꼬리 서스펜션 테스트

꼬리 매달기 시험(tail suspension test)은 다양한 실험적 처치의 항우울 효능을 예측하기 위해 흔히 사용되는 행동 시험입니다. 본 영상에서는 이 시험의 절차를 시연합니다. 꼬리 매달기 시험은 마우스에 대해 검증되었으며, 더 큰 설치류에게는 권장되지 않습니다.

꼬리 매달기 시험에서 마우스는 꼬리로 매달리게 됩니다. 마우스는 6분 동안 매달린 상태를 유지하며, 이 시간 동안 피험체의 행동이 기록됩니다.

6분간의 테스트 기간이 끝나면, 피험체의 꼬리에서 테이프를 제거합니다. 테스트가 완료된 후, 시각적 기록물을 컴퓨터나 비디오 모니터로 전송합니다. 분석을 위해, 관찰자는 6분간의 전체 세션 동안 마우스가 몸부림치며 보낸 시간을 측정합니다.

항우울 특성을 가진 화합물은 동물이 계속해서 노력하는 시간을 증가시킵니다. 이는 부동 시간이 단축되는 것으로 나타납니다. 예를 들어, 보조 항우울제로 임상에서 유용하게 사용되는 기분 조절제인 리튬이 꼬리 매달기 시험에서 부동 시간을 감소시켰음을 보고한 바 있습니다.

안녕하세요, 저는 볼티모어 메릴랜드 대학교 의과대학 정신과 Todd Gould 박사님 연구실의 Sean입니다. 안녕하세요, 저는 같은 연구실의 Chantel입니다. 이 영상에서는 꼬리 매달기 시험(tail suspension test)을 수행하고 점수를 산출하는 방법을 보여드리겠습니다.

꼬리 매달기 시험은 항우울제 치료제의 잠재적 효능을 평가하는 데 사용됩니다. 이제 실험실로 이동하여 실험 방법을 보여드리겠습니다. 필수 사항은 아니지만, 여기서는 특별히 설계된 꼬리 매달기 박스를 사용합니다.

본 테스트를 위해, 꼬리 매달기 상자를 4개의 구획으로 나누어 각 구획에 생쥐 한 마리씩 배치합니다. 격벽은 테스트 중에 생쥐들이 서로를 관찰하는 것을 방지합니다.

하지만 선반이나 다른 구조물을 사용하여 마우스를 매달 수 있습니다. 꼬리 매달기 테스트 박스의 크기는 마우스가 모서리에 닿거나 잡지 못하도록 선택합니다. 실험을 시작하기 전, 테이프 조각을 충분히 자르고 꼬리 부착에 사용할 부분을 표시하십시오.

본 실험실에서는 17cm 길이의 테이프 조각을 사용합니다. 이 테이프 조각의 끝에서 2cm 지점을 표시하며, 이 부분은 꼬리에 부착하는 데 사용됩니다. 이 2cm 구간의 중앙에 꼬리를 위치시킵니다.

꼬리 매달기 시험 상자와 비디오 카메라를 배치합니다. 동물을 도입하기 전, 이전 실험 대상으로부터 남은 냄새를 중화하기 위해 멸균 용액으로 상자를 철저히 세척해야 합니다. 본 연구실에서는 색상을 제외한 모든 면이 동일한 두 가지 서로 다른 꼬리 매달기 상자를 사용합니다.

알비노 마우스의 경우, 비디오 녹화를 위해 진회색 상자를 사용하여 충분한 대비를 줍니다. 색이 더 어두운 마우스 계통의 경우에는 흰색 상자가 적합합니다. 백색 소음기를 작동시킵니다.

이는 간헐적인 소음을 차단해야 합니다. 마우스를 실험실로 옮겨 적응시킵니다. 실험실 내의 조건은 일정하게 유지되어야 하며, 소음, 조도 변화 및 기타 발생 가능한 방해 요인이 없어야 합니다.

이 기간은 일반적으로 최소 1시간입니다. 순응 기간이 끝나면, 특정 마우스 계통이 꼬리를 타고 올라오는 것을 방지하기 위해 테스트를 진행할 수 있습니다. 꼬리 매달기 테스트(tail suspension test) 동안에는 꼬리 위에 씌우는 플라스틱 실린더를 사용합니다.

이 실린더들은 테스트 동안 꼬리 기저부에 위치하게 됩니다. 본 실험실에서는 길이 4 cm, 직경 1 cm, 무게 1.5 g의 플라스틱 실린더를 사용합니다. 등반을 방지하기 위해 플라스틱 실린더를 사용하는 경우, 테이프를 부착하기 전에 꼬리에 먼저 배치해야 합니다.

테이프 바깥으로 꼬리가 2~3mm 정도 남도록 하여 꼬리 맨 끝부분에 테이프를 붙입니다. 마우스가 있는 홈 케이지 내에서 마우스 꼬리에 테이프를 부착하십시오. 테이프의 표시된 끝부분을 사용하여 테이프가 꼬리에 잘 달라붙고 다시 테이프 자체에 고정되도록 하십시오.

테이프를 부착한 후, 서로 다른 동물에 부착된 테이프가 엉키는 것을 방지하기 위해 각 마우스를 케이지 벽면에 고정합니다. 이 과정을 신속하게 완료하십시오. 그렇지 않으면 마우스가 불필요한 스트레스를 받을 수 있습니다.

동물을 매달기 전에 녹화를 시작해야 합니다. 처치 그룹 간에 균형을 맞춘 순서로, 그리고 카메라 시야를 가리지 않는 방식으로 테이프의 자유단을 매달기 바에 배치하여 동물을 매답니다. 마우스는 한 마리씩 매달리기 때문에, 각 동물마다 테스트 시작 시간이 약간씩 다릅니다.

각 마우스의 현수 기간이 시작되는 정확한 시점에 점수 측정을 시작하십시오. 카메라 시야를 가리지 않는 것이 중요합니다. 꼬리 현수 세션 전체에 대해 점수를 측정하므로, 카메라 시야를 가리면 데이터 누락이 발생할 수 있습니다.

모든 테이프 끝부분이 현수 막대에 수직이 되도록 하고, 느슨한 길이를 동일하게 맞추십시오. 각 피험자마다 타이머를 시작하십시오. 꼬리 매달기 시험 시간은 6분입니다.

6분간의 테스트 시간이 지나면 각 꼬리 끝에서 테이프를 제거하고 마우스를 홈 케이지로 돌려보냅니다. 테스트가 끝나면 피실험체 정보를 비디오로 기록해야 합니다. 마우스를 사육실로 돌려보낸 후, 테스트 박스를 철저히 세척하고 멸균 용액으로 닦아내야 합니다.

테스트를 모두 마쳤으므로, 이제 행동 점수 측정 방법에 대해 논의하겠습니다. 꼬리 매달리기 테스트(tail suspension test)에서 일반적으로 평가하는 유일한 변수는 동물이 움직이지 않는 부동 시간입니다. 부동 시간을 구하기 위해, 마우스가 움직이는 시간을 측정한 후 이를 전체 테스트 시간인 6분에서 뺍니다. 테스트 전체 시간인 6분 동안 점수를 측정하겠습니다.

먼저 관찰자가 각 마우스의 측정 시간 동안 한 마리의 동물에만 집중할 수 있도록 평가 대상이 아닌 마우스들을 가립니다. 활동성은 게임패드 장치로 제어되는 화면 상의 스톱워치로 측정합니다. 여기에서 보시는 바와 같이, 동시에 제어되는 두 개의 별개 화면 스톱워치가 있습니다.

첫 번째 스톱워치는 360초부터 카운트다운하며 관찰자에게 테스트 지속 시간을 나타냅니다. 두 번째 스톱워치는 피험자가 계속 움직이는 시간을 측정합니다. 보시는 바와 같이, 두 번째 스톱워치는 첫 번째 스톱워치에 가려져 있어 관찰자에게는 밀리초 소수점 자리만 보입니다.

이러한 방식으로 관찰자는 스톱워치가 작동 중인지는 확인할 수 있지만, 채점이 완료될 때까지 총 이동 시간은 볼 수 없습니다. 이는 관찰자의 편향이 결과에 영향을 주는 것을 방지하기 위함입니다. 생쥐는 특히 세션 시작 시점에 탈출 관련 행동을 보입니다.

이러한 행동에는 장치의 벽면과 현수봉에 닿으려는 시도, 강한 신체 떨림 및 달리는 것과 유사한 사지 움직임이 포함됩니다. 이러한 움직임은 명확하게 운동성을 나타냅니다. 하지만 테스트가 진행됨에 따라 움직임은 더욱 미세해집니다.

본 연구실에서는 뒷다리의 움직임 없이 앞다리로만 제한된 작은 움직임은 이동성으로 간주하지 않습니다. 또한, 이전의 이동성 발현 과정에서 얻은 관성으로 인해 발생하는 진자 운동 형태의 흔들림 역시 이동성으로 간주하지 않습니다. 이제 실제 꼬리 매달기 시험 세션의 점수 산정 방식을 살펴보겠습니다.

일반적으로 가동 시간이 아닌 부동 시간이 보고됩니다. 부동 시간은 전체 테스트 시간인 360초에서 총 가동 시간을 빼서 계산할 수 있습니다. 점수 산정. 꼬리 매달기 테스트는 훈련과 연습이 필요합니다.

내부 실험실 표준을 수립하고 새로운 관찰자가 높은 수준의 신뢰도에 도달할 때까지 교육하는 것이 중요합니다. 본 논문에서는 꼬리 매달기 검사를 수행하고 점수를 매기는 방법을 설명합니다. 향후 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.