Drosophila Larva Sinir Hücrelerinde Mikroelektrot Aracılı FM Boya Yükleme ve Boşaltma

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 görüntüleme • 2:43 dk • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Drosophila larvaları ile başlayın, açıkta kalan kas ve sinir lifleri, floresan membran boyası veya FM boyası vezikülleri içeren bir çözeltiye batırılır.

FM boyası, hücre zarındaki lipitlere bağlanarak üzerinde floresan bir kaplama oluşturur.

Bir mikromanipülatör ünitesi kullanarak, emme mikroelektrot ucunu mikroskop altında konumlandırın.

Sinir liflerine ve mikroelektroda odaklanın.

Sinir lifinin bir halkasını mikroelektroda emmek için negatif basınç kullanın.

Sinir lifini uyarmak için akım darbeleri uygulayın.

Bu, sinaptik vezikül endositozunu başlatmak için bir motor nöronun bir kas lifine bağlandığı nöromüsküler kavşağı tetikler.

Bu işlem sırasında hücre, nörotransmisyonun presinaptik aşamalarını görselleştirmek için ideal olan lekeli endositik veziküller oluşturmak için FM boya kaplı zarı yutar.

FM boyasını yıkayın ve harici solüsyonu değiştirin.

FM boya lekeli vezikülleri hücreden boşaltmak için akım darbeleri uygulayın.

Elektriksel stimülasyon için, gerekli konik ve uç boyutunu elde etmek için mikroelektrot çektirmesini kullanarak bir emme pipeti hazırlayın. Daha sonra, tek bir motor sinirini emerken sıkı bir uyum sağlamak için mikroelektrot ucunu bir mikro dövme ile ateşle parlatın.

Emme pipetini, uzun, esnek bir plastik tüpe ve bir şırıngaya bağlı bir mikromanipülatör üzerindeki elektrot tutucusuna kaydırın. Daha sonra, FM boya ile preparasyonu mikroskop aşamasına koyun ve larva ve emme pipeti odaklanana kadar sahneyi kaldırın.

Daha sonra, şırınga tarafından üretilen negatif hava basıncı ile seçilen yarım segmentini emme elektroduna innerve ederek bir kesme motor siniri halkasını emdirin. Daha sonra, SV endositozunu ve FM1-43 boya alımını sağlamak için seçilen parametreleri kullanarak motor siniri uyarın.

Prosedürün bu noktasındaki en kritik adım, tek bir motor aksonunu emme elektroduna sıkı bir şekilde emmektir. Bu biraz deneme yanılma gerektirebilir. Yeterli bir emme elektrodu bulunduğunda, tutarlı bir stimülasyon gücü sağlamak için karşılaştırılan tüm koşullar için aynı olanı kullanın.

FM boya boşaltma için, aynı motor siniri aynı elektroda emdirin ve ardından SV ekzositozunu ve FM1-43 boya salınımını aktive etmek için motor siniri uyarın.

08:53

Serebellar Granül Nöron Kültüründe Floresan Diasetat-Propidyum İyodür Çift Boyama Kullanarak Nöronal Canlılığın Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:44

Filamentöz Mantarların Canlı Hücre Görüntülemesi İçin Membran ve Hücre Duvarı Seçici Floresan Boyaların Uygulanması

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:31

pH'a duyarlı Floresan Lipid Analog ND6 ile Membran Lipid Devir Hızının Ölçülmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

15:16

Kalsiyum Göstergeleri ile yükleme Drosophila Sinir Terminalleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:46

Drosophila Larva NMJ Synaptic Potansiyeller kayıt için Elektrofizyolojik Yöntemler

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:31

Elektrofizyolojik Kayıt Drosophila Embriyo

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:42

Drosophila Larvalarında Sinaptik Vezikül Geri Dönüşümü ve Floresan Boya Alımının Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:46

Canlı Görüntüleme ve Yaralanma Yanıtları Çalışması için Mikroakiskan Chips kullanma Drosophila Larva

İlgili videolar

0 Görüntüler

17:05

Kurbağa Sinir Uçlarına Sinir Kütüğü Vasıtasıyla Kalsiyum Boyası Yükleme: Kurbağa Nöromüsküler Kavşağında Kalsiyum Geçici Kayıt

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:45

Vivo Tek molekül Drosophila Presynaptic Motor sinir Terminal izleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026