Sıçan ve Farelerde Ovariektomi ve 17β-östradiol Değiştirme: Görsel Gösteri

Bu prosedürün genel amacı, dişi sıçanlarda ve farelerde aksi takdirde dalgalanan serum östrojen konsantrasyonları üzerinde sıkı bir kontrol sağlamaktır. Bu, öncelikle overlerin dorsal kökten çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, elastik kapsüller ve bir Nutella karışımı hazırlanır.

Son olarak, deri altına bir kapsül yerleştirilir veya Nutella karışımı oral yolla uygulanır. Nihayetinde, kapsül yöntemi için stabil, Nutella yöntemi için ise dalgalanan serum 17 beta estradiol konsantrasyonlarını gösteren radyoimmünolojik analiz kullanılarak sonuçlar elde edilebilir. Bu tekniklerin yavaş salınımlı peletler gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, uzun süreler boyunca fizyolojik estradiol konsantrasyonları ürettiklerinin kanıtlanmış olmasıdır.

Bu yöntem, uygulama biçimleri, kökler ve dozlar arasındaki etki farklılıkları gibi östrojen alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Hayvan anestezi altına alındıktan sonra, rektal termometreye bağlı bir ısıtma plakasının üzerine prone pozisyonda yerleştirin. IGEL'i ve postoperatif rahatlama sağlamak amacıyla hayvanın boynunun lateral kısmına subkütan olarak uygulayın.

İliak krist şaverin ön kısmındaki dört çarpı dört santimetrelik alana, salin içinde kilogram başına beş miligram IL uygulayın. Ardından, hayvanı dört çarpı dört santimetrelik açıklığı olan bir cerrahi örtü ile kapatmadan önce bölgeyi bir antiseptik ile dezenfekte edin. İki ila üç santimetrelik bir orta hat insizyonu yapın ve cildi, orta hattın bir santimetre lateralinden alttaki fasyadan künt diseksiyonla ayırın.

Fasya üzerinden başka bir insizyon yapın. Ardından, karın boşluğuna ulaşana kadar bu fasyanın altında, mümkün olduğunca yüzeysel olarak lateral yönde künt diseksiyon gerçekleştirin. Cımbız kullanarak, karın boşluğunda yumurtalığı çevreleyen adipoz dokuyu tutun ve nazikçe dışarı çekin.

Overi belirleyin ve uterus kornularını ve damarlarını bu yapının 0,5 ile bir santimetre proksimalinden bağlayın. Overi ve bağlanan adipoz dokuyu çıkarın ve geri kalan dokuyu abdominal kaviteye geri yerleştirin.

Kontralateral fasya üzerinde başka bir insizyon yapın ve diğer yumurtalığı çıkarın. Yaraları kapatın ve 17 beta estradiol hemen uygulanmayacaksa, hayvanın anesteziden ayılmasını bekleyin.

Hayvanı cerrahi işlemden sonra en az iki saat boyunca ısıtmalı bir kafeste tutun. Sıçanı ameliyat sonrası ilk birkaç gün boyunca ayrı bir kafeste barındırın. Cerrahi işlemden 24 saat sonra deri altına.

17 beta estradiol'i şolastik kapsüller aracılığıyla uygulamak için hayvanlara kilogram başına beş miligram daha IL enjekte edin. İstenilen miktarı susam yağında iyice karıştırın. Pens kullanarak, tıkama işlemi için üç santimetre uzunluğunda şolastik tüpler ve beş milimetre uzunluğunda ahşap aplikatör çubukları kesin.

17 beta estradiol susam yağı çözeltisini enjekte etmeden önce, şolastik kapsülün içine bir adet ahşap tıpa yerleştirin. Kapsülün tamamını doldurmak için, açık ucu başka bir ahşap tıpa ile nazikçe kapatın. İmplantasyondan önce kapsülleri, kalan 17 beta estradiol çözeltisi içinde gece boyunca inkübe edin.

Ektomi insizyonlarını kapattıktan sonra, sıçanın boynunun dorsal yönünde ikiye iki santimetrelik kare bir alanı tıraş edin ve dezenfekte edin. Bir santimetrelik bir insizyon yapın ve lateral olarak künt dissection gerçekleştirin. Kapsül için yeterli alan oluşturacak şekilde subkütan bir cep disseke edin.

Scolastik kapsülü silin ve insizyon üzerinden nazikçe yerleştirin. Ardından insizyonu bir sütür ile kapatın. Kapsülün, özellikle yara çevresindeki cildi mümkün olduğunca az gerdiğinden emin olun.

Östrojen uygulama ortamı olarak fındık kreması Nutella'yı kullanmak için, 17 beta estradiol'i susam yağında tamamen çözün ve ardından susam yağını fındık kremasıyla karıştırın. Deneyden beş gün önce, 17 beta estradiol içermeyen bir plasebo fındık kreması hazırlayın. Sıçanları, birinci günden üçüncü güne kadar hormon içermeyen fındık kremasını yemeleri için eğitin.

Hayvanları dördüncü ve beşinci günlerde gruplar halinde eğitin. Deneyler boyunca onlara ayrı kafeslerde fındık kreması yedirin. Hayvanlara fındık kremalı fizyolojik serum verildiğinde onları ayrı kafeslere yerleştirin.

Mevcut yöntemlerin yeniden üretmeyi amaçladığı 17 beta estradiol konsantrasyonları, sıçanlar için yaklaşık 5 ila 140 picograms per milliliter ve fareler için 5 ila 35 picograms per milliliter'dir. Burada gösterildiği gibi. 300 gram ağırlığındaki dişi Sprague Dawley sıçanlarına uygulandığında.

Deri altına yerleştirilen elastik kapsüller, serum 17 beta estradiol konsantrasyonlarını ikinci günde yaklaşık 40 picograms per milliliter seviyesinden 35. güne kadar 10 picograms per milliliter seviyesine kadar yavaşça düşürür. Bununla birlikte, kapsüller 25 gram ağırlığındaki dişi C 57 black six farelere uygulandığında, uygulama sonrası hemen yaklaşık 1000 picograms per milliliter düzeyinde bir serum konsantrasyonu zirvesi beklenir ve bu değer sekiz saat içinde fizyolojik aralığa düşer.

300 g ağırlığındaki Sprague Dawley sıçanlarına nut krem yoluyla uygulandığında, serum konsantrasyonu ikinci günde yaklaşık 90 picograms per milliliter düzeyinden 35. günde 25 picograms per milliliter düzeyine yavaşça düşmüştür. Farelerde 17 beta estradiol fizyolojik seviyeleri günlük olarak 10 ile 70 picograms per milliliter arasında dalgalanma göstermiştir.

17 beta estradiol seviyeleri mililitre başına 20 ve 120 pikogram arasında dalgalanma göstermiştir. Teknikte uzmanlaşıldığında, eksizyon ve kapsül implantasyonu işlemi uygun şekilde gerçekleştirilirse 10 dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedür uygulanırken, hijyen kurallarına kesinlikle uyulması gerektiğini unutmamak önemlidir.