Enucleação Rato Olho para fenotipagem de alta capacidade remota
19 de novembro de 2011
A técnica de dissecção ilustra enucleação do olho do rato para fixação do tecido para realizar fenotipagem em alto rendimento telas.
Este vídeo irá ilustrar o olho do camundongo e a enucleação, ou remoção do globo ocular da órbita. O globo ocular é delimitado pela margem da pálpebra inferior. Aqui está o canto medial ou nasal.
Atrás está o canto temporal ou lateral. Acima está a margem da pálpebra superior. Aqui está um espécime cirúrgico.
A agulha está apontando para a córnea transparente. Podemos ver um pouco da lente projetando-se além da íris. A íris está aqui em marrom, cobrindo a lente.
O marco cirúrgico mais importante é esta linha branca, ou seja, o limbo, onde será feita uma incisão logo atrás dele. A metade posterior do globo ocular situa-se atrás do limbo, e estamos apontando para uma inserção muscular. Pode-se observar o músculo aderido ao globo aqui, e também o tecido conjuntivo que preenche a órbita e inclui a glândula de Arian.
E finalmente, esta é a faixa longa e branca do nervo óptico obtida por dissecação romba. Usando uma pinça curva para curativos, modificada com uma ponta afiada, comece separando as pálpebras. Isso tende a projetar o olho para fora e para longe.
Use cuidadosamente sua pinça para entrar na órbita e por trás do globo ocular, comprimindo-a suavemente por trás do globo sem apertá-lo e puxe para frente. Você deveria ter conseguido segurar o tecido conjuntivo e não o globo ocular. Se você virar o globo ocular para o lado, poderá ver o tecido orbital juntamente com o nervo &oóptico branco.
Esta é uma segunda dissecação apenas para mostrar novamente que você entra no canto, empurra a pinça por trás do globo ocular, agarra o tecido conjuntivo e o puxa para frente sem pressionar o próprio globo ocular. Novamente, é possível observar o tecido conjuntivo na faixa alongada do nervo óptico branco. Para fazer uma ferida perfurante, segure o globo ocular por uma inserção muscular e insira uma agulha atrás da córnea, bem ao lado do ponto onde você está segurando o olho para estabilizá-lo.
Isso permitirá que o fixador entre no olho. Se você fizer a punção longe do local onde está segurando o olho, o globo ocular será muito instável, e será difícil fazer esse corte tão longo sem comprimir o olho ou aplicar pressão indevida. Você também pode segurar todo o tecido conjuntivo logo atrás do próprio globo ocular.
Alguns fixadores não exigem uma ferida perfurante. Em geral, colocamos o olho em um frasco de cintilação de cinco cm³ com pelo menos três cm³ de fixador para garantir que o olho fique submerso. Para animais fixados por perfusão, é necessária uma dissecação precisa.
Utilizamos uma pinça curva calibri e tesoura curva wescott. Segure a pálpebra inferior com a pinça calibri. Insira a tesoura contra o osso orbital e comece a cortar o tecido conjuntivo.
Utilizamos a curva afastando-se do globo ocular e evitamos o corte. Qualquer parte do olho funcionará ao longo de toda a margem da pálpebra inferior, de um canto ao outro. Em determinado ponto, a maior parte do tecido conjuntivo será removida, e você poderá deslizar a tesoura por trás do globo e puxá-lo para fora.
Aqui está outro exemplo novamente, inserindo a tesoura na órbita, mas contra o osso orbital em vez do globo ocular, cortando os tecidos conjuntivos. Isso começará a soltar o globo ocular, que é como uma bola de basquete dentro de um cesto. Use a pinça para retrair as pálpebras para longe e faça cortes suaves e curtos ao redor do globo ocular.
Aqui, agarramos o tecido conjuntivo ou uma inserção muscular com o Collibra e terminamos de cortar o globo ocular do tecido conjuntivo orbitário. Após os globos oculares serem adequadamente fixados, e se precisarem ser transportados, colocamos um filme parafilm ao redor do frasco de armazenamento.
A embalagem deve estar em conformidade com as regulamentações da sua universidade e do governo. Normalmente, colocamos estes em um recipiente com um pouco de algodão para reter qualquer fluido; esse recipiente deve ser fechado muito bem. Esse recipiente de envio é então colocado em um saco de plástico bolha.
Isso é colocado em um recipiente de transporte laboratorial para líquidos, juntamente com qualquer documentação.
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Visão Geral
Este vídeo ilustra a técnica de enucleação do olho de camundongo, essencial para a fixação do tecido em telas de fenotipagem de alto rendimento. O procedimento envolve a remoção do globo ocular de sua órbita, destacando marcos anatômicos para maior clareza.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Biologia
Antecedentes
- A enucleação é uma técnica fundamental em diversos estudos biológicos.
- O entendimento da anatomia ocular auxilia em procedimentos cirúrgicos precisos.
- Este método é essencial para aplicações de triagem de alto rendimento.
- A fixação adequada do tecido é necessária para uma fenotipagem precisa.
Objetivo do Estudo
- Demonstrar a técnica de enucleação para fins educacionais.
- Fornecer um guia visual para pesquisadores que realizam procedimentos semelhantes.
- Aprimorar a compreensão dos marcos anatômicos durante a cirurgia.
Métodos Utilizados
- Demonstração em vídeo do processo de enucleação.
- Identificação das principais características anatômicas do olho de camundongo.
- Orientação passo a passo para realização do procedimento.
- Recursos visuais para apoiar a aprendizagem e a aplicação.
Resultados Principais
- Visualização clara da técnica de enucleação.
- Identificação do canto medial e lateral.
- Demonstração do espécime cirúrgico após a enucleação.
- Compreensão aprimorada do procedimento para telas de alto rendimento.
Conclusões
- O vídeo serve como uma ferramenta educacional eficaz para pesquisadores.
- Compreender o processo de enucleação é essencial para uma fixação tecidual bem-sucedida.
- A técnica adequada pode melhorar os resultados em estudos de fenotipagem.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
A fenotipagem remota de alto rendimento de olhos de camundongos permite a utilização distribuída de recursos genéticos e acelera a descoberta de correlações genótipo-fenótipo em modelos de doenças oftálmicas. Protocolos padronizados de enucleação e transferência de tecidos reduzem barreiras geográficas e operacionais, apoiando pesquisas pré-clínicas escaláveis e multissítio. Essa abordagem melhora o acesso abrangente a linhagens transgênicas raras ou geograficamente dispersas para validação inicial de alvos e triagem fenotípica.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia Farmacêutica
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Facilita a coleta sistemática de tecidos oculares de diversas origens genéticas para estudos baseados em hipóteses.
- Permite a validação funcional de genes candidatos implicados no desenvolvimento e na doença oculares.
- Apóia a confiança preditiva na associação de perturbações genéticas a desfechos fenotípicos.
Triagem e Desenvolvimento de Ensaios
- Fornece amostras de tecido padronizadas e fixadas, adequadas para ensaios moleculares e morfológicos subsequentes.
- Melhora a reprodutibilidade e comparabilidade entre telas de fenotipagem em múltiplos locais.
- Permite o preparo escalonável de amostras para plataformas de triagem de alto rendimento.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Alinha o fenotipagem de camundongos com a descoberta translacional de biomarcadores para doenças oftálmicas humanas.
- Apoia a continuidade do descobrimento genético até a validação pré-clínica dos mecanismos da doença.
- Reduz as barreiras logísticas para o acesso a modelos de camundongos raros ou geograficamente distribuídos.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
Este protocolo de enucleação remota e transferência de tecido integra-se ao continuum inicial de descoberta e pré-clínico, conectando a geração de modelos genéticos com fenotipagem e análise centralizadas.
- Biologia da Descoberta: Permite testes de hipóteses e redução de riscos mecanicistas ao fornecer acesso a modelos genéticos diversos.
- Triagem: Padroniza a preparação de amostras para ensaios fenotípicos quantitativos e reprodutíveis.
- Análises: Apoia a aquisição de dados morfológicos e moleculares para análise comparativa.
- Pesquisa Translacional: Facilita a correlação entre fenótipos de camundongos e biomarcadores de doenças humanas.
- Reutilização Empresarial: Estabelece um protocolo reutilizável para aquisição distribuída de tecidos em redes de pesquisa.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva nas associações genótipo-fenótipo e na validação de alvos.
- Valor Operacional: Otimiza a logística, padroniza procedimentos e permite escalabilidade em múltiplos locais.
- Valor Estratégico: Aprimora a tomada de decisões de prosseguimento ou interrupção ao ampliar o acesso a dados fenotípicos de modelos raros.
- Impacto no Portfólio: Apoia a priorização ajustada ao risco de alvos genéticos e modelos de doenças.
Considerações de Implementação
- Exige proficiência cirúrgica na enucleação ocular de camundongos e no manuseio de tecidos.
- Requer acesso a reagentes de fixação, recipientes de transporte validados e conformidade com as regulamentações de envio.
- Exige padronização entre diferentes locais dos protocolos de coleta e documentação.
- Adaptável a fluxos de trabalho com tecidos não fixados e fixados por perfusão, conforme suportado pelo protocolo.
- Depende das diretrizes institucionais e governamentais para o transporte de amostras biológicas.
