마우스 Oocytes에 핵 전송

저희 연구 그룹은 리프로그래밍에 관심이 있기 때문에 핵 이식(Nuclear transfer)을 수행합니다. 이는 분화된 핵이 배아 상태로 리프로그래밍될 수 있다는 점에서 매우 흥미로운 과정입니다. 여기 준비된 시약들은 SUM과 HCCV이며, 이것은 hyaluronidase입니다.

먼저 배양 접시를 준비하며, 이는 CO2 농도를 맞추기 위해 인큐베이터에 넣을 것입니다. 미네랄 오일로 덮인 여러 개의 방울들이 있으며, 이를 통해 CO2 분위기를 보정합니다.

이제 HCZB 한 방울을 떨어뜨립니다. 이는 세척용으로 사용됩니다. 이는 고농도이며 다시 미네랄 오일로 덮여 있습니다.

이 높은 수치는 히알루로니다아제(hyaluronidase)를 처리하면 감소합니다. 여기 이 부분은 단순히 HCCP 드롭입니다. 이것들은 세척용입니다.

이 과정은 O 측면에서 ulu 세포를 제거하기 위한 것입니다. 이 단계에서는 가열이 진행되므로, 제가 돌아와 쥐의 오일 징후를 확인하고 모든 부위를 미네랄 오일로 덮을 때까지 온도가 올라갈 것입니다. 여기 있는 PVP 드롭은 바늘 세척 및 세포 투입용이며, 이것은 HCCB와 Cyla B입니다. 그리고 여기서 조작을 수행하겠습니다.

여기 바늘 색상이 보입니다. 지금 바늘을 하나 뽑겠습니다. 네, 아주 얇고 적당한 바늘이 준비되었습니다.

지금 보시는 것은 마이크로 포지(micro forge)입니다. 적절한 크기의 홀딩 피펫을 만들기 위해 바늘을 특정 위치에서 절단해야 합니다. 유리 구슬을 가열한 후, 바늘을 내려 유리 구슬에 녹여 붙이면 바늘이 부러지게 됩니다.

이것을 밀어냅니다. 부러진 바늘의 상태가 완벽한 것을 볼 수 있습니다. 이제 여기 아래로 내려가서, 열을 올립니다.

이제 유리 구슬이 붉게 변하며 녹기 시작합니다. 유리 구슬을 밀면 곡선 형태가 만들어집니다. 이 정도면 충분합니다. 이제 제거하겠습니다.

보시는 것처럼, 이제 바늘을 삽입합니다. 방금 홀딩 피펫을 이 헤드에 장착했습니다. 이제 이를 다시 현미경에 삽입하십시오.

마이크로 피펫과 모세관이며, 수은이 채워져 있습니다. 이 팁에 수은을 채웠습니다. 여기 모세관에 수은을 채웁니다.

내부에 삽입합니다. 바늘을 이 헤드 부분에 고정하십시오. 꽉 조인 후, 뒤로 당깁니다.

여기서 시계 방향으로 돌리면 수은이 앞으로 밀려나와 확인할 수 있습니다. 이제 팁을 오일에 넣습니다. 보이죠? 이제 바늘을 아래로 이동시켜 시야를 확보하겠습니다.

수은 방울을 약간 배출하고 QVP를 일부 흡입합니다. 그렇게 하시면 됩니다. 그런 다음 다시 위로 올리십시오.

HCCB로 가서 구멍 아래로 이동합니다. 마우스 피펫인 P로 향합니다. 여기에 삽입할 모세관을 준비해야 합니다. 감사합니다. 됐습니다. 좋습니다.

모세관을 준비합니다. 그리고 파이프 안에 넣습니다.

저는 스위스에서 왔으며, 1년 전 이 연구를 시작하며 K 교수님 연구실에 합류하여 핵 이식 기술을 배우기 시작했습니다. 이곳은 정말 훌륭한 곳이며, 여기서 연구할 수 있어 매우 기쁩니다. 물론 이 실험은 매우 복잡하여 진행 과정에서 많은 문제가 발생할 수 있습니다.

따라서 실험을 시작할 때, 핵 형성 과정이나 전이 과정 중에 많은 세포가 용해되는 것과 같은 문제에 직면할 수 있습니다. 또는 성공적으로 전이를 수행했음에도 불구하고 세포가 발달하지 않는 경우도 있으며, 여기에는 항상 수많은 이유가 있을 수 있습니다.

모든 사이트의 배양 시스템부터 시작하시면 됩니다. 따라서 배양 시스템과 인큐베이터를 테스트하기 위해 유전적 대조군이나 일부 수정란과 같은 대조군이 항상 필요합니다. 그리고 현미경 사용 기술 또한 숙달해야 합니다.

따라서 측면을 안정적으로 접종한 후 다시 옮길 수 있을 때까지 많은 연습이 필요합니다. 이는 단순히 연습의 문제이며, 숙달되기까지 몇 주 또는 몇 달이 걸릴 수 있습니다. 그 외의 과정이 완료되면 장기간의 실험을 진행할 준비가 된 것입니다.

따라서 이를 위해 하루 전체를 비워두는 것이 좋습니다. 또한 초기에 까다로운 부분 중 하나는 마우스 피펫팅입니다. 기포가 생기지 않도록 잘 조절하고 시야를 놓치지 않아야 하며, 특히 클론을 손상시키지 않도록 주의해야 합니다. 왜냐하면 luscita의 외층이 열려 있어, 마우스 작업을 할 때 클론이 손상되어 해당 sonar lucita 밖으로 유출될 가능성이 있기 때문입니다.

따라서 마우스 파이프에 오일이 들어가지 않도록 주의해야 합니다. 너무 세게 빨아들이거나 불지 않도록 해야 하며, 이러한 기술은 비교적 쉽게 습득할 수 있습니다.