2023년 10월 20일
시알리다아제 처리를 사용하여 분리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에서 탈시알릴화된 인간 단핵구 유래 수지상 세포(mo-DC)를 생성하는 독특하고 포괄적인 프로토콜이 제시됩니다. 또한, mo-DC의 표현형 및 기능적 특성을 평가하고, 시알리다아제 처리가 mo-DC의 성숙 수준을 어떻게 향상시키는지를 평가하는 방법이 기재되어 있다.
당면역학 그룹 연구의 범위는 인간의 건강과 질병에서 글리칸 면역학의 역할을 연구하는 것입니다. 이 연구는 당화(glycosylation)에 의해 조절되는 생물학적 기전을 풀고, 당화(glycosylation)의 암 및 선천성 장애에 대한 새로운 글라이칸 기반 치료법을 발견하는 것을 목표로 합니다. 우리의 초점은 특히 반응 중에 관련 분자의 기능에 영향을 미치는 시알릴화 글라이칸에 있습니다.
우리는 시알산 함량을 변경하는 기술과 잠재적인 임상 응용 분야가 있는 글리칸 결합 단백질의 고처리량 용해를 위한 다중 모드 플랫폼을 개발했습니다. 이 분야의 연구를 발전시키기 위해 글라이칸 프로파일링, 선별 또는 항체 염색, 질량 분석법, 면역조직화학, 질병 모델로 세포주를 사용한 체외 분석, 효소 및 대사 공학을 통한 시알산 함량 조작과 같은 여러 기술을 사용합니다. 현재의 실험적 과제는 시알릴화 글라이칸과 렉틴 사이의 복잡한 상호 작용을 이해하는 것과 관련이 있습니다.
여러 면역 반응에는 메커니즘과 기능적 결과가 있습니다. 시알산은 수지상세포의 효능과 MHC1 회전율을 조절합니다. 이 발견은 새로운 생물학적, 병리학적 메커니즘을 정확히 찾아내고 혁신적인 치료법을 개발했습니다.
또한 새로운 면역 경로와 치료 조절을 위한 접근법을 확인했습니다. 치료용 인간 단핵구 유래 수지상 세포의 생체 외 생산에서 발생하는 문제 중 하나는 완전히 성숙할 수 없다는 것입니다. 이 프로토콜은 세포 생존력을 유지하면서 세포 표면을 시알리다아제로 효소로 처리함으로써 DC 성숙을 달성할 수 있음을 보여줍니다.
이 방법은 비용 효율적이고 시간을 절약합니다. 시알산 대사 억제제와 비교하여, 시알리다아제 처리는 세포 생존력을 유지하고 있는 동안 세포 표면 시알산 제거의 급속한 효과적인 방법을 제안합니다. 글라이칸에서 시알산 함량의 역할을 이해하면 암에서 이 글라이칸의 중요성에 대한 선례가 생기고 새로운 질병 메커니즘 및 신경병증 전략의 식별을 촉진할 수 있습니다.
본 논문은 시알리다아제(sialidase) 처리를 통해 말초혈액 단핵구(PBMC)로부터 탈시알릴화된 인간 단핵구 유래 수지상세포(mo-DCs)를 생성하는 포괄적인 프로토콜을 제시합니다. 또한 mo-DCs의 표현형 및 기능적 특성을 평가하는 방법과 시알리다아제 처리가 이들의 성숙에 미치는 영향을 평가하는 방법을 설명합니다.
수지상 세포(DC)의 시알릴화(sialylation)를 조절함으로써 DC 성숙도를 정밀하게 제어할 수 있으며, 이는 면역 요법 파이프라인에서 항원 제시 및 T세포 활성화에 직접적인 영향을 미칩니다. 이러한 접근 방식은 전임상 및 중개 연구를 위해 기능적으로 성숙한 DC를 생성하는 과정의 핵심 병목 현상을 해결하여, 면역 조절 전략에 대한 예측 신뢰도를 높여줍니다. 이 방법의 확장성과 재현성은 글라이코-면역 체크포인트(glyco-immune checkpoint) 조사 및 치료제 개발을 위한 재사용 가능한 역량으로서 가치를 지닙니다.
이 방법은 면역 조절 연구 및 치료 후보 물질 평가를 위해 제어된 DC 성숙을 가능하게 함으로써, 발견 단계부터 전임상 단계까지의 연속 과정에 통합됩니다.