진단 검시와 고양이와 마우스의 선택 조직 및 샘플 수집

이 절차의 전반적인 목표는 기본적인 설치류 부검을 수행하는 것입니다. 이는 먼저 동물의 기본 정보를 기록함으로써 이루어집니다. 절차의 두 번째 단계는 내장을 검사하는 것입니다.

세 번째 단계는 장기나 장간막 림프절과 같은 시료를 수집하는 것입니다. 최종적으로, 조직병리학 또는 기타 기술을 통해 동물의 건강 상태를 판정할 수 있습니다. 일반적으로 부검 경험이 없는 사람은 실무를 통해 설치류의 해부학적 구조를 익혀야 하므로 어려움을 겪을 수 있습니다.

이러한 방법들은 연구 콜로니 내 동물들의 건강 상태에 관한 핵심적인 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 다양한 조직의 위치를 파악하고 정상 조직과 비정상 조직을 구별하는 방법을 익히는 데 시간이 걸리므로, 이러한 기술들에 대한 시각적 시연이 필수적입니다. 동물을 안락사시키기 전에, 해당 동물의 이력 정보를 수집하고 신체 상태, 행동, 성별, 연령, 체중, 계통 등의 현재 특성을 기록하십시오.

이 기록은 동물을 안락사시키기 전 조직을 검사할 사람에게 필수적인 연령 정보가 됩니다. 적절한 개인 보호 장비를 사용하고 있는지 확인하십시오. 해부대, 핀셋, 가위, 용기용 라벨, 고정액, 배지 및 수집 용기를 준비하십시오.

동물을 안락사시킨 후, 신체 상태를 평가하고 피부 및 모질의 이상, 야위어짐, 탈수 여부를 확인하십시오. 또한 인위적인 조작, 임플란트 또는 외과적 수술 흉터의 흔적이 있는지 탐색하십시오. 다음으로 해부 현미경을 사용하여 모든 외부 구멍을 상세히 검사하십시오.

여기에는 귀, 눈, 코, 입, 항문 및 생식기가 포함됩니다. 이제 동물을 해부판 위에 배를 위로 하여 눕히고, 핀셋으로 피부를 들어 올린 후 가위를 사용하여 항문에서 턱까지 피부를 절개합니다. 다음으로, 피부를 옆으로 젖히고 복벽과 흉곽을 절개합니다.

늑골 케이지의 양측을 따라 외측으로 두 번 절개하여 흉강 내장을 노출시킵니다. 횡격막을 절개합니다. 그런 다음 흉골 상단을 가로질러 절개하여 늑골 케이지를 제거합니다.

이제 노출된 흉부 및 복부 장기를 살펴봅니다. 색 변화, 이상한 냄새, 크기 차이, 그리고 장기의 결손이나 전위 여부를 확인하십시오. 장기 표면의 질감을 검사하고 조직 덩어리나 액체로 채워진 낭종이 있는지 기록합니다.

또한, 양측 강(cavity) 내에 액체가 있는지 확인하십시오. 위장관 검사를 계속하십시오. 장간막에 림프절 비대나 조직 덩어리가 있는지 검사하십시오.

위장관의 내용물을 기술하고, 벽의 비후, 종괴 또는 출혈 여부를 주의 깊게 확인하십시오. 신장 내부를 검사하려면 칼날을 사용하여 왼쪽 신장은 세로 단면으로, 오른쪽 신장은 정중선에서 약간 벗어난 가로 단면으로 절단하십시오. 신실질에 이상이 있는지 확인하십시오.

이제 수컷의 비뇨생식계를 관찰하십시오. 정낭, 정소, 부고환, 요관을 확인하십시오. 암컷의 경우, 페루살 샘(perusal glands), 자궁, 난소, 요관을 확인하십시오.

비뇨생식계에 폐쇄, 액체 고임, 출혈 또는 기타 이상 징후가 있는지 검사하십시오. 이러한 검사를 마친 후, 추가 검사를 위해 표적 장기를 분리하여 적출하십시오. 일반적으로 심장, 간, 신장 및 비장을 적출하면서 함께 수집합니다.

각 장기를 고정액에 담그거나, 적절한 고정을 위해 동결 또는 면역조직화학법과 같이 해당 조직이 필요한 프로토콜의 첫 단계를 수행하십시오. 일반적으로 조직은 고정액 대 조직의 부피 비율을 20:1로 하여 10%NBF와 같은 보존액에 담급니다. 쥐를 대상으로 작업할 때는 비강 흡인물보다 기관지 흡인물을 먼저 수집하십시오.

먼저 경부 영역에서 피부를 피하 조직과 함께 젖혀 침샘과 경부 근육을 노출시킵니다. 그런 다음 해당 조직들을 제거하여 기관을 노출시킵니다. 기관에 3 mm 절개를 가하고, 1 mL의 샘플링 용액이 채워진 피펫을 기관 내강에 4분면 방향으로 삽입합니다.

검체 채취액을 기관을 통해 폐로 천천히 세 번 흘려보냅니다. 그 다음 검체 채취액을 회수하고 기관에서 피펫을 제거합니다. 이때 액체가 모두 피펫으로 회수되지는 않습니다.

따라서 더 많은 유액이 필요한 경우 이 과정을 반복하십시오. 마우스 테스트를 위해, 멸균 가위를 사용하여 비인두 ATU에 접근함으로써 비강 흡인물 또는 기관지 흡인물 샘플을 채취합니다.

측두하악관절을 절단하고 하악골을 상악골로부터 젖혀 비인두구를 노출시켜 비강 흡입물을 수집합니다. 1 mL의 샘플링 용액이 채워진 피펫을 마우스의 비인두구 또는 랫드의 기관 내강에 삽입합니다. 피펫은 두측 방향으로 향하게 하여 밀어 넣어야 합니다.

팁이 비강 입천장에 닿도록 합니다. 그 상태에서 샘플링 액체를 천천히 주입하십시오. 액체가 비강으로 들어가면 비강 입구에 메니스크스(menisci)가 형성되며, 반투명한 구강 입천장을 통해 그 모습이 보여야 합니다.

하지만 액체가 입을 통해 흘러나오는 경우, 피펫의 방향을 다시 조정하십시오. 액체가 완전히 주입되면, 비강에서 피펫으로 샘플링 액체를 흡입한 후 피펫을 제거합니다. 먼저 포셉으로 기관을 잡고 포셉 바로 윗부분을 절단하십시오.

다음으로, 기관을 위쪽으로 조심스럽게 잡아당기며 조직 연결 부위를 절단하여 흉부 조직 전체를 적출합니다. 이제 폐를 작업 표면에 평평하게 놓고, 기관 주변을 봉합사나 실로 느슨하게 묶어줍니다. 매듭을 너무 세게 조이면 기관 내로 바늘을 통과시킬 수 없으므로 주의하십시오.

이제 주사기에 고정액을 채우고, 기관을 바늘에 고정하면서 바늘을 기관의 개구부에 삽입합니다. 포셉을 사용하여 폐가 완전히 팽창할 때까지 고정액을 천천히 주입합니다. 고정액의 부피는 동물의 연령, 계통 및 건강 상태에 따라 달라집니다.

조직이 충분히 팽창되지 않은 경우 평평하게 보이며, 과하게 팽창된 경우 충전 후 조직에서 거품 섞인 액체가 스며 나옵니다. 고정액이 폐에서 역류하는 것을 방지하려면 기관을 둘러싼 봉합사나 실을 조여 줍니다. 그런 다음 팽창된 폐를 고정액에 넣습니다. 사체를 깨끗한 해부판 위에 복와위로 놓은 후, 가위를 이용하여 송곳니 상단의 피부와 근육을 제거하고 포셉으로 집어 올립니다.

그 다음 작은 가위로 사체의 머리를 절단합니다. 가위의 아래쪽 날을 대후두공에 삽입하고 위쪽 방향으로 움직여 두개골 중앙선을 따라 절개합니다. 이제 포셉으로 두개골을 벌려 뇌를 노출시킵니다.

병리학자가 두개골 내에서 뇌 단면을 절단하는 것을 선호하는 경우, 뇌가 노출된 두개골을 즉시 10% NBF에 넣으십시오. 그렇지 않은 경우, 포셉이나 손가락으로 코 주변의 머리 부분을 잡고 두개골을 천천히 뒤집어 중력에 의해 조직이 두개골에서 떨어져 나오게 하십시오. 후각엽부터 시작하여 뇌의 바깥쪽 가장지를 따라 곡선형 포셉을 조심스럽게 밀어 넣으십시오.

포셉을 사용하여 신경을 부드럽게 집어내면서 두개골을 따라 소뇌 방향으로 계속 밀어 이동시킵니다. 뇌가 분리되면 고정액에 넣습니다. 장간막 림프절을 찾으려면 먼저 대장의 콤모 모양의 맹장을 찾으십시오. 장간막 림프절은 맹장 인접 장간막에 위치한 노란색의 타원형 또는 구형 조직 덩어리입니다.

이들은 주변의 장간막 및 지방보다 약간 더 두껍고 질감이 단단한 경우가 많습니다. 초기에는 조직을 구별하기 위해 해부 현미경이 유용할 수 있으나, 숙련되면 필요하지 않을 것입니다. 포셉과 가위를 사용하여 장간막 림프절을 분리한 다음, 배양, PCR 또는 조직병리학 분석에 사용할 보관 튜브로 옮기십시오.

프로토콜을 완료하면 병리학자나 과학자는 다음과 같은 결과물을 얻게 됩니다: 안락사 시점의 객관적 및 주관적 상태에 대한 서면 보고서, 고정 전 조직의 객관적 기술서, 고정액에 담긴 모든 주요 복부 및 흉부 장기, 뇌와 장간막 림프절, 그리고 비강 및 기관지 흡인물 샘플입니다. 숙련될 경우, 약식 부검은 30분 이내에 완료할 수 있습니다.

이 절차를 수행하는 동안 동물과 조직의 상태에 대한 관찰 내용을 기록하는 것이 중요합니다. 이 영상을 시청한 후면 관류된 폐, 장간막 림프절 및 뇌 수집을 포함하여 설치류의 완전한 부검을 수행하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.