Быстрое определение тепловых Ноцицептивная порога в диабетических крыс

Общая цель данной процедуры заключается в определении порога термической ноцицепции у контрольных крыс и крыс с сахарным диабетом. На первом этапе животное помещают на нагревательную платформу с постепенным повышением температуры и прибор для измерения анальгезии. Затем, по мере нагрева поверхности, температура платформы постепенно увеличивается.

Животное наблюдают на предмет отсутствия выраженных реакций избегания. При появлении такой реакции нагрев прекращают и фиксируют температуру пластины в этот момент. В итоге можно получить результаты, демонстрирующие изменения порога термической ноцицепции у животных, получавших анальгетики или страдающих болезненной диабетической нейропатией.

Основным преимуществом данной методики по сравнению с существующими методами, такими как использование нагревательной плитки, которая обычно устанавливается на температуру выше порога чувствительности, является то, что наш метод предусматривает постепенное повышение температуры плитки, что позволяет точно определить порог термической ноцицепции. Порог термической ноцицепции или TNT определяется с помощью измерителя инкрементной анальгезии на горячей плитке (IH pam). Компоненты этой системы включают смотровую камеру из плексигласа, алюминиевую пластину с регулируемой температурой, клавиатуру для программирования и ножной переключатель для дистанционного управления устройством.

Данные собираются с помощью специализированного программного обеспечения на подключенном компьютере. Кроме того, можно распечатать копии на бумажном носителе, используя последовательный порт, расположенный на устройстве. Поместите зеркало позади камеры из плексигласа, чтобы улучшить видимость поведения животного.

Затем установите желаемую скорость нагрева, а также начальную температуру ожидания и конечную температуру отключения. Нажмите ножной переключатель, чтобы запустить или остановить систему. Убедитесь, что начальная температура ожидания и конечная температура отключения, а также время достижения конечной температуры зафиксированы.

При желании экспериментатор может протестировать систему на себе, убрав руку с металлической пластины в момент возникновения болевого ощущения. Воздействие не должно вызывать повреждений кожи или приводить к последующему дискомфорту.

Начните период акклиматизации накануне вечером, поместив клетки на стол, где будет проводиться тестирование. За два часа до начала испытаний включите установку IH, чтобы животные привыкли к фоновому шуму прибора.

На данном этапе систему можно настроить и протестировать, как было показано ранее. После того как животные адаптируются к окружающей среде, осторожно поместите крысу в плексигласовую камеру на теплую поверхность. Дайте животному исследовать камеру в течение нескольких минут.

Начните тестирование. Как только животное будет выглядеть готовым к началу испытания, нажмите ножной переключатель, чтобы начать нагрев платформы. Наблюдайте за поведением животного по мере нагрева платформы.

Как правило, лицам, впервые использующим данный метод, может быть трудно, поскольку идентификация выраженного агрессивного поведения не всегда очевидна и требует практики. Отсутствие агрессивного поведения характеризуется отсутствием вылизывания, встряхивания или поднятия любой из задних пор. Полезно отметить, что первым наблюдаемым действием может быть вылизывание всех четырех пор с последующей реакцией задних пор.

При наблюдении наиболее выраженного болевого поведения нажмите ножной переключатель, чтобы завершить испытание, и верните животное в домашнюю клетку. Температура, вызывающая такое поведение, считается термическим ноцицептивным порогом или TNT контрольного животного. Установку очищают, после чего тест повторяют для следующего животного.

Ниже представлены пороги термической ноцицепции у здоровых молодых взрослых крыс и мышей. Приведенные данные показывают, что TNT у крыс не изменялся при тестировании в течение четырехдневного периода. Аналогично, TNT у мышей оставался стабильным для особей разного возраста.

В данном примере проводились повторные измерения ТН ТП у молодых взрослых крыс с STZ-индуцированным сахарным диабетом. Начиная с двух недель после развития диабета, наблюдалось устойчивое снижение порогов термической ноцицепции. Для тестирования острых антиноцицептивных свойств анальгетического соединения использовался IH pam.

А, соединение вызвало умеренный анальгетический эффект у контрольных животных по сравнению с теми, которые получали плацебо. Однако анальгезия была более выраженной у животных с диабетом, получавших соединение, по сравнению с контрольной группой, получавшей плацебо. При выполнении данной процедуры очень важно помнить о необходимости непрерывного мониторинга поведения животного, особенно реакций, проявляющихся в области хвоста животного.