고양이와 쥐의 Ovariectomy 및 17β-estradiol 대체 : 비주얼 데모

이 절차의 전반적인 목적은 암컷 쥐와 생쥐에서 평소 변동이 심한 혈청 에스트로겐 농도를 엄격하게 제어하는 것입니다. 이는 먼저 등쪽 경로를 통해 난소를 제거함으로써 달성됩니다. 다음으로 셀 탄성 캡슐과 Nutella 혼합물을 준비합니다.

마지막으로, 캡슐을 피하에 삽입하거나 누텔라 혼합물을 경구 투여합니다. 결과적으로, 방사면역측정법을 통해 캡슐 방법은 안정적인 혈청 17 beta estradiol 농도를, 누텔라 방법은 변동하는 혈청 17 beta estradiol 농도를 나타내는 결과를 얻을 수 있습니다. 서방성 펠릿과 같은 기존 방법과 비교하여 이 기술들의 주요 장점은 장기간 동안 생리학적 농도의 estradiol을 생성하는 것으로 입증되었다는 점입니다.

이 방법은 투여 경로, 투여 부위 및 용량에 따른 효과의 차이와 같이 에스트로겐 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 동물을 마취시킨 후, 직장 온도계가 연결된 가열판 위에 복와위로 배치하십시오. IGEL과 수술 후 통증 완화제를 동물의 목 가측에 피하 투여하십시오.

장골능 쉐이버(iliac crest shaver) 전방 4 by 4 cm 구역에 생리식염수에 희석한 IL 5 mg/kg을 투여합니다. 그 후, 해당 부위를 소독제로 소독하고 4 by 4 cm 개구부가 있는 수술 포로 동물을 덮습니다. 정중선을 따라 2~3 cm 절개하고, 정중선에서 외측으로 1 cm 떨어진 지점에서 하부 근막으로부터 피부를 둔성 박리합니다.

근막을 통해 다시 한번 절개합니다. 그다음 복강에 도달할 때까지 이 근막 아래를 가능한 한 표면적으로 둔성 박리하여 측면으로 확장합니다. 핀셋을 사용하여 복강 내 난소를 둘러싸고 있는 지방 조직을 잡고 조심스럽게 밖으로 끌어냅니다.

난소를 확인하고 자궁각과 혈관을 결찰합니다. 이 구조물에서 근위쪽으로 0.5에서 1cm 지점을 결찰하십시오. 난소와 결찰된 지방 조직을 절제하여 제거하고, 남은 조직을 복강 내로 다시 넣습니다.

대측 근막에 다시 절개창을 내어 반대편 난소를 제거합니다. 상처 부위를 봉합하고, 17 beta estradiol을 즉시 투여하지 않는 경우라면 동물이 마취에서 깨어날 때까지 기다립니다.

수술 후 동물을 가열된 케이지에 최소 2시간 동안 둡니다. 수술 후 첫 며칠 동안은 쥐를 단독 사육합니다. 수술 24시간 후에 피하 투여합니다.

동물들에게 scholastic 캡슐을 통해 17 beta estradiol을 투여하기 위해 kg당 5 mg의 IL을 추가로 주입합니다. 필요한 양을 참깨오일에 넣고 충분히 혼합합니다. 핀셋을 사용하여 scholastic 튜브를 3 cm 길이로, 나무 어플리케이터 스틱을 막기용으로 5 mm 길이로 자릅니다.

17 beta estradiol 참깨유 용액을 주입하기 전에 나무 플러그 하나를 scholastic 캡슐에 끼웁니다. 전체 길이를 채우기 위해, scholastic 캡슐의 열린 끝부분을 다른 나무 플러그로 조심스럽게 막습니다. 이식 전 하룻밤 동안 캡슐을 남은 17 beta estradiol 용액에 넣어 배양합니다.

절제술 절개 부위를 봉합한 후, 쥐 목의 등쪽 부위에서 2x2 cm 크기의 정사각형 영역을 면도하고 소독합니다. 1 cm 정도 절개한 후 측면으로 둔탁하게 박리합니다. 피하 포켓을 만들어 캡슐이 들어갈 충분한 공간을 확보합니다.

학술적 캡슐을 닦아낸 후 절개창을 통해 조심스럽게 삽입합니다. 그런 다음 봉합사로 절개창을 폐쇄합니다. 특히 상처 주변의 피부가 캡슐에 의해 최대한 덜 당겨지도록 합니다.

에스트로겐 투여 매개체로 너트 크림인 Nutella를 사용하려면, 17 beta estradiol을 참기름에 완전히 용해시킨 후 참기름을 너트 크림과 혼합하십시오. 실험 5일 전부터 17 beta estradiol이 포함되지 않은 위약 너트 크림을 준비하십시오. 1일 차부터 3일 차까지 쥐가 호르몬이 없는 너트 크림을 먹도록 훈련시키십시오.

넷째 날과 다섯째 날에 동물을 그룹별로 훈련시킵니다. 실험 전반에 걸쳐 개별 케이지에서 견과류 크림을 급여합니다. 견과류 크림 생리 식염수를 급여할 때는 동물을 개별 케이지에 배치합니다.

현재의 방법들이 재현하고자 하는 17 beta estradiol 농도는 쥐(rat)의 경우 약 5에서 140 pg/mL이며, 생쥐(mouse)의 경우 5에서 35 pg/mL입니다. 여기에 표시된 바와 같이, 300 g의 암컷 Sprague Dawley 쥐에게 투여했을 때의 결과입니다.

피하 탄성 캡슐은 2일 차의 약 40 picograms per milliliter에서 35일 차의 10 picograms per milliliter까지 서서히 감소하는 17 beta estradiol 혈청 농도를 생성합니다. 그러나 25 gram의 암컷 C 57 black six 마우스에 캡슐을 투여했을 때, 투여 직후에는 약 1000 picogram per milliliter의 혈청 농도 정점이 예상되며, 8시간 이내에 생리적 범위로 감소합니다.

300g의 Sprague Dawley 랫드에게 너트 크림을 통해 투여했을 때, 혈청 농도는 2일 차의 약 90 pg/mL에서 35일 차의 25 pg/mL로 서서히 감소했습니다. 마우스에서 17β-estradiol의 생리적 수준은 매일 10 내지 70 pg/mL 사이에서 변동되었습니다.

17 beta estradiol 수치는 mL당 20에서 120 picograms 사이에서 변동되었습니다. 일단 숙달되면, 절제술 및 캡슐 이식 기술은 적절히 수행될 경우 10분 이내에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도할 때는 위생 지침을 엄격히 준수하는 것이 중요합니다.