Wytwarzanie eksperymentalnych tętniaków aorty brzusznej u myszy z użyciem elastazy

Ta procedura chirurgiczna stosowana do wytworzenia tętniaka aorty brzusznej rozpoczyna się od cięcia w linii pośrodkowej brzucha. Treść jamy brzusznej zostaje odsunięta, a wszystkie odgałęzienia aorty zostają podwiązane. Odcinek proksymalny i dystalny aorty zostają zawiązane.

Serce nakłuwa się igłą, a następnie podaje się dużą ilość elastazy przez zwężaną termicznie rurkę polietylenową. Po zakończeniu podawania zamyka się autotomię AOR. Po usunięciu podwiązań aorta napełnia się krwią, a jamę brzuszną zamyka się.

Następnie pozwala się myszy na rekonwalescencję, a tętniak ulegnie całkowitemu rozszerzeniu w ciągu 14 dni. Cześć, jestem Julian Asma z laboratorium Komórek Płodowych w Katedrze Medycyny Sercowo-Naczyniowej na Uniwersytecie Stanforda. Dzisiaj zaprezentuję procedurę indukowania eksperymentalnego tętniaka aorty brzusznej u myszy poprzez wstrzyknięcie elastazy.

Stosujemy tę procedurę w laboratorium w celu badania PE tętnic brzusznych. Zacznijmy zatem. Aby rozpocząć eksperymenty, wybierz odpowiednią mysz, na przykład mysz C 57 black six, i podaj jej izofluran drogą wziewną, aż zwierzę utraci przytomność. Należy pamiętać, że tempo wzrostu tętniaka będzie się różnić w zależności od szczepu myszy.

Wyjąć znieczuloną mysz z komory i umieścić ją na odpowiednio oświetlonym stanowisku preparacyjnym. Ogolić sierść z brzucha od końca kości krzyżowej do nasady kończyn. Do usunięcia pozostałości włosów użyć kremu do depilacji.

Przecieraj odsłoniętą skórę 70% alkoholem do momentu usunięcia całej sierści z ogolonego obszaru. Następnie przemyj skórę Betadyną co najmniej trzy razy, przecierając ją alkoholem pomiędzy kolejnymi aplikacjami. Teraz ułóż mysz na plecach w polu operacyjnym, aby utrzymać ją w stanie nieprzytomności.

Podczas operacji umieść na nosie zwierzęcia rurkę, przez którą podawany jest izofluran z taką samą prędkością przepływu, jaka była stosowana do wprowadzenia w stan nieprzytomności. Elastazę przechowywano w lodzie, a następnie pobrano do strzykawki. Strzykawkę unieruchomiono zaciskiem obok pola operacyjnego i podłączono do niej cewnik.

Ważne jest, aby końcówka cewnika pozostała sterylna, co osiąga się poprzez umieszczenie jej w sterylnej probówce. Przed rozcięciem myszy należy upewnić się, że zastosowana zostanie technika sterylna. Rozpocznij od założenia sterylnych rękawiczek.

Narzędzia chirurgiczne, nożyczki, igłotrzymacze i pęsety muszą zostać zdezynfekowane przed operacją. Należy poświęcić chwilę na sprawdzenie przygotowań i spróbować wyeliminować wszelkie inne potencjalne źródła kontaminacji podczas zabiegu. Jeśli podczas procedury zostanie naruszona technika sterylna, należy ponownie wysterylizować narzędzie w sterylizatorze koralikowym.

Po przygotowaniu wszystkich elementów rozpocząć operację od długiego cięcia pośrodkowego brzucha w obrębie jamy brzusznej. Przesunąć zawartość jamy brzusznej do wolnej przestrzeni brzusznej lub odsunąć ją poza obszar brzucha za pomocą sterylnej gazy, aby odsłonić aortę brzuszną. Następnie za pomocą pincety ostrożnie wyizolować aortę brzuszną od poziomu lewej żyły nerkowej do miejsca jej rozdwojenia.

W przedstawionym przypadku występuje pojedyncza gałąź znajdującaca się powyżej miejsca ligacji aorty, w związku z czym nie wymaga ona podwiązania. Jeśli między miejscami dystalnej i proksymalnej ligacji aorty znajdują się gałęzie aortalne, należy podwiązać gałęzie w odległości jednego centymetra od miejsca rozwidlenia za pomocą szwów 10-0. W miejscach proksymalnym i dystalnym aorty należy umieścić tymczasowe podwiązki z jedwabiu 6.0 w celu zatrzymania przepływu krwi.

Następnie wykonaj autotomię w miejscu rozwidlenia. Rozpocznij od nakłucia rozwidlenia igłą o rozmiarze 30 G. Poprzez miejsce autotomii AOR można wprowadzić termicznie zwężaną rurkę polietylenową i zabezpieczyć ją węzłem.

Za pomocą pęsety ostrożnie i delikatnie wprowadź rurkę do aorty. Należy uważać, aby nie uszkodzić warstwy śródbłonka, stosując ciśnienie 100 milliliters. Aortę przepłukano rtęcią z elastazą z worka z solą fizjologiczną zawieszonego na wysokości 136 centimeters.

Upewnij się, że w probówce nie ma powietrza, w przeciwnym razie ciśnienie nie będzie dokładne. Sól fizjologiczna zawiera 4,5 jednostek na mililitr elastazy trzustkowej typu one pochodzenia świńskiego i powinna wypełnić aortę w ciągu od 5 do 15 minut.

Podczas perfuzji aorta zazwyczaj rozszerza się do około 140% swojej pierwotnej średnicy. Po zakończeniu procesu należy usunąć kaniulę perfuzyjną i zamknąć autotomię aorty szwem o grubości 10 aught, aby uniknąć zwężenia. Po zamknięciu autotomii należy również usunąć ligaturę dystalną.

Jeśli z naprawionej aortotomii występuje niewielkie krwawienie lub nie krwawi ona wcale, usuwa się ligaturę proksymalną. W przypadku wystąpienia krwawienia należy założyć dodatkowe tymczasowe ligatury nasączone 6.0 w częściach proksymalnej i dystalnej aorty oraz dodać jeden szew, aby całkowicie zamknąć aortotomię. Po usunięciu ligatury proksymalnej poszerzona aorta natychmiast wypełni się krwią.

Po zakończeniu procedury na aorcie, wprowadź jelita z powrotem do jamy brzusznej. Jeśli zostały one odsunięte, jelita wsuną się jako jedna całość i nie ma potrzeby martwić się o ich ułożenie. Po umieszczeniu wszystkich organów na ich właściwych miejscach, ranę zewnętrzną można teraz zamknąć w dwóch warstwach, używając sześciu szwów z nylonu aut oraz polipropylenu.

Następnie należy podać myszy znieczulenie miejscowe, na przykład jedną kroplę 0,25% boop ICAN na każdy centymetr nacięcia. Należy również podać jedną dawkę leku przeciwzapalnego Carin w dawce 5 mg/kg poprzez wstrzyknięcie podskórne. Zabieg chirurgiczny jest zakończony, a mysz należy umieścić w ciepłym miejscu, aby mogła odzyskać przytomność.

Wybudzanie zazwyczaj następuje w ciągu 15 minut. Gdy mysz odzyska przytomność, zostaje umieszczona w pojedynczej klatce i monitorowana okresowo aż do pełnego powrotu do sprawności. Po zabiegu aorta zazwyczaj rozszerza się do około 140 do 160% jej pierwotnej średnicy.

Tę początkową dylatację obserwuje się wraz ze stabilizacją do siódmego dnia. Gwałtowna dylatacja wtórna następuje między siódmym a 14. dniem. W 14. dniu tętniak można zaobserwować w aorcie podnerkowej.

Właśnie pokazałem, jak indukować tętniaka aorty brzusznej za pomocą elastazy u myszy. Podczas wykonywania tej procedury ważne jest, aby uniknąć powstania skrzepów krwi wewnątrz aorty. To wszystko.

Dziękujemy za oglądanie i życzymy powodzenia w przeprowadzeniu eksperymentu.