Modelo Experimental de Endocardite resistente à meticilina

O objetivo geral deste procedimento é estabelecer um modelo experimental de endocardite infecciosa em ratos. Isso é realizado primeiramente cultivando aureus e preparando cateteres cirúrgicos para infecção. Em seguida, a área cirúrgica é preparada e o animal é anestesiado.

Uma vez que o animal está anestesiado, um cateter é inserido pela artéria carótida direita em direção ao coração. O passo final é infectar os animais com aureus por injeção na veia caudal. Por fim, os tecidos-alvo são dissecados e preparados para cultura quantitativa.

A principal vantagem desta técnica em relação aos métodos existentes, como um modelo rápido de endocardite, é que o modelo de endocardite vermelha pode ser utilizado com o sistema de imagem in vivo Ivus. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais no campo da patogênese oral, como a virulência e a eficácia de agentes antimicrobianos. Geralmente, indivíduos novos nesta técnica enfrentarão dificuldades porque o procedimento cirúrgico é desafiador.

Primeiro, inocular um alça cheia de cultura de M SSA de um estoque congelado em um ágar de tripcaseína de sangue ovino. Incubar a cultura durante a noite a 37 graus Celsius em uma placa de ágar de soja, após certificar-se de que não há contaminação. Escolher uma colônia da placa e usá-la para inocular cinco mililitros de caldo de triptona e soja em um tubo de 15 mililitros com tampa de rosca.

Incube o inóculo a 37 graus Celsius durante a noite em um incubador com agitação. Ajuste em 200 RPM para preparar os cateteres primeiro. Corte o tubo de polietileno em comprimentos de 10 centímetros e esterilize os cateteres em solução desinfetante cex por 30 minutos.

Em seguida, aqueça uma extremidade de um tubo esterilizado pressionando a ponta com pinças estéreis aquecidas para criar um cateter que passará da artéria carótida direita para o ventrículo esquerdo e causará danos ao endocárdio quando o coração bater. Em seguida, anestesie o rato colocando-o em uma câmara contendo uma mistura de isoflurano e oxigênio na proporção de um para um até que o efeito anestésico ocorra. Confirme a anestesia verificando se os músculos estão relaxados e se os reflexos plantares estão ausentes.

E mantenha um estado anestesiado durante a cirurgia utilizando um cone nasal conectado à mistura gasosa. Limpe a área cirúrgica com Betadine e etanol 70% utilizando técnica estéril durante toda a cirurgia. Posicione a rata em posição dorsal e faça uma incisão verticalmente através da camada de pele do pescoço acima do esterno, utilizando dissecação romba.

Seccione a fáscia para expor a artéria carótida direita. A artéria carótida direita está localizada logo levemente à direita da linha média, acima das clavículas. Retire cuidadosamente a artéria da cavidade do pescoço e posicione dois pedaços de fio de seda com 10 centímetros de comprimento sob a artéria, para ligá-la na extremidade cefálica exposta.

Em seguida, coloque um clipe na artéria para evitar sangramento. Faça um pequeno orifício no topo da artéria usando um introdutor de cateter com pinça. Insira a extremidade não selada do cateter através do orifício na artéria.

Remova o clipe e empurre o cateter em direção ao coração. Até encontrar resistência, o cateter deve ser inserido corretamente, estendendo-se quatro a cinco centímetros dentro da artéria e pulsando com a batida cardíaca do rato. Uma vez posicionado o cateter, amarre uma sutura frouxa ao redor da extremidade distal da artéria e fixe o cateter no lugar.

Com sutura de seda, corte a sobra da sutura e das extremidades do cateter e, em seguida, insira as pontas sob a pele do pescoço. Feche a pele com clipes dermatológicos. Coloque a rata em uma gaiola limpa e mantenha-a em local aquecido até que se recupere da anestesia.

Forneça alimento e água e verifique a rata frequentemente, tanto durante quanto após a recuperação. A infecção pode ser realizada entre um e sete dias após a cirurgia, mas o tempo deve permanecer consistente dentro dos experimentos. Limpe a cauda da rata com etanol 70% e injete 0,5 mililitros da cultura de MRSA na célula desejada.

Conte até a veia caudal. Usando uma agulha de 27 graus e meia polegada, aplique pressão no local da injeção até que qualquer sangramento tenha cessado antes de devolver o rato à sua gaiola. Após sacrificar o rato, limpe o tórax com etanol 70% e, em seguida, faça uma incisão em forma de V no tórax abaixo do esterno.

Corte a cartilagem das costelas em cada lado do esterno. Para expor o coração, puxe suavemente o coração para cima e corte o tecido próximo à aorta, dissecando para cima para soltar o coração. Coloque o coração em uma placa de Petri estéril forrada com gaze de quatro por quatro polegadas e, em seguida, faça um corte na parede interna do ventrículo esquerdo e abra a câmara do lado esquerdo.

Verifique a correta colocação do cateter e, em seguida, remova-o. Examine e remova as vegetações da válvula com tesoura e pinça. Remova também os rins e o baço, e após pesar e homogeneizar os tecidos e as vegetações, faça diluições seriadas em PBS para cultura quantitativa.

É mostrado aqui um cateter corretamente posicionado, conforme indicado pela seta mais à esquerda. Ele se estende através da válvula aórtica e penetra no lado esquerdo da câmara cardíaca, e numerosas vegetações são visíveis ao redor das válvulas aórticas, conforme indicado pelas setas central e da direita. Esta tabela fornece um exemplo da virulência de uma linhagem ssus no modelo de endocardite em rato.

Todos os animais desafiados com inóculo de 10 à quinta e 10 à sexta UFC desenvolveram endocardite com altas densidades de ssus nas vegetações cardíacas, bem como nos rins e no baço. Uma vez dominado, este procedimento cirúrgico pode ser realizado em até 10 minutos, se executado corretamente.

Ao realizar este procedimento, é importante lembrar-se de manter o animal em um estado avaliado durante a cirurgia após este procedimento. Outros métodos, como o ivus, podem ser realizados para responder perguntas adicionais, como o monitoramento em tempo real da eficácia de agentes antimicrobianos e a expressão gênica in vivo após o seu desenvolvimento. Esta técnica abre caminho para pesquisadores na área de step orus e fiction explorarem seu fator de virulência patogênica na infecção endovascular.

Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como estabelecer um modelo experimental de endocardite em ratos. Não se esqueça de que trabalhar com MRA pode ser extremamente perigoso e precauções, como o uso de jaleco e luvas de laboratório, devem ser tomadas ao realizar este procedimento.