Etiketli Protein-Fosfolipid Vezikül Etkileşimlerini İncelemek için Kantitatif Akış Sitometrisi

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biological Techniques

0 görüntüleme • 2:43 dk • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücre zarı üzerindeki protein-fosfolipid etkileşimleri, çeşitli hücresel süreçlerin düzenlenmesi için çok önemlidir.

Kantitatif akış sitometrisi kullanarak in vitro olarak hedef protein-fosfolipid etkileşimlerini tespit etmek için, tamponda istenen konsantrasyonda hücre zarı taklidi - mikron boyutlu, lipofilik boya etiketli fosfolipid vezikülleri içeren bir tüp alın.

Çözeltiye uygun bir floresan etiketli farklı hedef protein konsantrasyonu ekleyin.

Süspansiyonu akış sitometresine enjekte edin. Protein-fosfolipid etkileşimleri için yeterli zaman tanımak için akışkan sistem parametrelerini düşük bir akış hızına ayarlayın.

Floresan etiketli proteinler ve fosfolipid veziküller akış kanalında etkileşime girdikçe, veziküllere bağlı proteinlerin konsantrasyonu artar.

Bu kompleksler, uygun dalga boylarını sağlayan belirli floresan kanallarından lazer ışınlarından geçerken uyarılırlar. Kompleks içindeki bu uyarılmış proteinler ve fosfolipid veziküller, uygun dedektörler tarafından yakalanan temel duruma gevşeme üzerine ilgili floresan sinyallerini yayar.

Proteinlerin yüksek bir ortalama floresan yoğunluğunun saptanması, proteinin fosfolipid veziküllere bağlanmasının bir göstergesidir.

Tyrode tamponundaki fosfolipid vezikülleri 1 mikromolar konsantrasyona ve toplam 250 mikrolitre hacme seyrelterek kinetik bağlanma deneylerine başlayın. Daha sonra, toplam 500 mikrolitre hacim elde etmek için floresan etiketli pıhtılaşma faktörü X veya fX-fd'yi 500 nanomolar konsantrasyonda fosfolipid veziküllerle 1: 1 oranında karıştırın.

500 mikrolitre karışık süspansiyonu, 488 nanometre uyarma dalga boyuna sahip bir akış hızında ve FL2 kanalı için 42 genişliğinde 585 nanometre emisyon filtresinde akış sitometresine hemen enjekte edin.

Daha sonra, 633 nanometrede uyarma ile FL4 kanalındaki ortalama floresan ve 20 genişliğinde 660 nanometrede emisyon filtresini ölçün. Bağlanma doygunluğu elde edildiğinde, numuneyi Tyrode'un tamponu ile 20 kat hızla seyreltin ve bir taban çizgisi floresan veya bir platoya ulaşılana kadar ayrışmayı izleyin.

11:22

Üç renkli tek molekül FRET Protein etkileşimleri korelasyon çalışma için kullanma

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:10

Deterjan-Alerjik membran proteinlerinin Ultrafast sulandırma tamamlayıcı-Proteoliposomes ücret Fusogenic kullanarak Lipid Bilayers içine.

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:12

İnsan monosit alt kümeleri tam kan tarafından karakterizasyonu Akış Sitometresi Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:33

Manyetik Aktif Hücre Ayırma (LIMACS) kullanarak Lipid veziküllü aracılı Afinite Kromatografisi: Protein-lipit Etkileşim Analiz Roman Yöntemi

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:23

Protein-Fosfoinositid Etkileşimlerini Tespit Etmek için Desteklenen Lipid Çift Katmanları Üzerinde pH Modülasyon Testi

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:11

Bimoleküler Floresan tamamlama akışı Sitometrik Analizi: Protein-protein etkileşim Eğitim Bir Yüksek Verimli Kantitatif Yöntemi

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:39

Akım Sitometri Kullanımı Ekstrasellüler Veziküller Analizi Teknikleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:52

Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi-birleştiğinde Akış Parıldama tarafından Radyoetiketleme ve Fosfoinosititler Hücresel Düzeylerinin Quantification

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:58

PIP-on-a-chip: Protein-fosfoinositid Etkileşimlerinin Etiketsiz Bir Çalışması

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:38

Fosfo akış sitometresi ile floresan hücre barkodlama tek hücre Analizi ve biyomarker keşif sinyal

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026