Polivinil Alkol Sünger Model İmplantasyonu

Bu prosedürün genel amacı, farelerde yara iyileşmesini modellemek için bir polivinil alkol sünger kullanmaktır. Bu işlem, öncelikle süngerin implantasyon için hidrate edilmesi ve yüklenmesiyle gerçekleştirilir. Ardından sünger, farenin karın kası ile derisi arasındaki bir cebe yerleştirilir.

İmplantasyonun ardından, her bir sünger bir tedavi ile enjekte edilebilir. Son adım, süngerlerin fareden çıkarılmasıdır. Nihayetinde, yara iyileşme sürecindeki değişimleri ve varyasyonları gözlemlemek için kesit alma, boyama ve kantitatif analizler gerçekleştirilebilir.

Bu yöntem yara iyileşmesi hakkında bilgi sağlayabilse de, tümör anjiyogenezi, ilaç iletimi, implante edilmiş hücrelerin sağkalımı ve tutunması gibi diğer çalışma alanlarına da uygulanabilir. Süngerleri, %0,9'luk sulu sodyum klorür çözeltisi içinde gece boyunca karıştırarak hidrate ederek başlayın. Ardından, hidrate edilmiş sünger süspansiyonunun 75 mililitresini 121 °C'de 25 dakika boyunca otoklavlayın.

Süngerleri sterilize etmek için, otoklavlanmış sünger çözeltisini steril bir kabine yerleştirin; ardından steril pensler kullanarak bir süngeri alın, süngeri pensle sıkın ve süngerden mümkün olduğunca fazla çözeltiyi uzaklaştırmak için bir vakum ucu kullanın. Şimdi, sıkılmış süngeri bir doku kültürü plakasına, süngerler arasında boşluk bırakmaya dikkat ederek yerleştirin ve işlem çözeltisini doğrudan bir süngerin merkezine pipetleyin. Ardından, süngerin çözeltiyi emmesine yardımcı olmak için pipet ucuyla süngere nazikçe bastırın.

Tüm süngerler yüklendikten sonra, süngerler fareye implante edilene kadar plakayı buz üzerinde saklayın. Çimdikleme refleksi testi ile sedasyon onaylandıktan sonra, fareyi sırtüstü pozisyonda bir burun konisine yerleştirerek başlayın. Ardından elektrikli bir tıraş makinesi kullanarak, farenin göğüs kafesinin altındaki alt ventral bölgede bir inç boyutunda bir alanı tıraş edin.

Ardından, bölge kesilen kıllardan arındırılarak temizlenir. Tıraş edilen bölge önce Betadine ile, ardından %70 alkol ile sterilize edilir. Sonrasında, cilt gergin tutulur.

Yerleştirilecek süngerlerin çapının bir buçuk ila iki katı büyüklüğünde dikey bir insizyon yapmak için skalpeli kullanın. Vücut boşluğunu kesmemeye dikkat edin. Derinin kenarını tutmak için pensi kullanın.

Ardından, insizyonun her iki yanındaki deriyi kastan yavaşça ayırmak için Metzenbaum makası kullanın. Cebi farenin genişliği boyunca ve göğüs kafesinden arka bacaklara kadar genişletin. Şimdi, hayvana yerleştirilecek ilk süngeri yanlarından sıkarak almak için cımbızı kullanın.

Ardından süngeri, üstten ve alttan tutulacak şekilde bir çift düz pensete aktarın. Sonra, başka bir pensetle derinin kenarını kavrayıp kaldırın ve deriye veya altındaki kasa dokunmamaya dikkat ederek süngeri yavaşça yerleştirin. Tüm süngerler yerleştirildikten sonra, bir penset yardımıyla insizyonun her iki yanını bir arada tutun ve ardından sütürü derinin her iki tabakasından geçirin.

İlk düğümü cilt kenarlarını kapatacak kadar sıkın ve kare düğümü diğer yönden bir atış daha yaparak tamamlayın. Bu kez düğümü iyice sıkın. Ardından, dikişi tamamlamak için iki kare düğüm daha atın.

Tüm insizyonu kapatmak için ek dikişler atın. Son olarak, hayvanı anestezi sisteminden çıkarın ve bilinci yerine gelene kadar izleyin. Fare hızla hareket etmeye başlamalı ve ameliyat öncesi mobilite seviyesine geri dönmelidir.

İşe, bir şırıngayı istenen solüsyonla doldurarak ve şırıngaya 28 gauge bir iğne takarak başlayın. Ardından, ayak parmağı sıkıştırma yöntemiyle sedasyonun gerçekleştiğini onayladıktan sonra, iğnenin süngerin içinde olduğundan emin olmak için iğneyi, süngerlerin merkezindeki deriden 45 derecelik bir açıyla hayvanın içine itin. İğneyi yavaşça dikey olarak kaldırın.

İğne süngerin içindeyse, sünger iğneyle birlikte yukarı doğru hareket edecektir. Ardından maddeyi yavaşça süngere enjekte edin ve iğneyi çıkarın. Hayvan sakrifiye edildikten sonra, cildi bir cımbızla tutun ve istenen süngerin yakınına bir insizyon yapın.

Son olarak, çıkarılan süngeri çevreleyen ekstra dokuları toplamamaya dikkat ederek, süngerleri çevreleyen kapsülden dikkatlice ayırın. Süngerler, yapılacak analizin türüne bağlı olarak farklı koşullar altında saklanabilir. Kesit alma işlemi için, geri kazanılan süngerler, optimal kesme sıcaklığı bileşiği (optimal cutting temperature compound) gibi bir dondurma ortamına gömülebilir veya bu H ve E boyamalı süngerlerde yapıldığı gibi, parafin bloklarda gömme ve kesit alma işlemi için %10'luk formaline yerleştirilebilir.

Trireme boyalı süngerlerin bu kesitlerinde, en iyi kesim sonuçları, süngerin burada gösterildiği gibi çap boyunca ikiye bölünüp ardından kesik yüzeyi aşağı gelecek şekilde gömüldüğünde elde edilir. Burada gösterildiği üzere, sünger kesitleri, süngerin tüm genişliği bu şekilde görünecek şekilde alınmalıdır. Soldaki sünger, kesitin sağ tarafı boyunca bozulan doku sınırından da anlaşılacağı üzere yanlış gömülmüş veya yanlış kesilmiştir; buna karşın sağdaki bozulmamış sünger doğru şekilde işlenmiştir.

Bu videoyu izledikten sonra, farelerde yara iyileşmesini incelemek için polivinil alkol süngerlerin nasıl hazırlandığı, implante edildiği, enjekte edildiği ve çıkarıldığı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.