Mysi model tętniaka aorty brzusznej za pomocą okołoprzybytkowego nacieku chlorku wapnia i elastazy
2 sierpnia 2024
Ten manuskrypt przedstawia protokół tworzenia mysiego modelu tętniaka aorty brzusznej myszy przy użyciu chlorku wapnia i elastazy, łącząc zalety poprzednich metod modelowania. Model ten można wykorzystać do badania mechanizmów patofizjologicznych leżących u podstaw tętniaków aorty brzusznej.
W pracy przedstawiono protokół tworzenia mysiego modelu tętniaka aorty brzusznej z wykorzystaniem chlorku wapnia i elastazy, który można wykorzystać do zbadania mechanizmu patofizjologicznego tętniaka aorty brzusznej. Nasz protokół łączy w sobie zalety okołoprzybytkowego ŚOI i infiltracji chlorkiem wapnia, który jest bezpiecznym, stabilnym i powtarzalnym mysim modelem potrójnego A, wykazującym wysoką częstość występowania potrójnego A, znaczącego aorty brzusznej i zmian patofizjologicznych przypominających te obserwowane u człowieka w A.In przyszłości, nasz zespół badawczy jest zaangażowany w dedykowane zaangażowanie w badania kliniczne i podstawowe dotyczące choroby tętnic obwodowych, ze szczególnym naciskiem na patogenezę tych podstaw i rozwoju podejść terapeutycznych. Na początek umieść znieczuloną mysz w pozycji leżącej na poduszce grzewczej.
Po goleniu i dezynfekcji umieść mysz pod mikroskopem stereoskopowym. Za pomocą nożyczek wykonaj podłużne nacięcie o długości około dwóch do 2,5 centymetra wzdłuż linii środkowej brzucha. Wprowadzić do jamy otrzewnej przez kreskę białą z dostępu przezbrzusznego.
Umieść retraktor, aby odsłonić jamę otrzewnej. Umieść jelita i okrężnicę w prawej połowie brzucha za pomocą zwykłej gazy nasączonej solą fizjologiczną. Wykonaj oddzielenie tkanki łącznej i tłuszczowej przylegającej do aorty podnerkowej jamy brzusznej i żyły głównej dolnej za pomocą kleszczy i wacików.
Delikatnie rozetnij aortę brzuszną i odsłoń szczelinę między aortą brzuszną a leżącą nad nią częścią mięśnia lędźwiowego większego. Włóż wysterylizowane paski wacika do szczeliny, nie uszkadzając tętnicy lędźwiowej ani żyły. Umieść waciki nasączone 0,9 molowym chlorkiem wapnia na przydance aorty brzusznej.
Po 15 minutach wyjmij wacik. Rozcieńczyć elastazę do dwóch miligramów na mililitr wodą podwójnie destylowaną. Za pomocą strzykawki insulinowej nanieść 50 mikrolitrów rozcieńczonej elastazy na podnerkowy odcinek aorty brzusznej.
Owiń paski wacika, aby zakryć aortę brzuszną i żyłę główną dolną. Przykryj jamę brzuszną podczas procesu infiltracji wysterylizowaną gazą. Po 15 minutach ostrożnie usuń paski gazy i wacika, przesuń jelita i okrężnicę z powrotem do ich pierwotnych pozycji.
Przykryj leczoną aortę krezką i zwilż jelita 0,9% solą fizjologiczną, aby zapobiec zrostowe. Za pomocą niewchłanialnego szwu polipropylenowego 6/O zamknij warstwę mięśniową i skórę. Umieść mysz na poduszce grzewczej ultrasonografu gryzoni.
Zastosuj supulę ultradźwiękową do brzucha i zmierz maksymalną średnicę tętniaka oraz średnicę normalnego odcinka aorty brzusznej. W arkuszu Excela oblicz zwiększony procent aorty brzusznej podnerkowej. Po badaniu użyj serwetki, aby zetrzeć pozostałą suplantę ultradźwiękową i umieść mysz na poduszce grzewczej, aż do całkowitego wyzdrowienia.
W PPE plus chlorek wapnia u 91,67% myszy rozwinął się tętniak aorty brzusznej po 21 dniach od operacji, podczas gdy w grupie pozorowanej nie zaobserwowano powstania tętniaka. Średnia maksymalna średnica wewnętrzna aorty brzusznej podnerkowej była istotnie większa w grupie PPE z chlorkiem wapnia w porównaniu z grupą pozorowaną. Średnia maksymalna średnica zewnętrzna aorty brzusznej podnerkowej była istotnie większa w grupie PPE z chlorkiem wapnia w porównaniu z grupą pozorowaną.
W badaniu histologicznym stwierdzono pogrubienie ściany aorty, naciek komórek zapalnych, degradację macierzy zewnątrzkomórkowej, odkładanie się włókien kolagenowych i rozpad włókien elastycznych w grupie PPE plus chlorek wapnia w porównaniu z grupą pozorowaną.
Przegląd
Niniejsze badanie przedstawia protokół tworzenia modelu tętniaka aorty brzusznej u myszy z wykorzystaniem chlorku wapnia i elastazy. Model ten został opracowany w celu zbadania mechanizmów patofizjologicznych leżących u podstaw powstawania tętniaków aorty brzusznej.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Neurobiologia
- Biologia naczyniowa
- Patofizjologia
Wstęp
- Tętniaki aorty brzusznej (AAA) są istotnymi schorzeniami naczyniowymi.
- Istniejące modele posiadają ograniczenia, które niniejsze badanie ma na celu wyeliminować.
- Proponowany model łączy zalety wcześniejszych metod.
- Wykazuje on wysoką częstotliwość występowania oraz zmiany patofizjologiczne podobne do tętniaków aorty brzusznej u ludzi.
Cel badania
- Ustanowienie wiarygodnego modelu mysiego do badań nad AAA.
- Ułatwienie badania patogenezy AAA.
- Opracowanie metod terapeutycznych dla AAA i chorób pokrewnych.
Zastosowane metody
- Znieczulenie myszy i ułożenie jej na podkładce grzewczej.
- Podłużne nacięcie wzdłuż linii środkowej brzucha.
- Dostęp do jamy otrzewnej drogą przezbrzuszną.
- Aplikacja chlorku wapnia i elastazy w celu indukcji tętniaka.
Główne wyniki
- Model wykazuje wysoką częstość występowania AAA.
- Zmiany patofizjologiczne przypominają te obserwowane u ludzi.
- Protokół jest bezpieczny, stabilny i powtarzalny.
- Umożliwia on szczegółowe badanie mechanizmów AAA.
Wnioski
- Ten model stanowi cenne narzędzie w badaniach nad AAA.
- Usprawnia on zrozumienie patofizjologii AAA.
- Przyszłe badania mogą skoncentrować się na opracowywaniu metod terapeutycznych.
Najczęściej zadawane pytania
Znaczenie dla przemysłu
Solidne modele przedkliniczne są niezbędne do ograniczania ryzyka w przypadku hipotez dotyczących celów naczyniowych i rozwoju badań translacyjnych nad tętniakiem aorty brzusznej (AAA). Połączony model mysi z zastosowaniem chlorku wapnia i elastazy w obszarze okołynaczyniowym zapewnia wysoką powtarzalność i wierność patofizjologiczną, co zwiększa pewność prognostyczną we wczesnej fazie odkrywania leków naczyniowych. Model ten umożliwia zespołom portfelowym badanie mechanizmów i ocenę potencjalnych interwencji z większą ciągłością translacyjną.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne odkrywanie i walidacja celu
- Umożliwia analizę mechanistyczną patogenezy tętniaka aorty brzusznej (AAA) w kontrolowanym systemie in vivo.
- Wspiera funkcjonalną walidację celów terapeutycznych poprzez odtworzenie kluczowych cech ludzkiego AAA.
- Ułatwia biologiczną ocenę ryzyka dla celów naczyniowych przed optymalizacją wiodących związków.
- Zapewnia powtarzalną platformę do badań nad szlakami sygnałowymi opartych na postawionych hipotezach.
Przesiewy i opracowywanie testów
- Przygotowuje zwalidowane modele istotne dla przebiegu choroby do dalszego przesiewowego badania związków.
- Umożliwia ilościową ocenę rozszerzenia aorty oraz punktów końcowych histopatologicznych.
- Wspiera standaryzację i powtarzalność testów w różnych badaniach.
- Pozwala na skalowalną ocenę potencjalnych terapeutyków w spójnym modelu.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Umożliwia zestawienie wyników przedklinicznych z patologią AAA u ludzi w celu opracowania translacyjnych biomarkerów.
- Zapewnia ciągłość procesu od etapu odkrycia po przedkliniczną ocenę skuteczności.
- Umożliwia podejmowanie decyzji o dalszym rozwoju projektu w oparciu o analizę ryzyka i solidne dane in vivo.
- Wspiera predykcyjną minimalizację ryzyka w strategiach interwencji naczyniowych.
Integracja potoku i przepływu pracy
Model ten integruje proces od odkrycia do badań przedklinicznych, stanowiąc pomost między wczesnymi badaniami mechanicznymi a badaniami translacyjnymi w zakresie chorób naczyniowych.
- Biologia odkryć: Ułatwia weryfikację hipotez i wyjaśnianie szlaków w patogenezie AAA.
- Przesiew: Zapewnia powtarzalne, ilościowe wyniki do oceny związków.
- Analityka: Dostarcza mierzalne punkty końcowe, takie jak średnica aorty i zmiany histologiczne, do analizy porównawczej.
- Badania translacyjne: Pozwala na zestawienie wyników z modelu przedklinicznego z cechami choroby u ludzi w celu walidacji biomarkerów.
- Ponowne wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Oferuje ustandaryzowaną, wielokrotnego użytku platformę do badań nad biologią naczyniową w ramach różnych programów.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorstwowy
- Wartość naukowa: Zwiększa pewność prognostyczną i zmniejsza niejednoznaczność mechanistyczną w badaniach nad AAA.
- Wartość operacyjna: Poprawia standaryzację, powtarzalność i skalowalność badań naczyniowych in vivo.
- Wartość strategiczna: Usprawnia podejmowanie decyzji go/no-go oraz efektywność kapitałową w portfelach naczyniowych.
- Wpływ na portfolio: Wspiera priorytetyzację skorygowaną o ryzyko oraz rozwój kandydatów na terapeutyki naczyniowe.
Wskazówki dotyczące wdrożenia
- Wymaga wiedzy z zakresu technik mikrochirurgicznych i biologii naczyń.
- Wymaga dostępu do obrazowania ultradźwiękowego oraz infrastruktury do analiz histologicznych.
- Wymaga standaryzacji międzyzespołowej w celu zapewnienia powtarzalności indukcji modelu i gromadzenia danych.
- Można potrzebować adaptacji dla różnych szczepów myszy lub modeli z chorobami współistniejącymi.
- Ograniczenia obejmują cechy specyficzne dla modelu oraz potencjalne różnice w stosunku do progresji AAA u ludzi.
