Geç Embriyonik ve Yenidoğan Farelerde Ölçüm Sol Ventrikül Basınç

Bu prosedürün genel amacı, geç embriyonik ve neonatal farelerde sol ventrikül veya LV basıncını ölçmektir. İlk olarak, ekipman hazırlanır. Bir basınç dönüştürücüye bağlı olan iğne, bir ultrason probu ile hizalanmalıdır.

Ardından bir fare hazırlanır ve sol ventrikülünün (LV) ultrasonla görüntüsü alınır. Sonrasında iğne, LV lümenine ilerletilir ve pulsatil basınç ölçümleri kaydedilir. Sonuç olarak, bu ultrason kılavuzlu sıvı dolgulu kateterizasyon yöntemi kullanılarak geç embriyonik ve erken neonatal farelerdeki sistolik basınçlar gösterilmektedir.

Bu tekniğin servo, basınç ölçümü yapılmayan veya katı hal kateterler gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, geç embriyonik ve neonatal farelerde basıncın sağlam ve tekrarlanabilir bir şekilde ölçülebilmesidir. Genellikle, bu tekniği ilk kez uygulayan kişiler, embriyonun dönmesi nedeniyle embriyonik kese içindeki yönelimini korumakta zorlanacaklardır. Ultrason probu uygulanırken, incelenecek farenin aşamasına bağlı olarak, uygun bir prob seçin ve içi distile su ile doldurun.

Probu, ultrason sisteminin ayarlanabilir standına yerleştirin. Standı, platforma monte edilmiş farenin LV uzun eksen görüntüsünü sağlayacak ve LV apeksi enjeksiyon koluna doğru bakacak şekilde ayarlayın. Basınç sistemi; sıvı dolu bir basınç transduseri, köprü amplifikatörü, veri toplama sistemi ve lab chart'tan oluşmaktadır.

Bir yazılım paketi ve tüpleri yıkamak için %10 heparinli serum fizyolojik ile doldurulmuş 20 mililitrelik bir şırınga kullanılır. Tüplerde veya transduser üzerinde hava kabarcığı kalmadığından emin olun. Transduserle bağlantı; üç yollu musluklar, luer kilitler ve hortum rakorları aracılığıyla sağlanır.

Basınç dönüştürücü sistemini bir manometre ile kalibre edin, iğne tüpünü ve kılıfı enjeksiyon koluna monte edin. Manometreyi, tüpü enjeksiyon koluna sabitleyecek bir kılıfla değiştirin. Kılıf, basitçe modifiye edilmiş üç mililitrelik bir şırınga gövdesidir.

Basınç dönüştürücüsünü bir halka ile sabitleyin. Tıkanmaları önlemek için görüntüleme platformunun yaklaşık yüksekliğinde durun. İğne tüpüne takılabilecek en büyük boyutlu iğneyi takın ve birkaç damla gelene kadar heparinli salin enjekte edin.

İğneyi tekrar çıkarın. Tüplerde veya transducer üzerinde hava kabarcığı kalmadığından emin olun. Şimdi, görüntüleme platformunun üzerine bir miktar ultrason jeli sürün.

İğnenin eğimli ucunun yukarı bakacak şekilde üç mililitrelik şırınga gövdesinden çevirin. Ardından, ayarlanabilir standı kullanarak, iğnenin doğrudan jelin içine ilerleyebileceği şekilde probu dikkatlice hizalayın. Görüntüleme probunun merkezinin altında olan iğne, prob kapağını delmeyecek kadar aşağıda, ancak probun odak derinliği içinde olacak kadar yakın olmalıdır.

Gerektiğinde, iğne, tüm hareketi boyunca doğru düzlemde kalacak şekilde elle bükülebilir. Hizalamayı koruyarak iğneyi geri çekin ve görüntüleme platformuna bir fare yerleştirmek için görüntüleme probunu kaldırın. Fareyi anestezi altına almadan önce iğneyi yeniden yerleştirin.

Zamanlanmış gebe bir anne veya neonatal fare, %1,5 izofluranın sürekli inhalasyonu ile anesteziye alınır; erken dönem neonatal farelerin küçük başlarına uyum sağlaması için standart bir burun konisine tüp yerleştirilebilir. Neonatal fareler için, sol ventrikül (LV) apeksi enjeksiyon koluna bakacak şekilde, fareyi ultrason sisteminin görüntüleme platformuna dorsal dekubitus pozisyonunda sabitleyin. Neonatal farelerin vücut sıcaklığını harici bir ısı lambası ile koruyun.

Gebe fareler daha fazla hazırlık gerektirir. Bağlı olan ECG dedektörü ile etkileşimi sağlamak için ekstremitelere ultrason jeli uygulayın ve kalp atış hızını izleyin. Geri bildirim almak için rektal termometreyi yerleştirin.

Vücut ısısının kontrolü. Karın bölgesindeki tüyler epilasyon kremi ile temizlenir ve suyla durulanır. Karın bölgesi, diseksiyon makası ve eğri pens kullanılarak açılır.

Bir uterus kornunu dışarı çıkarın ve sıcak salin ile nemlendirilmiş bir gazlı bez ped üzerine yerleştirin. Bu prosedür boyunca, tüm embriyoları ve annelerinin abdomenini nemli tutun. Periyodik olarak sıcak salin ekleyerek, LV'nin parasternal uzun eksen görüntüsünü elde etmek için bir embriyoyu dikkatlice uygun konuma getirin. Ultrason probunu kullanırken, embriyonun yönelimini korumaya yardımcı olmak için bir rulo gazlı bez kullanılabilir.

Diğer uterus kornuna geçmeden önce, bir uterus kornundaki tüm embriyolarda basınç ölçümü işlemini gerçekleştirin. Önce, embriyonik veya neonatal fare üzerine önceden ısıtılmış Degas ultrason jeli sürerek başlayın. Optimal parasternal LV uzun eksen görünümü elde etmek için görüntüleme probunu indirin ve görüntüleme platformunun açısını ayarlayın.

İğne hizalaması bozulacağı için probun açısını ayarlamayın. Ultrason ekranında LV görüntüsünü izlerken, iğneyi probun tabanına yaklaşana kadar yavaşça ilerletin. Hizalama kaymalarını düzeltmek için gerekirse iğne ve prob konumunu ayarlayın.

Yenidoğan fareden alınan görüntü, embriyo ile elde edilmesi zor olan lv için ideal bir yönelim göstermektedir. Basınç verilerini kaydetmeye başlayın. İğneyi nazikçe salin ile yıkayın ve 20 mililitrelik şırıngaya giden yolu ve atmosfere açılan stopcock'u kapatın.

Basıncı gözlemleyin. İğneye minimum basınç uygulandığından emin olmak için programdaki ayarı artırın. İğne, ultrason görüntüsünün kenarında görülene kadar, ancak henüz lv içine girmemiş olacak şekilde yavaşça ilerletin.

Gerekirse, iğnenin sol ventriküle (LV) apeks kısmından girmesi için konumunu ayarlayın. İğnenin net görüntüsünü korumak için gerekirse prob konumunu ayarlayın. Basınç verilerini kaydederek ve ultrason görüntüsünde iğne konumunu izleyerek iğneyi LV lümenine doğru ilerletin.

Basınç transdüserinden gelen pulsatif kayıtların başlaması, iğnenin LV lümeni içindeki konumunu doğrular. İğne LV lümeninde görünmesine rağmen basınç kayıtları pulsatif değilse, basınç artışı tespit edilene kadar şırınga pistonuna hafifçe vurarak iğneyi yıkayın. Basınç ölçümleri sırasında kalbin davranışının değişmesini önlemek için sıvı yıkama işlemi minimum düzeyde tutulmalıdır.

Basınç okumaları hâlâ pulsatil değilse, iğne doğru düzlemin üzerinde veya altında olabilir ve LV lümenine girmemiş olabilir. İğneyi geri çekin, serum fizyolojik ile yıkayın ve tekrar ilerletin.

Eğer hala pulsatif okumalar elde edilemiyorsa, bir sonraki fareye geçin ve her yeni fare için daima taze bir iğne kullanın. Deney süresince embriyoların ve yenidoğanların stresini en aza indirmek için tüm prosedür mümkün olduğunca hızlı bir şekilde gerçekleştirilmelidir. C 57 Black six J farelerinin ventriküler basıncı, bir E 18 faresinde ölçülmüştür.

Beklendiği gibi, iğne LV dışındayken basınç sıfıra yakındı ve yaşlı bir P 14 faresinin LV içindeyken basınç okuması pulsatif bir seyir gösterdi. Basınç büyüklüğü daha fazla ve kalp hızı daha yüksek olduğu için basınç okuması sönümlenmişti. Kalp hızları, E 18 ile P 14 arasındaki çeşitli yaşlar için pulsatif basınç okumalarının frekansından belirlendi.

Kalp hızları ölçüldü ve sistolik LV basınçları hesaplandı. Bu prosedür gerçekleştirilirken, embriyoların periyodik olarak nemlendirilmesinin ve annenin durumunun kontrol edilmesinin önemli olduğunu hatırlamak gerekir. Bu teknik, kardiyovasküler fizyoloji alanındaki araştırmacıların gelişmekte olan farelerdeki kan basıncı değişikliklerini incelemelerinin önünü açmaktadır.