Анализ молекулярной пружинной константы с помощью зондовой спектроскопии биомембранных сил

В этом видео описываются пошаговые процедуры использования биомембранного силового зонда или BFP для измерения константы молекулярной пружины. В силовом зонде BFP недавно появился на поверхности нативной клетки или в анализе SITU Dynamic Force Spectroscopy. Основной целью этого метода является измерение генетики связывания одной молекулы.

Эта процедура анализа данных является простым, но мощным сообщением и предоставляет механическую информацию, в частности динамическую силу и воспаление молекул, экспрессивиющих клеточную мембрану. Во время цикла эксперимента BFP зондовый микробиом, соединяющийся с эритроцитами и завещанием, клеткой-мишенью и молекулярной связью рецептора лиганда между зондом и мишенью, может рассматриваться как последовательно связанная система мозга. Исходя из закона Гука, обратная полная константа пружины последовательной связанной пружинной системы равна сумме константы обратной пружины каждого отдельного компонента, как показывает уравнение.

Пружинная постоянная эритроцитов рассчитывается на основе событий движения, которое зависит от радиальной микропипетки зонда в отверстии. Эритроцит, круговая область контакта между эритроцитом и завещанием и аспирирующим давлением микропипетки. Дорожные данные BFP получают самодельный виртуальный прибор левого вида, который управляет движением целевой микропипетки с помощью переводчика PAs.

Полный сенсорный цикл PFP состоит из пяти этапов. Подход.Импейз.Контакт. Втягивай и диссоциировать. В начале, делается ли ударение, положение Robusto APICS обозначается как X равно 0 в черном дештине.

Затем цель приводится в движение куском или транслятором, чтобы втихнуть и сжать робусто, чтобы вызвать отрицательное движение завещания. Вы отмечаете его как X меньше нуля в красной линии тире. На стадии втягивления верхушка красного шины перемещается из положения X меньше нуля обратно в положение X, равное нулевому положению, называемому фазой сжатия.

Если между комплексом молекул рецепторов лиганда образуется связь, эритроцит будет еще больше отличаться от другого положительного направления. Этот X больше нулевого периода называется фазой растязания стадии втягивки. Стадия втягивания является наиболее важной частью для определения пружинной константы молекулы связи.

Собирайте данные о силе и времени с помощью платформы сбора данных BSP. Каждый эксперимент обычно записывает от 50 до 200 сенсорных циклов, откройте программное обеспечение для анализа данных PFP. Нажмите на желтый значок папки и выберите соответствующий файл данных строки, дважды щелкнув по ним.

Мы в программе. Затем нажмите на кнопки со стрелками вверх и вниз, чтобы переключаться между событиями. Использование критериев исключения выбросов для отсеировки недопустимых событий.

Выберите экспортируемый тип данных, который принудительно форматируется по времени, и выберите соответствующий диапазон времени состояния. Нажмите на кнопку экспортировать данные графика. Экспортированные данные сохраняются в виде текстового файла по умолчанию.

Этот текстовый файл содержит два столбца данных. Это первый столбец, представляющий временных пап, и второй столбец, представляющий соответствующую силу в каждой точке времени. Постройте кривую силы и времени с помощью программного обеспечения электронных таблиц для получения кривой принудительного и смещения.

Умножьте временное значение каждой точки данных на движение PSO Willow Steel. Обнульте первую точку данных, вычитая наименьшее значение смещения из каждой точки данных. Это горизонтальное преобразование не влияет на последующее вычисление пружинной константы.

В кривой «сила против смещения» две различные группы актора были разными, если можно было идентифицировать новый наклон силы. Каждый из них представляет фазу сжатия и фазу стиля 10. Подгонка строки регрессии к каждой группе данных.

Линия с более крутым уклоном представляет собой общую константу пружины на фазе компрессора, обозначенную как K1. И линия, которая была самой маленькой вершиной, представляет линию на этой фазе стиля 10, обозначенную как K2.As я уже упоминал, общая константа пружины является обратной от сына последовательной пружинной константы каждого компонента. Во время сжимающей фазы вхожения в клеточный режим молекулярная связь не растягивается, поэтому константа пружины молекулярной связи не принимается во внимание. Пружинная константа целевой ячейки описывается как уравнение, отображаемое там, где K1 представляет собой общую константу пружины во время фазы компрессора.

В фазе 10 стиля ритма для продажи, общая константа пружины является солнцем уверсной пружинной константы молекулярной связи красных кровяных клеток. А в клетке-мишени используйте отображаемое уравнение для вычисления константы пружины связи молекулера, которая K2 представляет собой общую константу пружины. Вы читаете фазу 10 остановок.

В режиме beat to beat, поскольку деформация B незначительна, термин, который описывает обратную константу пружины целевой клетки, приближается к нулю, поэтому полная константа пружины в фазе компрессора эквивалентна константе пружины эритроцитов, показанной в виде следующего уравнения. В фазе растяживания пружинная константа молекулярной связи может быть рассчитана путем вычитания эффекта эритроцита, показанного в следующем уравнении. Соберите пружинные константы интегрировательного положения бокового ветра B, комплекса Бета 3, ячейки K562 и комплекса интегрировательного отношения B Бета три, рассчитайте среднее и стандартное отклонение производных констант пружины по шкале Ньютона или нанометра.

Теперь вы должны лучше понять, каковы требования к измерению и пружинной константе из данных VFD. Следует заметить различия между режимом beat to cell и режимом beat to beat. Различные молекулы, представляющие службу, будут иметь разную защиту от меры постоянной пружины.

В заключение, эта пошаговая процедура описывает, как выполнить анализ молекулярной пружинной константы с использованием BFP. Мы предполагаем, что в будущем будут предприняты усилия по автоматизации и интеграции сбора данных BFP и анализа DFS в одну компьютерную программу отдыха. Сделать весь анализ данных операции BFP более удобным для пользователя и высоким во всем.