Intraoperatieve visualisatie van subretinale injectie en netvliesloslating bij ratten
7 maart 2025
Dit artikel beschrijft methoden voor subretinale injectie bij ratten, waarbij gebruik wordt gemaakt van intraoperatieve visualisatie om zowel de injectieplaats als het gebied van netvliesloslating te controleren.
Ik onderzoek mechanismen van celdood in netvliesloslatingen en mijn doel is om de traceerbaarheid van in vitro gegevens naar in vivo experimenten te garanderen. In ons team hebben we de betrokkenheid van verschillende celdoodmechanismen tijdens fotoreceptordegeneratie aangetoond. Er zijn veel manieren beschreven om netvliesloslating bij knaagdieren te induceren.
Dit protocol is ontworpen om een antwoord te bieden op twee uitdagingen, reproduceerbaarheid en veiligheid. Het bieden van een reproduceerbaar en veilig protocol bij netvliesloslating zorgt voor efficiëntie bij dit soort onderzoek. Monteer om te beginnen een niet-afgeschuinde 10 millimeter 30-gauge canule metalen punt die op een spuit van 25 microliter is gecementeerd op een micro-injector.
Gebruik voor het induceren van langdurige netvliesloslating 2% hydroxypropylmethylcellulose of 1% tot 5% natriumhyaluronaat. Doe de bereide oplossing in de spuit. Breng vervolgens een druppel 0,5% tropicamide aan op één oog van een verdoofde rat om mydriasis te verkrijgen.
Breng een druppel oxybuprocaïne aan in het te opereren oog. Gebruik een oogheelkundige microscoop die is aangesloten op een voetschakelaar om de operatie uit te voeren. Om de sclera bloot te leggen, verankert u twee ooglidtrekkende hechtingen aan het buitenste kwart van de ooglidrand bij de boven- en onderoogleden.
Trek aan de hechtingen om een zachte uitstulping van het oog te krijgen. Maak met een naald van 30 gauge een scleraal kanaal door het temporale bulbaire bindvlies op ongeveer één tot twee millimeter van de cornea-limbus. Breng traangel aan als lens-ooginterface tijdens de procedure.
Om de netvliesplaat te visualiseren, plaatst u een platte contactlens met een diameter van acht millimeter op het oogoppervlak. Gebruik de voetschakelaar van de microscoop om scherp te stellen op het netvliesvlak. Breng nu de canule verticaal door het voorgevormde sclerale kanaal.
Benader langzaam het netvlies en druk er voorzichtig op totdat het netvlies witter wordt. Behoud de stabiliteit van de punt tijdens het injecteren door de retinotomie die wordt gevormd door de injectiestroom Verwijder na de injectie de punt van de retinotomie. Trek vervolgens voorzichtig de hele canule uit de glasvochtholte en zorg ervoor dat de lens niet wordt aangeraakt.
Zorg ervoor dat de pupilrode reflex wordt veranderd door de netvliesloslating zonder de bloedstroom in de glasholte te observeren. Verwijder de hechtingen van het ooglid en veeg eventuele bloedingen voorzichtig af. Beoordeel kort de intraoculaire druk handmatig.
Breng voor postoperatieve zorg chlooramfenicol retinol oogzalf aan op het geopereerde oog. Dien vervolgens een milliliter 5% glucose-monohydraat intraperitoneaal toe. Injecteer 0,9 milligram per kilogram atipamezol subcutaan.
Breng het dier ten slotte over naar een kamer met temperatuurregeling en houd het in de gaten totdat het wakker wordt. Succesvolle subretinale injectie werd geverifieerd door heldere subretinale vloeistof in optische coherentietomografie en de afwezigheid van subretinale bloeding in fundusfotografie. En een duidelijke netvliesloslating werd waargenomen in beide modaliteiten.
Kleine intravitreale bloedingen werden af en toe waargenomen, voornamelijk in de buurt van de injectieplaats, maar breidden zich niet uit tot in de subretinale ruimte.
Overzicht
Dit artikel beschrijft methoden voor subretinale injectie bij ratten, waarbij intraoperatieve visualisatie wordt gebruikt om zowel de injectieplaats als het gebied van de netvliesloslating te controleren. Het protocol is erop gericht de reproduceerbaarheid en veiligheid bij onderzoek naar netvliesloslating te verbeteren.
Belangrijkste studiecomponenten
Wetenschapsgebied
- Neurowetenschappen
- Retina-onderzoek
- Experimentele protocollen
Achtergrond
- Inzicht in mechanismen van celdood bij netvliesloslating.
- Belang van traceerbaarheid van in vitro naar in vivo data.
- Uitdagingen bij het waarborgen van reproduceerbaarheid en veiligheid in experimentele procedures.
- Verschillende methoden om netvliesloslating bij knaagdieren te induceren.
Doel van de studie
- Om een reproduceerbaar en veilig protocol voor netvliesloslating te bieden.
- Om efficiënt onderzoek naar netvliesdegeneratie te faciliteren.
- Om nauwkeurige chirurgische technieken voor subretinale injecties te waarborgen.
Gebruikte methoden
- Het monteren van een niet-geslepen canule op een micro-injector.
- Het gebruik van hydroxypropylmethylcellulose of natriumhyaluronate voor retina-detachement.
- Het uitvoeren van chirurgie onder een oogheelkundige microscoop.
- Injecteren via een vooraf gevormd sclera-kanaal en het beoordelen van de resultaten via optische coherentietomografie.
Belangrijkste resultaten
- Succesvolle subretinale injectie geverifieerd door aanwezigheid van heldere subretinale vloeistof.
- Afwezigheid van subretinale bloedingen waargenomen bij fundusfotografie.
- Duidelijke netvliesloslating bevestigd via beeldvormingsmodaliteiten.
- Kleine intravitreale bloedingen genoteerd, maar deze strekten zich niet uit tot in de subretinale ruimte.
Conclusies
- Het protocol verbetert de veiligheid en reproduceerbaarheid van studies naar netvliesloslating.
- Visuele bevestiging van succesvolle injecties is cruciaal voor de validiteit van het onderzoek.
- Postoperatieve zorg is essentieel voor het welzijn en herstel van de dieren.
Veelgestelde vragen
Industriële relevantie voor executives
Intraoperatieve visualisatie van subretinale injectie en netvliesloslating bij ratten voorziet in een kritieke behoefte aan reproduceerbare, gecontroleerde toediening van therapeutica en ziekte-modellering bij de ontdekking van oogheelkundige geneesmiddelen. Dit protocol maakt nauwkeurige manipulatie en monitoring van netvliesloslating mogelijk, wat de translationele continuïteit ondersteunt van preklinische modellen naar menselijk relevante workflows. Verbeterde reproduceerbaarheid en veiligheid hebben een directe invloed op het voorspellend vertrouwen van vroege stadia van therapeutische programma's voor het netvlies.
Strategische toepassingen in biofarma R&D
Vroege Ontdekking & Targetvalidatie
- Maakt gecontroleerde inductie van netvliesloslating mogelijk voor mechanistische studies naar fotoreceptordegeneratie.
- Ondersteunt functionele validatie van therapeutische targets in de subretinale ruimte.
- Faciliteert reproduceerbare ziektemodellering voor hypothese-gestuurd onderzoek.
Screening & assay-ontwikkeling
- Biedt een gevalideerd in vivo systeem voor het evalueren van de subretinale toediening van kandidaatverbindingen.
- Waarborgt een kwantitatieve beoordeling van het succes van de injectie via beeldvormingsmodaliteiten.
- Standaardiseert de procedure voor consistente assay-resultaten over verschillende studies heen.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Lijnt preklinische modellen van netvliesloslating af met klinische procedures voor translationele relevantie.
- Maakt het mogelijk om de therapeutische werkzaamheid en veiligheid te beoordelen in een gecontroleerde, reproduceerbare setting.
- Ondersteunt de risico-gecorrigeerde ontwikkeling van netvliestherapieën op basis van robuuste in vivo data.
Integratie van Pipeline & Workflow
Deze methode is geïntegreerd in het continuüm van discovery tot preklinisch onderzoek naar retinaire ziekten, waarbij in vitro bevindingen worden verbonden met in vivo validatie en waarbij de identificatie en optimalisatie van lead-compounds wordt ondersteund.
- Discovery Biology: Faciliteert hypothesetoetsing van celstervingsmechanismen en target engagement in retinaal weefsel.
- Screening: Levert reproduceerbare, kwantificeerbare resultaten voor de evaluatie van verbindingen in een ziekterel quantile model.
- Analytics: Maakt gebruik van fundusfotografie en optische coherentietomografie voor objectieve meting van injectie- en detacheringsresultaten.
- Translationeel onderzoek: Biedt continuïteit tussen knaagdiermodellen en menselijke chirurgische procedures voor subretinale toediening.
- Herbruik binnen de organisatie: Vestigt een gestandaardiseerd protocol dat aanpasbaar is over verschillende retina-onderzoeksprogramma's en therapeutische modaliteiten.
Operationele & Bedrijfsimpact
- Wetenschappelijke waarde: Verhoogt het voorspellende vertrouwen en vermindert mechanistische ambiguïteit bij de validatie van retina-doelwitten.
- Operationele waarde: Verbeterde reproduceerbaarheid, veiligheid en standaardisatie van in vivo retina-procedures.
- Strategische waarde: Verbetert de go/no-go besluitvorming en het kapitaalefficiëntie in ophthalmische R&D-portfolio's.
- Impact op portfolio: Maakt risico-gecorrigeerde prioritering en bevordering van therapeutische retina-kandidaten mogelijk.
Overwegingen voor implementatie
- Vereist expertise in oogheelkundige microchirurgie en anesthesie bij knaagdieren.
- Vereist toegang tot oogheelkundige microscopen, microinjectoren en beeldvormingsplatforms.
- Vereist standaardisatie tussen teams voor reproduceerbaarheid en vergelijkbaarheid van gegevens.
- Aanpasbaar aan verschillende duur van netvliesloslating en viscositeiten van oplossingen, afhankelijk van de specifieke onderzoeksdoelstellingen.
- Potentiële beperkingen omvatten het risico op lensbeschadiging, bloedingen of het mislukken van de loslating, wat een zorgvuldige naleving van de procedure vereist.
