Ortotopik Akciğer Transplantasyonu bir Mürin Modelinde Obliteratif Bronşiolit Gelişimi

Bu prosedürün genel amacı, ortotopik akciğer transplantasyonunu yansıtan bir iteratif bronşiyolit modeli oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle C 57 BL 10 faresinden donör akciğerin hasat edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım ise anastomosis için bronş, pulmoner arter ve ven manşetinin hazırlanmasıdır.

Ardından, hazırlanan donör akciğer, resipiyent C57BL/6 fareye nakledilir. Son adım, nakledilen farenin transplantasyon sonrası 21 veya 28 gün boyunca gözlemlenmesidir. Nihayetinde, nakledilen akciğerdeki iteratif bronşiyolit lezyonlarını göstermek için histolojik analiz kullanılır.

Bu modelin aynalama heterotopik havayolu nakli modeline kıyasla temel avantajı, mevcut modelin insan durumunu taklit etmesidir. Genellikle, bu yönteme yeni başlayan kişiler zorluk yaşayacaklardır; çünkü farelerdeki üst yapılar çok hassastır ve sıçan kütlesinin yalnızca 10'da 1'i kadar oldukları için yaralanmalara daha yatkındırlar. Donör fareyi sızdırmaz bir tutma haznesine yerleştirin ve %5 isoflurane ile anestezi uygulayın. Ardından, fareyi entübe etmek için 20 gauge intravenöz kateter kullanın ve ardından hayvanı bir kemirgen ventilatörüne bağlayın.

Anesteziyi %1 ila 2 isoflurane ile sürdürün. Fareyle kuyruk çekme ve ayak parmağı sıkıştırma testleri yapılarak tamamen anestezi altında olduğu doğrulandıktan sonra, fareyi sırtüstü pozisyona getirin ve abdomen bölgesini %70 alkol ile hazırlayın. Ardından, bir makas yardımıyla abdomen üzerindeki deriyi kesin ve abdominal kasları açığa çıkarın.

Ardından, önce karın duvarı boyunca orta hat üzerinden bir insizyon yaparak ve sonra sternum boyunca transvers olarak keserek lapar sternotomi gerçekleştirin, bağırsakları kenara çekin ve karaciğerin hemen altında bulunan inferior vena cava'yı lokalize edin. IVC içine kilogram başına 100 µL heparin enjekte edin. Sonrasında, karaciğerin falciform ligamentini aşağı çekin ve diyaframı ventral kaudal yapışma yeri boyunca omurgaya doğru kesin.

Torasik boşluğu açığa çıkarmak için göğüs duvarının her iki yanını boyuna kadar kesin. Akciğerleri koruyarak göğüs kafesini bilateral olarak kesin ve timusu çıkarın. Ardından, intratorasik IVC'yi diyafram seviyesinden kesin.

Şimdi kalbi bulun ve sağ atriyum apandajını eksize edin. Ardından, pulmoner arter gövdesinin kökünde transvers bir insizyon yapın ve bu insizyonu kullanarak akciğerleri iki mililitre soğutulmuş laktatlı ringer ve 0,1 mililitre heparin ile yıkayın. Trakeayı açığa çıkarın ve ardından onu özofagus ile birlikte kesin.

Şimdi ventilasyonu, tidal enflasyonun son üçte ikisinde durdurun. Kalp-akciğer bloğunu çıkarın ve buz üzerinde saklayın. Çıkarılan akciğeri ışıktan korumak için üzerine gazlı bez yerleştirin.

Pulmoner ligamenti, pulmoner vene veya pv'ye kadar kesin. Hilumu lokalize etmek için özofagusu ve aortayı çıkarın. Hilumun en kranial kısmında yer alan pulmoner arteri veya pa'yı ve ona bağlı ana bronkusu bulun.

Pulmoner arteri bronştan dikkatlice ayırın. Şimdi, 24 gauge bir IV kateteri 0,5 mm uzunluğa ve 0,7 mm uzantıya gelecek şekilde keserek bir PA manşeti hazırlayın. Manşetin yüzeyi AB örgü yapısındadır.

Anastomoz için bir yüzey sağlamak amacıyla, sadece 1 mm uzunluğunda ve 0,7 mm uzantılı 20 gauge bir kateter kullanarak, PA manşonuna benzer materyalle bronş için bir manşon hazırlayın. PV manşon boyutu, donör farenin ağırlığına göre değişir. 24 ila 27 gram ağırlığındaki fareler için.

Manşet boyutu, 27 ila 32 gram ağırlığındaki fareler için 0,7 milimetre uzunluk ve 0,7 milimetre uzantıya sahip 22 gauge'dir. Uzunluklar aynıdır ancak 20 gauge kateter kullanılır. Şimdi, manşetleri pulmoner arter, pulmoner ven ve bronkun distal uçlarına yerleştirerek her birini 9-0 ipek sütür ile sabitleyin.

Kaflar tamamen ve düzgün bir şekilde takıldıktan sonra, hazırlanan donör akciğerini laktatlı Ringer solüsyonuna batırılmış gazlı beze sarın ve transplantasyona kadar buz üzerinde bekletin. Resipiyent fareyi hazırlamak için anestezi uygulayın ve donör için kullanılan yöntemle aynı şekilde mekanik ventilasyona bağlayın.

Sol göğüs duvarını tıraş edin ve %70 alkol ile hazırlayın. Sol üçüncü interkostal boşlukta bir torakotomi insizyonu yaparak başlayın. İnsizyonu dorsal yönde omurgaya yakın bir noktaya kadar uzatın.

Cerrahi alanın steril bir şekilde örtüldüğünden emin olun ve kalbe komşu sol akciğer damarları ile bronş üzerine bir mikro damar klempi yerleştirin. Pulmoner arter kranial kısımda, pulmoner ven hilumun kaudal ucunda ve bronş ise bu ikisinin arasında görselleştirilebilir. Ardından, PA, PV ve bronş üzerinde hafif bir gerginlik oluşturmak için bir hemostata nazikçe traksiyon uygulayın.

Hiler yapıları klempli bırakın ve sol akciğeri dikkatlice rezeke edin. Pulmoner arteri, pulmoner veni ve bronşusu izole edin, ardından her bir yapının çevresine gevşek bir dikiş yerleştirin. PA'yı adventisya kılıfından tamamen diseke edin ve ardından ön duvara, damar çevresinin yaklaşık dörtte biri kadar küçük bir transvers insizyon yapın.

Arterin dorsal kısmının devamlılığını bozmadan, soğuk laktatlı ringer çözeltisine batırılmış pamuklu gazlı beze sarılı donör akciğeri alın ve torasik boşluğa yerleştirin. Ardından, anastomoz oluşturmak için kafları resipiyent PA, PV ve bronşa yerleştirin ve bunları nano sütür ile ligatize edin. Sonrasında, resipiyent akciğeri çıkarın.

Ardından, reperfüzyon ve ventilasyona olanak sağlayan hilar çapraz klempi çıkarın. Transplant edilen akciğeri alıcının toraksına geri yerleştirin ve torakotomi insizyonunu 5-0 sütür kullanarak kapatın; fare artık anesteziden uyanmalıdır. Fare bilincini geri kazandıktan sonra ağrı kesici olarak Buprenorfin verilebilir.

Bu tablo, akut reddin histolojik skorlarını ve obliteratif bronşiyolit veya OB prevalansını göstermektedir. Transplantasyon sonrası akut red skorlaması, A skoru olarak adlandırılır. Allogreft kombinasyonları, ISO grefti ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde daha fazla akut veya kronik red patolojisi göstermektedir. Ek olarak, transplantasyon sonrası 21. ve 28. günlerde obliteratif bronşiyolit prevalansı, allogreft kombinasyonlarında ISO greftine göre anlamlı derecede daha yüksekti.

Akciğer transplantasyonundan 28 gün sonraki makroskobik bulgular ve histopatoloji burada gösterilmiştir. Bu görüntüler makroskobik bulguları, H ve E boyalı ISO greft akciğerini ve sağ naif akciğeri temsil etmektedir. Bu görüntüler, BL altı fare alıcısına nakledilen ve sırasıyla OB ve non-OB geliştiren, h ve e ile masen trireme boyalı BL 10 akciğer allogreftini temsil etmektedir.

B panelindeki beyaz ok, OB lezyonlarını tanımlamaktadır. Bu panel, BL 6 akciğer allogrefti nakledilmiş BL 10 fare alıcısını göstermektedir. Uzmanlaşıldığında, bu teknik uygun şekilde uygulandığı takdirde neredeyse yarım saat içinde tamamlanabilir.

Bu tekniğin faydası, akciğer transplantasyonu sonrası primer greft disfonksiyonu, akut reddedilme ve ablatif bronşiyolit ile ilgili mekanistik soruları yanıtlamak için kullanılabilmesidir.