Deparafinizacja i ponowne uwodnienie skrawków tkanek: dwuetapowa procedura usuwania wosku parafinowego z preparatów tkankowych FFPE, a następnie ponowne uwodnienie tkanek

Znaczenie dla przemysłu

Obróbka tkanek metodą FFPE umożliwia długoterminowe archiwizowanie preparatów klinicznych przy jednoczesnym zachowaniu integralności molekularnej do dalszych analiz. Deparafinizacja i rehydratacja są niezbędnymi etapami przygotowawczymi, które przywracają dostępność tkanki do oceny biomarkerów i badań mechanistycznych. Ten schemat postępowania wspomaga walidację celów oraz rozwój testów w procesie odkrywania leków onkologicznych, zapewniając powtarzalne przygotowanie próbek z zasobów archiwalnych.

Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym

Wczesne odkrywanie i walidacja celu

• Wartość naukowa: Umożliwia badanie celów terapeutycznych w klinicznie istotnych modelach tkanek ludzkich.
• Wartość operacyjna: Zapewnia dostęp do zarchiwizowanych kohort FFPE w celu retrospektywnej analizy ekspresji celów.
• Wartość prognostyczna: Wspiera korelację biomarkerów z wynikami klinicznymi w celu zmniejszenia ryzyka przy wyborze celu.

Przesiewy i opracowywanie testów

• Gotowość do analizy: Pozwala na uzyskanie rehydratowanych przekrojów tkanek kompatybilnych z procedurami immunohistochemicznymi oraz hybrydyzacją in situ.
• Wynik ilościowy: Zachowuje antygenowość i integralność kwasów nukleinowych, umożliwiając uzyskanie mierzalnych sygnałów w dalszych etapach analizy.
• Powtarzalność: Standaryzowany czas inkubacji w rozpuszczalnikach zapewnia spójne przygotowanie tkanek pomiędzy poszczególnymi partiami.

Badania translacyjne i przedkliniczne

• Znaczenie chorobowe: Wykorzystanie przekrojów FFPE z guzów przewodu pokarmowego do modelowania biologii raka u ludzi.
• Ciągłość translacyjna: Połączenie wyników badań podstawowych z walidacją na materiałach klinicznych.
• Minimalizacja ryzyka mechanistycznego: Potwierdzenie obecności celu w tkance ludzkiej przed zainwestowaniem w systemy modelowe.

Integracja potoku i przepływu pracy

Niniejsza procedura wpisuje się w proces badawczy, umożliwiając analizę zarchiwizowanych tkanek ludzkich przed etapem identyfikacji wiodących cząsteczek oraz walidacji przedklinicznej.

• Biologia odkrywcza: Umożliwia weryfikację hipotez dotyczących aktywacji szlaków w pierwotnych próbkach ludzkich guzów.
• Przesiewy: Przygotowuje tkankę do platform przesiewowych biomarkerów wymagających zachowania nienaruszonej morfologii i antygenów.
• Analityka: Pozwala na uzyskanie przekrojów odpowiednich do ilościowego obrazowania i odczytów patologii cyfrowej.
• Badania translacyjne: Wspiera ciągłość procesu od odkrywania celu do korelacji z próbkami klinicznymi.
• Ponowne wykorzystanie w instytucji: Ustanawia powtarzalny protokół przygotowania dla wielu punktów końcowych analiz w różnych projektach.

Wpływ operacyjny i przedsiębiorstwowy

• Wartość naukowa: Zwiększa pewność co do istotności celu poprzez bezpośrednią analizę tkanek ludzkich.
• Wartość operacyjna: Umożliwia standaryzowane przetwarzanie bloków FFPE dla wysokoprzepustowej histologii.
• Wartość strategiczna: Zmniejsza zależność od modeli zastępczych dzięki wykorzystaniu próbek z adnotacjami klinicznymi.
• Wpływ na portfolio: Dostarcza informacji do decyzji o kontynuacji lub przerwaniu projektu (go/no-go) w oparciu o ekspresję celu w tkankach pochodzących od pacjentów.

Wskazówki dotyczące wdrożenia

• Wymaga personelu przeszkolonego w zakresie histologii do pracy z delikatnymi skrawkami tkanek.
• Zależne od dostępu do roztworów ksylenu i etanolu z odpowiednią wentylacją i systemem utylizacji odpadów.
• Wymaga zastosowania standaryzowanych protokołów czasowych, aby zapobiec nadmiernemu lub niewystarczającemu przetwarzaniu.
• Należy uwzględnić zmienność grubości tkanek podczas optymalizacji czasu inkubacji.
• Ograniczone przez degradację kwasów nukleinowych i białek w starszych blokach FFPE, co wymaga oceny QC.

Najczęściej zadawane pytania dotyczące biofarmacji