Определение сотовый номер при использовании культуры клеток Счетчик скипетр сотовый

Счетчик клеток Scepter представляет собой ручной автоматизированный прибор для подсчета клеток, мониторинга их диаметра и объема, а также оценки жизнеспособности и качества клеточных популяций. Он обладает значительными преимуществами по сравнению с другими методами подсчета, включая повышенную точность, простоту использования и низкую стоимость анализа. При работе с Scepter следуйте инструкциям на графическом дисплее для аспирации клеток в одноразовый сенсор.

Затем клетки подсчитывают, и прибор выдает данные о концентрации и статистике клеток, которые можно загрузить на компьютер для последующего анализа. Здравствуйте, меня зовут Соня. Я научный сотрудник компании Millport, и сегодня я покажу вам, как пользоваться Scepter.

Счетчик клеток. Подсчет клеток является необходимым, но трудоемким этапом культивирования клеток in vitro. Стабильные концентрации клеток обеспечивают воспроизводимость и точность экспериментов. Подсчет клеток важен для мониторинга жизнеспособности и скорости пролиферации клеток, оценки посева иммортализованных или трансформированных клеток для последующих экспериментов, трансфекции или инфицирования, а также для подготовки анализов на основе клеточных культур, когда требуются высокая скорость и точность.

В области подсчета клеток 71% из 400 опрошенных исследователей используют для этой цели гемоцитометр. Несмотря на дешевизну, метод гемоцитометрии является трудоемким и подвержен влиянию субъективного фактора и ошибок оператора, что приводит к неточному подсчету. Источниками ошибок при гемоцитометрии являются неравномерное распределение клеток в образце, а также слишком большое или слишком малое количество клеток в пробе.

Субъективность решений о том, попадает ли конкретная клетка в определенную зону подсчета. Загрязнение гемоцитометра, вариативность действий пользователя и разная скорость заполнения гемоцитометра, призванные облегчить рутину, связанную с ручным подсчетом. 29% исследователей подсчитывают клетки с помощью автоматических приборов для подсчета клеток.

Однако для большинства исследователей стоимость таких крупных настольных приборов становится препятствием для их использования. Счетчик клеток Scepter представляет собой автоматизированное портативное устройство, которое обеспечивает автоматизацию и точность подсчета клеток по принципу Coulter при относительно низкой стоимости в удобном ручном формате. В системе используется принцип Coulter для детектирования частиц на основе импеданса в миниатюрном исполнении с применением комбинации аналогового и цифрового оборудования для обработки сигналов датчиков, хранения данных и графического отображения.

Одноразовый датчик оснащен микроfabricated зоной анализа клеток, которая позволяет проводить дифференциацию по размеру и объему клеток с субмикронным и субпиколитровым разрешением, что дополняется высокоточными каналами для работы с жидкостями и электроникой. Счётчик клеток scepter графически отображает статистику популяции клеток в виде гистограммы. Работа со счётчиком клеток scepter начинается с разведения суспензии одиночных клеток в фосфатно-солевом буферном растворе.

Оптимальная концентрация составляет от 10 000 до 500 000 клеток на миллилитр. Перенесите 100 мкл разведенных клеток в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл. Включите счетчик клеток Scepter, нажав и удерживая переключатель на задней панели прибора, и дождитесь появления инструкций на экране.

По запросу закрепите датчик на конце блока сцептера (scepter unit) так, чтобы панель электродного детектирования была обращена вперед относительно прибора. Датчики сцептера состоят из прецизионно отлитой пробоотборной камеры с электронной зоной детектирования и встроенными электродами для анализа клеток. Эти датчики позволяют дифференцировать размер клеток с субмикронным разрешением, а объем клеток — с субпиколитровым разрешением.

Точное проектирование датчика обеспечивает подсчет равных объемов образцов и точность измерений размера. После установки датчика выполняйте каждый этап процесса подсчета в соответствии с инструкциями на экране следующим образом. Когда на экране появится сообщение «зажмите поршень, чтобы начать», нажмите на поршень; затем на экране появится надпись «погрузите датчик» — погрузите датчик в раствор суспензии клеток и отпустите поршень, чтобы аспирировать суспензию клеток в датчик.

Плунжер служит источником электрического сигнала и втягивает пробу вместе с мертвым объемом в датчик. В отличие от пипетирования, скорость или точность нажатия плунжера не имеют значения. Этот процесс займет несколько секунд после подготовки.

Прибор подаст звуковой сигнал, и на экране появится сообщение о загрузке образца. После загрузки образца в сенсор он будет пропущен через зону детектирования для определения размера и объема клеток. Затем образец пройдет через микроканалы; как только будет отсчитано 50 µL образца, сенсор подаст сигнал прибору о прекращении подсчета.

После завершения подсчета на экране прибора появится надпись «count complete» (подсчет завершен). Пожалуйста, извлеките датчик и утилизируйте его. Следуя подсказке, извлеките и утилизируйте датчик.

Затем прибор отобразит на экране гистограмму размера или диаметра клеток, а также концентрацию клеток на миллилитр. После завершения подсчета и вывода гистограммы на экран прибора установите гейты, нажав переключатель; выберите «auto gating» (автоматический гейтинг) или «use last», чтобы либо автоматически установить гейты на основании профиля гистограммы, либо использовать гейты из предыдущего подсчета. Независимо от выбора, гейты можно перемещать вручную для точной настройки.

Настройте данные, снова нажмите переключатель, чтобы выбрать левую границу гейта, и переместите переключатель, чтобы установить границу в нужное положение. Затем снова нажмите переключатель, чтобы активировать правую границу гейта, и переместите переключатель, чтобы установить правую границу. Нажмите еще раз.

Будут отображены новые значения концентрации клеток, среднего объема и диаметра клеток. Переключатель также может быть перемещен в любую сторону для смены отображения между датой и временем, средним размером клеток и средним объемом клеток; в самом приборе может быть сохранено до 72 гистограмм. Чтобы загрузить данные на персональный компьютер, подключите прибор через USB-порт, после чего данные появятся на экране ПК.

Дважды щелкните по приложению Scepter, чтобы запустить программное обеспечение. Затем нажмите «Connect» (Подключить). Все данные подсчета будут автоматически переданы в программу.

Программное обеспечение scepter отображает гистограмму с подробным распределением популяции культуры по объему или диаметру. Загруженные файлы затем можно экспортировать в Microsoft Excel, где необработанные данные будут представлены в виде интервалов с заданными значениями диаметров или объемов клеток. Для подсчета были подготовлены 19 различных клеточных линий, а теоретические начальные концентрации определяли с помощью счетчика клеток.

Затем эти клеточные суспензии дополнительно разбавляли для получения суспензий с теоретическими концентрациями клеток. Для определения фактических концентраций клеток использовали счетчик клеток Scepter. На данном рисунке представлены пять разведений, измеренных для пяти репрезентативных клеточных линий, а также соответствующая теоретическая концентрация клеток.

Высокая степень линейности, подтвержденная значениями коэффициента детерминации r-squared, свидетельствует о том, что подсчет с помощью scepter является надежным методом для протестированных клеточных линий в широком линейном рабочем диапазоне. Общая относительная точность подсчета на scepter продемонстрирована здесь путем сравнения данных, полученных с помощью scepter, с результатами подсчета на coter. График зависимости логарифма количества клеток, подсчитанных на scepter, от логарифма количества клеток, подсчитанных на coter, показывает, что для всех протестированных клеточных линий результаты подсчета на scepter совпадают с результатами на coter.

Подсчет клеток для 19 клеточных линий проводили с помощью счетчика Z two coulter. Для автоматизированного подсчета на основе визуального анализа использовали счетчик scepter, систему V cell или count test, а также hemo TER; все измерения выполнялись в соответствии с инструкциями производителя с использованием одной и той же исходной суспензии клеток и идентичных разведений. Результаты, представленные на данном рисунке, демонстрируют, что концентрации клеток, измеренные с помощью счетчика scepter, точно соответствуют теоретическим значениям с высокой линейностью.

Для каждого разведения каждой клеточной линии был рассчитан коэффициент вариации (CV) в процентах. Для каждой представленной системы подсчета приведены средние значения CV в процентах по 19 клеточным линиям в зависимости от концентрации клеток и метода подсчета в пределах рабочего диапазона. Счетчик клеток Scepter более точен, чем подсчет с помощью гемоцитометра, что проявляется в меньших значениях стандартного отклонения и меньших средних коэффициентах вариации.

Подсчет с помощью Scepter происходит в 10 раз быстрее, чем при гемоцитометрии, и также быстрее, чем на других автоматических счетчиках. Здесь клетки SF9, MCF7 и HC293 были подсчитаны с использованием методов, описанных в данном видео. Было зафиксировано среднее время, затраченное на измерение концентрации клеток.

Обратите внимание, что гемоцитометрия проводилась только один раз для каждого образца. Прибор Scepter выполняет измерения на основе размера клеток. Таким образом, любые изменения в морфологии клеток могут быть зафиксированы на гистограмме.

Здоровые культуры демонстрируют выраженное колоколообразное распределение Гаусса, в то время как нежизнеспособные клетки вызывают сдвиг гистограммы влево. Аналогично, при смешивании популяции из 50% мертвых клеток с 50% живых клеток также наблюдались сдвиги гистограммы. Я только что продемонстрировал вам, как использовать новый счетчик клеток scepter от Millipore, который коренным образом меняет подход исследователей к подсчету клеток.