Owarektomia i suplementacja 17β-estradiolu u szczurów i myszy: demonstracja wizualna

Ogólnym celem niniejszej procedury jest uzyskanie ścisłej kontroli nad wahającymi się w przeciwnym razie stężeniami estrogenów w surowicy u samic szczurów i myszy. Osiąga się to poprzez uprzednie usunięcie jajników drogą przez grzbiet. Następnie przygotowuje się elastyczne kapsułki oraz mieszaninę Nutella.

Na koniec kapsułkę wprowadza się podskórnie lub mieszankę z Nutellą podaje się doustnie. Ostatecznie wyniki można uzyskać za pomocą radiimmunoprocesu, który wykazuje stabilne lub fluktuujące stężenia 17 beta estradiol w surowicy odpowiednio dla metody z kapsułką i Nutellą. Główną zaletą tych technik w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak granulaty o powolnym uwalnianiu, jest fakt, że udowodniono, iż pozwalają one na utrzymanie fizjologicznych stężeń estradiol przez przedłużony czas.

Metoda ta może pomóc w uzyskaniu odpowiedzi na kluczowe pytania w dziedzinie estrogenów, takie jak różnice w efektach w zależności od sposobu podania, dróg podania i dawek. Po znieczuleniu zwierzęcia należy umieścić je w pozycji brzusznej na płycie grzewczej połączonej z termometrem rektalnym. IGEL oraz lek przeciwbólowy pooperacyjny należy podać podskórnie w boczną część szyi zwierzęcia.

Podaj IL w dawce five mg/kg w soli fizjologicznej przednio od grzebienia biodrowego w obszarze o wymiarach four by four cm. Następnie zdezynfekuj ten obszar środkiem antyseptycznym przed przykryciem zwierzęcia polem operacyjnym z otworem o wymiarach four by four cm. Wykonaj cięcie w linii pośrodkowej o długości two to three cm i rozpreceq tępo skórę od leżącej pod nią powięzi, one cm bocznie od linii pośrodkowej.

Wykonaj kolejne nacięcie przez powięź. Następnie, tak powierzchownie jak to możliwe, wykonaj tępe rozczepianie bocznie pod powięzią, aż do osiągnięcia jamy brzusznej. Za pomocą pęsety chwyć tkankę tłuszczową otaczającą jajnik w jamie brzusznej i delikatnie ją wyciągnij.

Zidentyfikuj jajnik, a następnie podwiąż rogi macicy i naczynia krwionośne w odległości od 0,5 do 1 cm proksymalnie od tej struktury. Wycięty jajnik wraz z podwiązaną tkanką tłuszczową usuń, a pozostałą tkankę umieść z powrotem w jamie brzusznej.

Wykonaj kolejne nacięcie w powięzi po przeciwnej stronie i usuń drugi jajnik. Zamknij rany, o ile nie podajesz natychmiast 17 beta estradiolu. Pozostaw zwierzę do wybudzenia z narkozy.

Umieść zwierzę w ogrzewanej klatce na co najmniej dwie godziny po operacji. Przez pierwsze kilka dni po zabiegu trzymaj szczura osobno. 24 godziny po operacji podać podskórnie.

Wstrzyknij zwierzętom kolejne pięć mg/kg IL, aby podać 17 beta estradiol za pomocą kapsułek scholastic. Dokładnie wymieszaj wymaganą ilość w oleju sezamowym. Za pomocą pęsety odetnij fragmenty rurek scholastic o długości 3 cm oraz drewniane patyczki aplikacyjne o długości 5 mm do uszczelnienia.

Wciśnij jeden drewniany korek do kapsułki szkolnej przed wstrzyknięciem roztworu 17 beta estradiol w oleju sezamowym. Aby wypełnić całą długość, delikatnie zamknij otwarty koniec kapsułki szkolnej drugim drewnianym korkiem. Inkubuj kapsułki w pozostałym roztworze 17 beta estradiol przez noc przed implantacją.

Po zamknięciu nacięć po ektomii, ogolić i zdezynfekować obszar o wymiarach dwa na dwa centymetry na grzbietowej stronie szyi szczura. Wykonać nacięcie o długości jednego centymetra, a następnie rozszerzyć je bocznie metodą tępą. Wypreparować kieszeń podskórną, tworząc wystarczającą przestrzeń dla kapsuły.

Przetrzyj kapsułkę szkoleniową i delikatnie wprowadź ją przez nacięcie. Następnie zamknij nacięcie szwem. Upewnij się, że kapsułka w jak najmniejszym stopniu napina skórę, szczególnie w okolicy rany.

Aby wykorzystać krem orzechowy Nutella jako nośnik do podawania estrogenu, należy całkowicie rozpuścić 17 beta estradiol w oleju sezamowym, a następnie wymieszać olej sezamowy z kremem orzechowym. Na pięć dni przed eksperymentem przygotować krem orzechowy będący placebo, bez dodatku 17 beta estradiol. W dniach od pierwszego do trzeciego należy przyuczyć szczury do spożywania kremu orzechowego wolnego od hormonów.

W czwartym i piątym dniu trenuj zwierzęta w grupach. Przez cały czas trwania eksperymentów podawaj im krem orzechowy w oddzielnych klatkach. Umieść zwierzęta w osobnych klatkach w czasie podawania im surowicy fizjologicznej z kremem orzechowym.

Stężenia 17 beta estradiolu, które obecne metody mają na celu odtworzyć, wynoszą w przybliżeniu od 5 do 140 picogramów na mililitr dla szczurów oraz od 5 do 35 picogramów na mililitr dla myszy. Jak pokazano tutaj. W przypadku podania samicom szczurów linii Sprague-Dawley o masie 300 gramów.

Podskórne elastyczne kapsułki zapewniają powoli spadające stężenia 17 beta estradiolu w surowicy, od około 40 picograms per milliliter w drugim dniu do 10 picograms per milliliter do 35. dnia. Jednakże, bezpośrednio po podaniu, można spodziewać się szczytowego stężenia w surowicy wynoszącego około 1000 picogram per milliliter, które spada do poziomu fizjologicznego w ciągu ośmiu godzin, w przypadku podania kapsułek samicom myszy C 57 black six o masie 25 gram.

Stężenie w surowicy powoli spadało od około 90 picograms per milliliter w drugim dniu do 25 picograms per milliliter w 35. dniu przy podawaniu za pomocą kremu do nosa szczurom o masie 300 grams. Fizjologiczne poziomy 17 beta estradiol wahały się codziennie od 10 do 70 picograms per milliliter u myszy.

Poziomy 17 beta estradiolu wahały się od 20 do 120 pg/ml. Po opanowaniu techniki, ektomia i implantacja kapsułki mogą zostać wykonane w 10 minut, pod warunkiem przeprowadzenia procedury w sposób prawidłowy. Podczas wykonywania tego zabiegu ważne jest ścisłe przestrzeganie zasad higieny.