Yanal-flow teknolojisi kullanılarak Hematolojik Malignite Hastalarda invaziv pulmoner aspergillozis Algılama

Bu prosedürün genel amacı, insan serumunda ve BAL sıvılarında aspergillus tanı antijeninin hızlı tespiti için bir lateral akış cihazının kullanımını göstermektir. Bu işlem, öncelikle serum veya BAL örneğinin lateral akış cihazının salım portuna uygulanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım ise çözeltinin membran boyunca ilerlemesine izin vermektir.

Bir sonraki adım, iç kontrol çizgisini inceleyerek testin geçerli olup olmadığını belirlemektir. Son adım ise test çizgisini inceleyerek test sonucunu yorumlamaktır. Nihayetinde, lateral akış cihazı, serum veya BAL sıvılarında aspergillus diyagnostik antijeninin varlığını saptamak için kullanılır.

Aspergillus LFD, invaziv pulmoner aspergillozis tanısında yardımcı bir test olarak kullanılabilir. Bu tekniğin aspergillus, galakto, Manan enzim immünosayımı, panf, fundal, beta glukan testi ve aspergillus PCR testi gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, minimum laboratuvar imkanları ve eğitim gerektiren hızlı bir hasta başı tanı testi olmasıdır. LFD, aspergillus türlerinin saptanması için geliştirilmiş olsa da, lateral akış teknolojisi cetosporium, fusarium ve riser türleri gibi diğer enfeksiyöz patojenlerin saptanması için de uygulanabilir.

Bu organizmalara özgü monoklonal antikorların dahil edilmesiyle, bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik önem taşımaktadır. LFD sonuçlarının yorumlanması, analiz formatına aşinalık gerektirdiğinden; tedavi edilmemiş kan örneklerinden serum toplamak için kanın 4 °C'de pıhtılaşmasına izin verilmelidir; serum ve bronkoalveoler lavaj veya BAL sıvıları, kullanım öncesinde -20 °C'de alikotlar halinde saklanmalıdır. Alikotlar şeklinde saklama, tekrarlanan testler sırasında örneklerin sürekli dondurma-çözme işlemine maruz kalmasıyla hedef antijenin bozunma potansiyelini sınırlar. Serum ve BAL örneklerini teste hazırlamak için örnekleri oda sıcaklığında çözün ve ardından buz üzerinde tutun; vorteksleyerek iyice karıştırın ve ardından 14.000 RPM'de bir dakika boyunca santrifüjleyin. İnsan örneklerinin rutin testi için serumu doku kültürü ortamı ile bire bir oranında seyreltin; alternatif olarak, hedef antijeni serum immün komplekslerinden ayırmak için serumu %4 EDTA içeren PBS ile bire iki oranında seyreltin, kaynayan su banyosunda üç dakika ısıtın ve 14.000 RPM'de beş dakika boyunca santrifüjleyin.

İnsan BAL sıvıları ön işlem gerektirmez. Vortexlenmiş ve santrifüjle çözülmüş bir BAL örneği, lateral akış cihazına doğrudan uygulanabilen saf bir örnektir. Test için, lateral akış cihazları veya LFD'ler, 12 ay boyunca stabil kaldıkları oda sıcaklığında veya 23 °C'de saklanır.

Analize başlamak için cihazları poşetlerinden çıkarın ve düz bir yüzeye yerleştirin. Steril bir pipet ucu kullanarak, 100 microliters ön işlemden geçirilmiş serumu birkaç saniye içinde cihazın salım portuna uygulayın. Sıvı, gözlem penceresindeki nitroselüloz membran boyunca kılcal hareketle ilerlemelidir.

Aynı şekilde, cihazın salım portuna 100 µL saf BAL örneği uygulayın. Analizin oda sıcaklığında 15 dakika boyunca çalışmasına izin verin; bu sürenin sonunda test sonuçları kaydedilmelidir. Sonuçlar kaydedilmeden önce test 15 dakikadan daha uzun süre bekletilmemelidir.

Bu durum sonuçların yorumlanmasında yanlılığa neden olabileceğinden, inkübasyon süresini uzatmak zayıf bir reaksiyonu güçlendirmeyecektir. LFD, plastik gövde üzerinde C harfi ile belirtilen bir iç kontrol hattı ve T harfi ile belirtilen bir test hattından oluşur. Kontrol hattı, serum veya BAL örneğinde aspergillus antijeni olup olmadığına bakılmaksızın her zaman görülmelidir. Bu, serum veya BAL örneğinde aspergillus antijeni mevcutsa analizinin doğru şekilde gerçekleştiğini gösterir.

Test çizgisi de numune uygulamasından sonraki 15 dakika içinde görünecektir. Test ve Lyme reaksiyonlarının yoğunlukları, serum ve VAL numunelerindeki hedef antijen konsantrasyonları ile orantılıdır. Bu prosedürün en zorlayıcı yönü, test sonuçlarının yorumlanmasıdır.

LFD sonuçları 15. dakikada okunmalı ve test sonucu burada gösterilen temsili örnekle karşılaştırılmalıdır. Bu şekilde, BAL ve serum örnekleri ile elde edilen zayıf pozitif, orta derecede pozitif ve güçlü pozitif LFD sonuçlarının temsili örnekleri gösterilmiştir. Serum örneğindeki yoğunluktan bağımsız olarak herhangi bir pozitif test çizgisi, kan dolaşımındaki aspergillus antijeninin varlığı nedeniyle invaziv pary aspergillozis veya IPA hastalığına işaret eder. Yoğunluktan bağımsız olarak pozitif BAL reaksiyonları, sporların çimlendiğini ve akciğerlerde potansiyel olarak patojenik hiflerin geliştiğini gösterir.

Aspergillus antijeninin yokluğunda, test çizgisi oluşmaz ve sonuç negatif olarak kaydedilir. Bu tablo, akut miyeloid lösemi veya Avrupa Kanser Araştırma ve Tedavi Organizasyonu ile Ulusal Alerji ve Bulaşıcı Hastalıklar Enstitüsü Çalışma Grubu'nun tanı kriterlerine göre tanı konmuş ML hastalarından alınan BAL sıvıları kullanılarak gerçekleştirilen LFD testlerinin sonuçlarını göstermektedir. Bu tabloya, her bir hasta için karşılık gelen klinik ve psikolojik verilerin yanı sıra ASPERIA spesifik PCR testi sonuçları da dahil edilmiştir.

2002 E-O-R-T-C-M-S-G kılavuzları uyarınca, 12, 13 ve 16 numaralı hastalar; konak faktörleri ve klinik kriterler veya GM pozitifliği temelinde olası IPA tanısı almışlardır. Revize edilmiş 2008 E-O-R-T-C-M-S-G kılavuzlarına göre, yalnızca konak faktörleri ve GM pozitifliği veya yalnızca konak faktörleri ve klinik kriterler, sırasıyla klinik verilerden ve mikolojiden gelen destekleyici kanıtlar eşlik etmediği sürece olası invaziv fungal enfeksiyonu göstermemektedir. Altı numaralı hastaya, konak faktörleri, majör ve minör klinik özellikler ile GM pozitifliği nedeniyle hem 2002 hem de 2008 kılavuzları altında muhtemel IPA tanısı konulmuştur.

Son olarak, LFD analizinin veya PCR analizinin şu an için E-O-R-T-C-M-S-G kılavuzlarında yer almamasına rağmen, 6. ve 12. hastaların BAL örneklerinde, bu iki analiz ile ticari galaktomanan testi arasında, aspergillus antijeninin ve nükleik asidinin varlığını gösteren güçlü bir uyum olduğu kaydedilmelidir. Bu prosedürün ardından, invaziv fungal hastalığı doğrulamak için Pella Glaktomannan enzim immün analizi, panf, fungal beta-glukan testi veya aspergillus PCR testleri gibi diğer yöntemler paralel olarak uygulanabilir. İnsan kan serumu ve BAL sıvılarıyla çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve cihaz operatörlerinin hepatit B ve tüberküloz gibi hastalıklara karşı her zaman aşılanmış olması gerektiğini unutmayın.