圧力筋運動記録法を用いたマウス抵抗動脈機能を評価

次の実験の全体的な目標は、生理学的に近い条件下でのin vitroでのマウス抵抗性動脈のリアルタイムの血管反応性を決定することです。これは、血管の小さな部分を2つのマイクロカニューレに取り付け、生理学的な管腔圧を維持することによって達成されます。次に、血管をα 1受容体アゴニストフェニレフリンで収縮させ、血管を拡張する任意の薬物の能力を研究します。

狭窄した血管にアセチルコリンを添加すると、内皮依存性メカニズムを介してリアルタイムで拡張する能力が評価されます。結果は、アセチルコリンに応答した内腔径の変化率を示し、SGC α 1 欠損が内皮依存性血管拡張障害をもたらすことを確認しています。ワイヤーマンモグラフィーのような既存の方法と比較したこの技術の主な利点は、圧力マンモグラフィーが小さな微小血管の特性評価を可能にすることであり、これは大きなコンダクタンス血管よりも血圧の恒常性の維持に関連しています。

この方法は、マクロ耐性血管が重要な役割を果たす高血圧などの心血管領域における重要な質問に答えるのに役立ちます。ペントバルビタールでマウスを安楽死させることから始めます。次に、腹腔を開き、腸間膜組織の解剖を開始します。

次に、3次腸間膜動脈を特定し、それを結合組織と脂肪組織から分離します。動脈と静脈を微小血管レベルで区別することは、血管内に血液がない場合に問題があります。したがって、無傷の動物でこれを行うことが望ましいです。

次に、3次腸間膜動脈の2〜3ミリメートルの長さのセグメントを切断し、ヒープを含む皿に置きます。PSS バッファー。幹線セグメントには分岐が含まれていてはなりません。

入口と出口のバルブを通してカニューレをヒープPSS溶液で穏やかに充填することにより、myoチャンバーを準備します 10ミリリットルのシリンジから、過度の圧力はカニューレに接続された壊れやすいトランスデューサーを損傷する可能性があることに注意してください。カニューレをしっかりと充填した後、両方のバルブを閉じます。次に、分離された動脈セグメントをチャンバーに移し、血管の一方の端を右側のカニューレに取り付けます。

シリンジフラッシュを使用してナイロン縫合糸の細いストランドで慎重に結び、インレットバルブを介して容器にヒープ溶液を充填します。次に、血管のもう一方の端を左カニューレに取り付け、ナイロン縫合糸でカニューレを血管に固定します。チャンバーに最大10ミリリットルのヒープ溶液を入れます。

シリンジを使用して、インレットバルブを介してヒープ溶液を静かに押して、漏れがないか確認します。次に、チャンバーをビデオカメラの下に置きます。酸素を始動し、入口バルブを閉じた状態でチャンバーを摂氏37度に加熱し、最初のヒープ溶液リザーバーからP oneチューブに接続します。

チューブ内に気泡がなくなるまで、気泡と溶液をチューブに通します。次に、バルブを開きます。チャンバーの左側のバルブにチューブP 2で接続します。

圧力調整器から来るので、システム全体に気泡や漏れがないことを確認してください。myoインターフェースパネルまたはソフトウェアの圧力メニューに移動し、フローをオフにしながらポンプをオンにします。プログラムを開き、[収集]をクリックします。

血管内腔、血管径、肉厚のモニタリングと解析が可能になりました。管腔間圧を徐々に上げるには、Pの1つの圧力を選択し、上昇する圧力のシーケンスを入力します。水銀容器の5〜60ミリメートルの値は、圧力が上昇するにつれてねじれたり畳み込んだりすることがありますので、垂直または縦方向のマイクロポジショナーを使用して、それに応じて張力またはひずみを調整します。

圧力が60ミリメートルになり、浴が摂氏37度になったら、平衡化期間中に少なくとも45分間、最大1時間、血管を平衡化します。温めたヒープで一度バス溶液を交換します。動脈切片が平衡化したので、10ミリリットルの塩化カリウム脱分極溶液を摂氏37度で塗布します。

平滑筋は完全に脱分極し、最大の収縮を達成します。安定した収縮が得られたら、10分間隔で3回、ヒープ溶液で浴をすすぎます。次に、血管の生存率と内皮の完全性を確認します。

まず、フェニレフリンを追加して血管を事前に収縮させ、1リットルあたり5モルのマイナスになるようにします。安定した狭窄が得られたら、アセチルコリンの用量を10から負、9から10から負に、最後のアセチルコリン投与後、1リットルあたり5モルに順次追加することにより、累積濃度血管拡張応答曲線を実行します。.準備をヒープで10分間隔で3回すすぎます。

次に、記録されたトレースから1リットルあたり2ミリモルのEGTAを含むカルシウムフリーPSSを適用して、パッシブルーメンの直径を決定します。各用量反応の内腔径を測定し、これを使用してすべてのパラメーターを計算します。アセチルコリンの緩和反応を、アゴニストとカルシウム遊離緩衝液による治療の比較として、それぞれがフェニレフリン誘発性狭窄から内腔径をどれだけ変化させたかの観点から表します。

状態圧筋造影法は、野生型およびSGCα1ノックアウトマウスから分離された腸間膜抵抗性動脈におけるアセチルコリンに応答する血管弛緩を研究するために使用されました。SGCα 1欠損症は、研究対象のマウスの遺伝的背景に関係なく、血管弛緩を誘導するアセチルコリンの能力の低下と関連していました。しかし、SGC Alpha 1匹のヌルマウスの内皮依存性弛緩は、黒6背景よりもS6背景でより顕著に損なわれていた。

一緒にこれらの発見は、内皮依存性弛緩に対する血管系の感度の低下が、SGC Alpha One ノックアウトマウスのひずみ特異的高血圧に寄与する可能性があることを示唆しています。この手順に加えて、共焦点顕微鏡などの他の方法も、生命血管に対して同時に行うことができます。これにより、例えば、細胞内の鉄濃度の測定が可能になり、基礎となるシグナル伝達メカニズムの特定に役立つ可能性があります。