に、スロット付きプレートを使用し、strong tie tee strapのスロットをスロット付きプレートの一端にあるスロットに合わせます。その後、Hillman社製のナットとボルトで2つの部品を固定します。

スロット付きプレートと強力タイにあらかじめ穴が開いていない場合は、固定用の穴を開けます。必要に応じて、スロット付きプレートのもう一方の端を曲げ、フォームで包むことでハンドルを作成できます。デバイスをより確実に把握するため、水洗いを行う前に必ずフォームを取り除いてください。

この耐凍結DIY回収デバイスは、クライオバイアルの回収にも適応させることができます。これには、平らな底面を、液体からバイアルをすくい上げるために改造したステンレス製ストレーナーに交換することが含まれます。組み立てを開始するには、まず 크라운ナットとボルトを外し、スロット付きプレートに強力なタイヤティーストラップを取り付けます。

次に、ステンレス製ストレーナーをスロットプレートに取り付ける前に、プライヤーを用いてストレーナーのネック部分をゆっくりと曲げ、底部がお玉のような角度になるように調整します。使用するストレーナーにリム（縁）がついている場合は、プライヤーでリムを下に曲げます。これにより、デバイスの操作が容易になります。

ストレーナーのハンドルの穴をスロット付きプレートの穴に合わせて配置し、ヒルマンナットとボルトでストレーナーを固定します。ストレーナーに穴があいていない場合は、ドリルで穴を開けてください。ドーナーからクライオボックスの取り出しを開始する前に、必ず低温用手袋を着用してください。

次に、デバイスを操作するスペースを確保するため、ドゥーアー（doer）からフリーザーラックを1〜2段取り出します。続いて、ストロングタイ（strong tie）ttraベースを装着した垂直型の耐凍結DIY回収デバイスを使用し、ドゥーアーの底に沿って緩やかにかき出し、ドゥーアータンクの底に落ちたボックスを回収します。最後に、デバイスを壁面に沿って垂直に引き上げ、フリーザーボックスをタンクからすくい上げます。

デバイスを垂直に保持し、そのまま真っ直ぐ上に引き上げることで、ボックスがドゥアの中に滑り戻るのを防ぐようにしてください。クライオバイアルを回収する場合は、ストレーナーを装着したクライオスクープを使用し、クライオボックスの回収と同様にドゥアの底を軽くかき出してください。その後、デバイスを垂直に引き上げ、ストレーナーに集まったバイアルを取り出します。遺伝子発現研究における大きな課題は、凍結組織試料と抽出済みRNAの両方において、RNAの品質が保存条件に依存することです。

この図は、サンプル処理が全RNAの完全性に及ぼす影響を示しています。同一組織源から得られた全RNAに対し、実験前に異なるサンプル処理を施しました。完全な全RNA調製物は、明瞭な28 sおよび18 sリボソームRNAバンドを示し、28 sリボソームRNAバンドの強度は18 sリボソームRNAバンドの約2倍となっています。これは、RNAが分解されずに保持されていることを示す指標です。レーン3および4は、フリーザーからの短期間の取り出しによる繰り返しの部分的な解凍によって著しく分解したサンプルを示しており、これはボックス内のチューブを取り出す必要性から定期的に分注を行う長期保存の状態を模したものです。

しかしながら、DIYデバイスを用いてドゥーアーサービス（doer service）で保存し、部分的な解凍を行わなかったサンプルは、レーン2において無傷のRNAを含んでいます。このビデオを視聴することで、液体窒素を満たしたドゥアー（dvar）から、デカンテーション（移し替え）を行うことなくサンプルを回収する方法を十分に理解できるはずです。