Diagnostyczna sekcja zwłok oraz pobieranie wybranych tkanek i próbek u szczurów i myszy

Ogólnym celem tej procedury jest przeprowadzenie podstawowej nekropsji gryzonia. Realizuje się to w pierwszej kolejności poprzez zapisanie podstawowych informacji o zwierzęciu. Drugim krokiem procedury jest zbadanie organów wewnętrznych.

Trzecim krokiem jest pobranie próbek, takich jak organy lub węzły chłonne krezkowe. Ostatecznie stan zdrowia zwierzęcia można określić za pomocą histopatologii lub innych technik. Zazwyczaj osoby początkujące w przeprowadzaniu nekropsji napotykają trudności, ponieważ anatomia gryzoni jest poznawana w praktyce.

Metody te mogą pomóc w udzieleniu odpowiedzi na kluczowe pytania dotyczące stanu zdrowia zwierząt w kolonii badawczej. Wizualna demonstracja tych technik jest niezbędna, ponieważ opanowanie lokalizacji poszczególnych tkanek oraz umiejętność odróżnienia tkanki prawidłowej od patologicznej wymaga czasu. Przed eutanazją zwierzęcia należy zebrać informacje o jego historii oraz odnotować aktualne parametry, takie jak kondycja fizyczna, zachowanie, płeć, wiek, masa ciała, linia i tym podobne.

Zapis ten jest kluczowy dla osoby, która będzie badać tkanki przed eutanazją zwierzęcia. Należy upewnić się, że stosowany jest odpowiedni sprzęt ochrony osobistej. Przygotować deskę sekcyjną, pęsetę, nożyczki, etykiety do pojemników, utrwalacz, podłoża oraz naczynia do pobierania próbek.

Po eutanazji zwierzęcia należy ocenić jego kondycję fizyczną, sprawdzić obecność nieprawidłowości skóry i okrywy włosowej, wyniszczenia organizmu oraz odwodnienia. Należy również poszukać dowodów na manipulacje sztuczne, implanty lub blizny pooperacyjne u zwierzęcia. Następnie, przy użyciu mikroskopu sekcyjnego, należy szczegółowo zbadać wszystkie otwory naturalne.

Obejmują one uszy, oczy, nos, pysk, odbyt oraz narządy płciowe. Teraz połóż zwierzę na plecach na stole sekcyjnym, unieś skórę pęsetą i za pomocą nożyczek rozetnij skórę od odbytu aż do podbródka. Następnie odchyl skórę na boki i przetnij ścianę brzuszną oraz klatkę piersiową.

Odsłoń narządy klatki piersiowej, wykonując dwa nacięcia boczne wzdłuż każdej strony klatki piersiowej. Przetnij przeponę. Następnie usuń klatkę piersiową, przecinając górną część mostka.

Następnie obejrzyj odsłonięte organy klatki piersiowej i jamy brzusznej. Zwróć uwagę na wszelkie zmiany w kolorze, nietypowe zapachy, rozmiary, różnice oraz brakujące lub przemieszczone organy. Oceń konsystencję powierzchni organów i odnotuj obecność mas tkankowych lub kieszonek wypełnionych płynem.

Należy również odnotować obecność płynu w którejkolwiek z jam. Kontynuuj badanie, przechodząc do przewodu pokarmowego. Sprawdź krezkę pod kątem powiększonych węzłów chłonnych lub mas tkankowych.

Opisz zawartość przewodu pokarmowego i dokładnie sprawdź, czy nie występują pogrubienia ścian, masy lub krwotoki. Aby zbadać wnętrze nerek, użyj ostrza do wykonania cięcia podłużnego lewej nerki oraz cięcia poprzecznego prawej nerki, poza osią środkową. Sprawdź miąższ pod kątem wszelkich nieprawidłowości.

Następnie należy zbadać układ moczowo-płciowy u samców. Zidentyfikuj pęcherzyki nasienne, jądra, najogony oraz moczowody. W przypadku samic zidentyfikuj gruczoły peryuralne, macicę, jajniki oraz moczowody.

Zbadaj układ moczowo-płciowy pod kątem zatorów, zbiorników płynu, krwotoków lub innych nieprawidłowości. Po zakończeniu tych badań wyizoluj i wycinij organy docelowe do dalszej analizy. Zazwyczaj podczas wycinania pobiera się serce, wątrobę, nerki i śledzionę.

Zanurz każdy narząd w utrwalaczu lub wykonaj pierwsze kroki protokołu wymagającego tych tkanek, takiego jak zamrażanie lub immunohistochemia, aby uzyskać odpowiednią fiksację. Zazwyczaj tkanki zanurza się w konserwancie, np. 10%NBF, zachowując stosunek 20 objętości utrwalacza na jedną objętość tkanki. W przypadku pracy ze szczurami, pobierz aspirat oskrzelowy przed aspiratem nosowym.

Zacznij od odciągnięcia skóry i tkanek podskórnych od obszaru szyjnego, odsłaniając w ten sposób gruczoły ślinowe i mięśnie szyi. Następnie usuń te tkanki, aby odsłonić tchawicę. Wykonaj nacięcie o długości 3 mm w tchawicy i wprowadź do światła tchawicy, kierując się w stronę kwatery, pipetę z 1 mL płynu do pobierania próbek.

Powoli przepłucz tchawicę i płuca płynem pobierającym trzy razy. Następnie odessaj płyn pobierający i wyjmij pipetę z tchawicy. Nie cały płyn powróci do pipety.

W związku z tym należy powtórzyć ten proces, jeśli potrzebne jest więcej płynu. Do badań na myszach. Aby pobrać próbkę aspiratu z nosa lub aspiratu z oskrzeli, należy uzyskać dostęp do jednostki ATU nosogardzielnej za pomocą wysterylizowanych nożyczek.

Przetnij staw skroniowo-żuchwowy i odchyl żuchwę od szczęki, odsłaniając wejście do nosogardzieli w celu pobrania aspiratu z nosa. Wprowadź pipetę z jednym mililitrem płynu pobierającego do nosogardzieli myszy lub do światła tchawicy szczura. Pipeta powinna być skierowana kranialnie i wsunięta do środka.

Następnie końcówka styka się z podniebieniem nosowym. Po osiągnięciu tej pozycji powoli wstrzyknij płyn pobierający. W miarę wprowadzania płynu do jamy nosowej, w otworze nosowym utworzą się meniski, które powinny być również widoczne przez półprzezroczyste podniebienie jamowe.

Jeśli jednak płyn wydostaje się przez pyszczek, należy zmienić orientację pipety. Po całkowitym wstrzyknięciu wciągnąć płyn pobrany z jamy nosowej do pipety, a następnie wyjąć pipetę. Następnie chwycić tchawicę pęsetą i przeciąć ją tuż powyżej pęsety.

Następnie delikatnie pociągnij tchawicę do góry, przecinając połączenia tkankowe, aż do momentu, gdy cały zestaw tkanek klatki piersiowej będzie mógł zostać wycięty. Teraz połóż płuca płasko na powierzchni roboczej i luźno zawiąż fragment szwy lub sznurka wokół tchawicy. Nie zaciśnij węzła, w przeciwnym razie nie będziesz w stanie wprowadzić igły do tchawicy.

Następnie należy napełnić strzykawkę utrwalaczem i wprowadzić igłę do otworu tchawicy, mocując tchawicę do igły. Za pomocą pęsety powoli wypełniać płuca utrwalaczem, aż zostaną całkowicie rozprężone. Objętość utrwalacza będzie zależeć od wieku, szczepu i stanu zdrowia zwierzęcia.

Jeśli niedopompowane tkanki będą wydawać się płaskie, a w przypadku nadmiernego napompowania z tkanki po napełnieniu będzie wyciekać spieniony płyn, należy mocniej zawiązać szew lub sznurek wokół tchawicy, aby zapobiec cofaniu się utrwalacza z płuc. Następnie napompowane płuca należy umieścić w utrwalaczu. Zwierzę należy położyć na czystej desce sekcyjnej w pozycji brzusznej i za pomocą nożyczek oraz pincety usunąć skórę i mięśnie pokrywające jamę klatki piersiowej.

Następnie należy odciąć głowę truchła za pomocą małych nożyczek. Wprowadź dolne ostrze do otworu wielkiego (foramen magnum) i przetnij linię środkową czaszki, wykonując ruch ku górze. Teraz, używając pincety, odsłoń mózg, rozchylając czaszkę.

Jeśli patolog preferuje wycinanie przekrojów mózgu bezpośrednio w czaszce, należy niezwłocznie umieścić czaszkę z odsłoniętym mózgiem w 10%NBF. W przeciwnym razie należy chwycić głowę w okolicy nosa pęsetą lub palcami i delikatnie odwrócić czaszkę tak, aby grawitacja pomogła tkance wysunąć się z czaszki. Ostrożnie wsuń pęsetę zakrzywioną wzdłuż zewnętrznej krawędzi mózgu, zaczynając od płatów węchowych.

Przesuwaj pęsetę wzdłuż czaszki w kierunku móżdżku, delikatnie ściskając nerwy tą samą pęsetą. Po wyjęciu mózgu umieść go w utrwalaczu. Aby zlokalizować węzły chłonne krezkowe, najpierw odnajdź dużą, kształtna w kształt przecinka ślepa jelita grubego. Węzły chłonne krezkowe to żółte, owalne lub kuliste grudki tkanki w krezce sąsiadującej z kątnicą.

Są one często nieco grubsze i mają twardszą strukturę niż otaczająca krezka i tkanka tłuszczowa. Na początku pomocne może być użycie okularu dyssekcyjnego w celu rozróżnienia tkanek, jednak z doświadczeniem nie będzie ono konieczne. Za pomocą pęsety i nożyczek wyizoluj węzły chłonne krezkowe, a następnie przenieś je do probówki do przechowywania w celu wykorzystania w hodowli, reakcji PCR lub badaniu histopatologicznym.

Po zakończeniu protokołu patolog lub naukowiec otrzymuje następujące materiały: pisemny raport dotyczący obiektywnego i subiektywnego stanu zwierzęcia w momencie eutanazji, obiektywny opis tkanek przed ich utrwaleniem, wszystkie główne narządy jamy brzusznej i klatki piersiowej w utrwalaczu, mózg i węzły chłonne krezkowe oraz próbki aspiratu z nosa i oskrzeli. Po opanowaniu techniki, skrócona nekropsja może zająć mniej niż 30 minut.

Podczas wykonywania tej procedury ważne jest, aby pamiętać o zapisywaniu obserwacji dotyczących stanu zwierzęcia oraz jego tkanek. Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać gruntowną wiedzę na temat przeprowadzania pełnej nekropsji gryzonia, w tym pobierania perfundowanych płuc, węzłów chłonnych krezkowych oraz mózgu.