원자력 현미경을 사용한 마우스 뇌 조직의 기계적 특성 특성화

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 조회수 • 3:08 분 • June 17th, 2025

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미리 예열된 배지에 고정된 마우스 뇌 조각과 함께 생체 접착제로 코팅된 접시를 가져갑니다.

생리학적 조건을 유지하기 위해 예열된 원자력 현미경 또는 AFM 스테이지에 놓습니다.

AFM 헤드 위에 위치한 AFM 캔틸레버의 구형 비드에 배지 한 방울을 바릅니다.

그런 다음 AFM 헤드의 위치를 변경하고 매체에 담그십시오.

레이저 빔을 캔틸레버에 정렬하여 포토다이오드를 사용하여 캔틸레버 편향을 추적합니다.

뇌 조직 표면에 닿을 때까지 AFM 프로브를 내립니다.

크리프 적합성 측정의 경우 일정한 힘을 가하도록 AFM 프로브를 프로그래밍합니다.

이 힘으로 인해 캔틸레버가 구부러지는 동안 조직이 변형됩니다. 레이저는 캔틸레버

굴곡을 감지하고 조직 강성을 측정합니다.

힘 이완 측정의 경우 조직을 고정된 깊이로 들여쓰고 유지합니다.

레이저는 캔틸레버 굴곡을 추적하여 시간 경과에 따른 조직 저항과 이완을 측정하여 조직의 기계적 특성을 정확하게 평가할 수 있습니다.

공칭 스프링 상수가 미터당 0.03뉴턴이고 직경이 20마이크로미터인 붕규산 비드를 가진 AFM 프로브를 프로브 홀더에 조심스럽게 로드합니다. 페트리 접시에 장착된 뇌 슬라이스를 섭씨 37도로 예열된 AFM 스테이지 장착 히터에 놓습니다.

그런 다음 예열된 배지 약 2밀리리터를 추가합니다.

다음으로, AFM 프로브에 배지 한 방울을 조심스럽게 추가하여 뇌 슬라이스를 둘러싼 매체로 낮출 때 표면 장력으로 인해 파손되는 것을 방지합니다. 그런 다음 AFM 헤드를 스테이지에 재배치합니다. 그리고 매체에 잠길 때까지 머리를 내리기 시작합니다.

광학 현미경을 사용하여 관심 영역이 보정된 AFM 프로브 아래에 오도록 스테이지를 이동합니다. 그런 다음 AFM 프로브를 내려 조직 표면에 접촉시킵니다. 크리프 적합성 실험을 수행하려면 소프트웨어의 함수 편집기에서 적용된 힘 함수를 구성합니다.

이 함수는 0.1초 동안 0.05 나노뉴턴으로 램프를 유지한 다음 0 나노뉴턴까지 1초 동안 램프를 0 나노뉴턴으로 낮추는 것으로 구성됩니다. 소프트웨어는 가해진 힘 기능 동안 AFM 프로브 압흔에 대한 데이터를 조직에 기록합니다. 크리프 적합성 실험을 실행한 후 소프트웨어에서 적용된 들여쓰기 함수를 생성하여 힘 완화 실험을 수행합니다. 소프트웨어가 AFM 프로브가 조직으로 들여쓰기될 때 경험하는 힘에 대한 데이터를 수집하는 동안 이 기능을 실행합니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026