샙터 셀 카운터를 사용하여 세포 배양 동안 휴대폰 번호를 결정

scepter 세포 계수기는 세포의 직경과 부피를 모니터링하고 세포 집단의 건강 및 품질을 확인하기 위해 세포 수를 측정하는 휴대용 자동 장치입니다. 이 장치는 향상된 정확도, 사용 편의성, 그리고 낮은 세포 계수 비용 등 다른 계수 방법에 비해 상당한 장점을 제공합니다. scepter를 사용하여 그래픽 디스플레이의 안내에 따라 일회용 센서로 세포를 흡입하십시오.

그 후 세포 수를 측정하며, 장치는 컴퓨터로 업로드하여 분석할 수 있는 세포 농도와 통계 수치를 보고합니다. 안녕하세요, 저는 Millport의 연구원 Sonya입니다. 오늘은 scepter의 사용 방법을 보여드리겠습니다.

세포 계수기 세포 계수는 인비트로(in vitro) 세포 배양에 있어 필수적이지만 번거로운 단계입니다. 일관된 세포 농도는 실험의 재현성과 정확성을 보장합니다. 속도와 정확성이 요구되는 상황임에도 불구하고, 세포 계수는 세포의 상태와 증식률 모니터링, 불멸화 또는 형질전환 세포의 평가, 후속 실험을 위한 세포 접종, 형질전환 또는 감염, 그리고 세포 기반 분석 준비를 위해 매우 중요합니다.

세포 계수와 관련하여, 설문 조사에 참여한 400명의 연구자 중 71%가 헤모사이토미터를 사용하여 세포를 계수합니다. 헤모사이토미터법은 비용이 저렴하지만, 노동 집약적이며 사용자의 편향이나 오용으로 인해 부정확한 계수 결과가 나올 수 있습니다. 헤모사이토미터법의 오차 원인으로는 시료 내 세포의 불균일한 분포, 시료 내 세포 수가 너무 많거나 적은 경우 등이 있습니다.

특정 세포가 정의된 계수 영역 내에 포함되는지 여부에 대한 주관적인 결정. 수동 계수와 관련된 지루함을 덜기 위한 혈구계의 오염, 사용자 간의 편차 및 혈구계 충전 속도의 변동. 연구자의 29%가 자동 세포 계수 장치를 사용하여 세포를 계수합니다.

하지만 대부분의 연구자들에게 이러한 대형 벤치탑 기기의 가격은 사용에 큰 진입 장벽이 됩니다. scepter cell counter는 상대적으로 저렴한 비용으로 Coulter counting의 자동화와 정확도를 제공하는, 사용하기 편리한 핸드헬드 형태의 자동화 장치입니다. 이 시스템은 센싱 신호 처리, 데이터 저장 및 그래픽 표시를 위해 아날로그와 디지털 하드웨어를 결합하여, 임피던스 기반 입자 검출이라는 Coulter 원리를 소형화된 형태로 구현하였습니다.

일회용 센서는 정밀 액체 핸들링 채널과 전자 장치가 보완되어 서브마이크론 및 서브피코리터 해상도로 세포 크기와 세포 부피에 따른 구분이 가능한 미세 가공 세포 감지 구역으로 설계되었습니다. scepter 세포 계수기는 세포 집단 통계를 히스토그램 형태로 시각화하여 표시합니다. scepter 세포 계수기를 사용하려면 먼저 인산염 완충 식염수(PBS)로 단일 세포 현탁액을 희석하는 것부터 시작하십시오.

밀리리터당 10,000에서 500,000 cells의 농도가 최적입니다. 희석된 세포 100 µL를 1.5 mL 마이크로뷰 튜브에 옮깁니다. 기기 뒷면의 토글 스위치를 길게 눌러 scepter 세포 계수기를 켜고 화면에 지침이 나타날 때까지 기다립니다.

안내 메시지가 표시되면, 전극 감지 패널이 기기 정면을 향하도록 하여 scepter 유닛 끝에 센서를 부착하십시오. Scepter 센서는 전자 감지 구역과 통합 세포 감지 전극이 포함된 정밀 성형 샘플링 챔버로 구성됩니다. 이 센서를 통해 서브마이크론 분해능으로 세포 크기를, 서브 피코리터 분해능으로 세포 부피를 구별할 수 있습니다.

일관된 센서 엔지니어링을 통해 동일한 시료 부피가 계수되고 정확한 크기 측정이 이루어지도록 합니다. 센서를 부착한 후, 화면의 안내에 따라 계수 과정의 각 단계를 다음과 같이 수행하십시오. 화면에 'hold down the plunger to begin'이라는 문구가 나타나면 플런저를 누르고, 이어서 'submerge the sensor'라는 문구가 나타나면 센서를 세포 현탁액 속에 담근 뒤, 플런저를 놓아 세포 현탁액을 센서 내부로 흡입하십시오.

플런저는 전기 신호 역할을 하며, 샘플과 데드 볼륨을 센서 안으로 끌어들입니다. 피펫팅과 달리 플런저를 누르는 속도나 정확도는 중요하지 않습니다. 준비가 되면 이 과정은 수 초 동안 진행됩니다.

기기에서 비프음이 울리며 화면에 샘플 로드 완료(sample loaded) 메시지가 표시됩니다. 샘플이 센서로 로드되면, 세포 크기와 세포 부피를 측정하기 위해 감지 영역을 통과하며 흡입됩니다. 그 후 마이크로채널을 통해 50 µL의 샘플이 계수되면, 센서가 기기에 계수 중단을 지시합니다.

계수가 완료되면 기기 화면에 'count complete'라고 표시됩니다. 센서를 제거하여 폐기하십시오. 안내 메시지에 따라 센서를 제거하고 폐기하십시오.

그러면 기기 화면에 세포 크기 또는 직경의 히스토그램과 밀리리터당 세포 농도가 표시됩니다. 계수가 완료되고 기기에 히스토그램이 표시되면, 토글 버튼을 눌러 게이트를 적용하고, 히스토그램 프로필을 기반으로 게이트를 자동 설정하려면 'auto gating'을 선택하거나 이전 계수의 게이트를 사용하려면 'use last'를 선택하십시오. 어떤 선택을 하든, 게이트를 수동으로 이동하여 정밀하게 조정할 수 있습니다.

데이터를 조정하고, 토글 버튼을 다시 눌러 왼쪽 게이트를 선택한 후 토글을 스크롤하여 게이트를 원하는 위치로 이동시키십시오. 그런 다음 토글을 다시 눌러 오른쪽 게이트를 활성화하고 토글을 스크롤하여 오른쪽 게이트를 배치하십시오. 다시 클릭하십시오.

새로운 세포 농도, 평균 세포 부피 및 직경이 표시됩니다. 토글 스위치를 사용하여 표시 내용을 날짜 및 시간, 평균 세포 크기, 평균 세포 부피로 전환할 수 있으며, 기기 자체에 최대 72개의 히스토그램을 저장할 수 있습니다. 데이터를 개인용 컴퓨터로 업로드하려면 USB 케이블 포트를 통해 기기를 연결한 후 PC의 디스플레이 화면에서 확인하십시오.

Scepter 소프트웨어 애플리케이션을 더블 클릭하여 소프트웨어를 실행합니다. 그런 다음 connect를 클릭합니다. 모든 카운트 데이터가 소프트웨어로 자동 전송됩니다.

scepter 애플리케이션 소프트웨어는 배양액의 개체군 분포를 부피 또는 직경으로 상세히 나타내는 히스토그램을 표시합니다. 다운로드한 파일은 Microsoft Excel로 내보낼 수 있으며, 여기서 원시 데이터는 지정된 세포 직경 또는 세포 부피 빈(bin)으로 표시됩니다. 19종의 서로 다른 세포주가 계수를 위해 준비되었으며, 세포 계수기를 사용하여 이론적 초기 농도를 결정하였습니다.

이후 이 세포 현탁액들을 추가로 희석하여 이론적인 세포 농도의 세포 현탁액을 얻었습니다. 그런 다음 scepter 세포 계수기를 사용하여 세포 농도를 측정하였습니다. 이 그림은 5개의 대표 세포주에 대해 측정된 5가지 희석 단계와 이론적 세포 농도를 보여줍니다.

r-제곱 값으로 나타난 높은 선형성은 scepter 계수가 광범위한 선형 작동 범위에서 테스트된 세포주에 대해 신뢰할 수 있는 방법임을 입증합니다. scepter 계수의 전반적인 상대 정확도는 scepter 계수로 얻은 데이터와 coter 계수로 얻은 수치를 비교하여 여기서 입증됩니다. scepter 세포 수의 로그 값을 coter 수치의 로그 값에 대해 도식화하면, 테스트된 모든 세포주에서 scepter 계수가 coter 계수와 일치함을 보여줍니다.

Z two coulter counter를 사용하여 19개 세포주의 계수를 수행하였습니다. scepter 세포 계수기, V cell 또는 count test system과 같은 자동 비전 기반 계수기 및 hemo TER 계수는 동일한 세포 초기 현탁액과 동일한 희석 배수를 사용하여 제조사의 지침에 따라 수행되었습니다. 본 그림에 표시된 결과는 scepter 계수법으로 측정된 세포 농도가 높은 선형성을 보이며 이론적 세포 농도와 밀접하게 일치함을 보여줍니다.

각 세포주의 각 희석 배수에 대해 변동 계수(CV, coefficient of variation) 백분율을 계산하였습니다. 여기에 제시된 각 계수 시스템은 작동 범위 내의 세포 농도 및 계수 방법에 따른 19개 세포주의 평균 CV 백분율을 나타냅니다. Scepter 세포 계수기는 헤모사이토미터(hemo cytometer) 계수보다 더 정밀하며, 더 작은 표준 편차와 더 작은 평균 변동 계수를 보여줍니다.

Scepter 계수법은 혈구 계수법보다 10배 더 빠르며, 다른 자동 계수기보다도 빠릅니다. 여기서는 이 비디오에 설명된 방법을 사용하여 SF9, MCF7 및 HC293 세포를 계수하였습니다. 세포 농도를 측정하는 데 소요되는 평균 시간을 기록하였습니다.

혈구 계수는 샘플당 한 번만 수행되었음에 유의하십시오. Scepter는 세포 크기를 기반으로 측정합니다. 따라서 세포 형태의 모든 변화는 히스토그램에 포착될 수 있습니다.

건강한 배양물은 전형적인 종 모양의 가우시안 분포를 보이는 반면, 건강하지 않은 세포는 사멸하여 히스토그램이 왼쪽으로 이동하게 됩니다. 마찬가지로, 50%의 사멸 세포와 50%의 살아있는 세포 집단을 혼합했을 때도 히스토그램의 이동이 관찰되었습니다. 지금까지 연구자들의 세포 계수 방식을 혁신적으로 변화시키고 있는 Millipore의 새로운 Scepter 세포 계수기 사용법을 보여드렸습니다.