Techniki szybkiego pobierania próbek z sześciu kluczowych narządów u dorosłego Xenopus

Przed tą pracą opracowałem protokół szybkiej perfuzji. Protokół ten powinien być stosowany przed pobraniem próbek do badań, takich jak proteomika i immunochemia, w których obecność nadmiernej ilości krwi w tkankach jest niepożądana. Chociaż dostępnych jest wiele schematów i innych pomocy, obecnie nie ma kompleksowych przewodników, jak szybko i niezawodnie wypreparować tkanki dorosłego Xenopus.

Mamy nadzieję, że ustandaryzowane techniki pobierania próbek pozwolą laboratoriom na łatwe udostępnianie tkanek. Jest to szczególnie korzystne w sytuacjach, gdy import i eksport zwierząt nie jest możliwy ze względu na obawy dotyczące bezpieczeństwa biologicznego lub ograniczenia w transporcie. Na początek weź żabę, która była zanurzona w roztworze do eutanazji na godzinę i uszczypnij jej stopę, aby sprawdzić, czy nie ma reakcji bólowej.

Zważ Xenopus i wykonaj dodatkowe pomiary, takie jak długość od pyska do otworu wentylacyjnego. Połóż żabę na grzbiecie i zabezpiecz jej kończyny blisko ciała. Za pomocą nożyczek preparacyjnych wykonaj nacięcie przez skórę wzdłuż linii środkowej, a następnie rozciągnij je na boki, aby utworzyć dwa płaty skóry.

Następnie zlokalizuj linea alba i chwyć ją kleszczami. Delikatnie wyciągnij go z jamy celomicznej i za pomocą nożyczek przetnij leżącą pod spodem muskulaturę. Utwórz dwie klapy ze ściany gniazda.

Zidentyfikuj wciąż bijące serce i użyj nożyczek preparacyjnych, aby przyciąć kości cricoid, aby uzyskać lepszy dostęp. Teraz użyj kleszczyków tkankowych, aby zidentyfikować cienkie osierdzie i rozciągnąć je. Za pomocą końcówki nożyczek do irydektomii ostrożnie przebij osierdzie.

Następnie usuń osierdzie z dala od trzech komór serca. W tym protokole pokazano pobieranie próbek z komory serca, lewego płata wątroby, trzustki, ciała tłuszczowego, sparowanych nerek. Aby pobrać próbkę komory serca, chwyć ją na wierzchołku kleszczami, zlokalizuj jej połączenie z wyroczniami i pniem tętniczym i odetnij ją poniżej tych punktów.

Następnie obserwuj trzy płaty wątroby. Delikatnie unieś lewy płat, aby odsłonić przewody wątrobowe i torbielowate, a następnie pobierz próbkę jednej trzeciej tego płata poniżej przewodów. Jeśli żaba jest samicą, zlokalizuj jajnik pokryty nabłonkiem zarodkowym.

Delikatnie zmień położenie płatków w każdą stronę, aby odsłonić obszar przyczepu. Użyj nożyczek, aby wyciąć jajniki jak najbliżej nerek, nie uszkadzając ich. Następnie zbadaj płat przyśrodkowy wątroby i jego połączenia z żołądkiem i dwunastnicą przez krezkę i przewód wątrobowo-trzustkowy.

Za pomocą nożyczek do irydektomii przeciąć więzadło wątrobowo-oddechowe krezki i przewód wątrobowo-trzustkowy w pobliżu dwunastnicy. Odłącz trzustkę i przewód od płata przyśrodkowego wątroby, nie pozostawiając przyczepionej ciemnej tkanki wątroby. Następnie przytrzymaj żołądek za pomocą kleszczy zębatych.

Następnie użyj kleszczyków tkankowych, aby przytrzymać górny koniec trzustki. W 5-krotnym powiększeniu ostrożnie oddziel trzustkę od żołądka. Teraz zlokalizuj i wytnij pęcherz moczowy, przecinając jak najbliżej kloaki, a następnie wyrzuć tkankę.

Następnie zidentyfikuj jelito grube i rozciągnij je, przecinając je w pobliżu kloaki. Następnie oddziel ciała tłuszczowe z każdej strony. Chwyć podstawę lewego ciała tłuszczowego i odetnij go od otrzewnej.

W przypadku samic żab lub samców z widocznymi szczątkowymi jajowodami, należy przytrzymać jajowód i oddzielić go od nerki i kloaki. Przeciąć połączenie kloaki i kontynuować odłączanie go od nerki, usuwając wszelkie wyraźne przyczepy otrzewnej. Teraz użyj kleszczy, aby przytrzymać nerki i przeciąć otrzewną na ich dolnym końcu.

Podnieś nerki z jamy celomicznej. Za pomocą nożyczek odłącz otrzewną jak najbliżej nerek, nie powodując szkody. W 5-krotnym powiększeniu usuń nadmiar otrzewnej i resztki tkanek, takich jak jądra, ciała tłuszczowe lub śledziona.

Po uwolnieniu zwierzęcia połóż je na brzuchu i zabezpiecz jego kończyny. Wybierz jedną tylną kończynę do pobrania próbki i zabezpiecz jej stopę. Wytnij płat skóry w kształcie migdała znad obszaru mięśnia brzuchatego łydki lub kości piszczelowo-strzałkowej.

Następnie wypłucz wszystkie próbki i PBS, sprawdź, czy nie ma nadmiaru tkanek i przytnij przed użyciem, jeśli to konieczne. Komora serca, lewy płat wątroby, trzustka, lewe ciała tłuszczowe, sparowane nerki i płat skóry zostały czysto wycięte w ciągu godziny od eutanazji.