Tanı Otopsi ve Sıçanlar ve Fareler Seçilmiş Doku ve Örnek Toplama

Bu prosedürün genel amacı, temel bir kemirgen nekropsisi gerçekleştirmektir. Bu işlem, öncelikle hayvan hakkında temel bilgilerin kaydedilmesiyle sağlanır. Prosedürün ikinci adımı ise viseral organların incelenmesidir.

Üçüncü adım, organlar veya mezenterik lenf düğümleri gibi örneklerin toplanmasıdır. Nihai olarak, bir hayvanın sağlık durumu histopatoloji veya diğer tekniklerle belirlenebilir. Genellikle, nekropsiye yeni başlayan kişiler, kemirgen anatomilerini uygulama sırasında öğrendikleri için zorlanacaklardır.

Bu yöntemler, bir araştırma kolonisindeki hayvanların sağlık durumuna ilişkin temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Çeşitli dokuların konumlarını öğrenmek ve normal dokuyu anormal dokudan ayırt etmeyi kavramak zaman aldığı için, bu tekniklerin görsel olarak gösterilmesi büyük önem taşımaktadır. Hayvanı ötanize etmeden önce, geçmişine dair bilgileri toplayın; fiziksel durum, davranış, cinsiyet, yaş, ağırlık, strain ve benzeri mevcut özelliklerini kaydedin.

Bu kayıt, hayvanı ötanazi etmeden önce dokuları inceleyecek kişi için hayati bir yaş bilgisidir. Uygun kişisel koruyucu donanımın kullanıldığından emin olun. Bir diseksiyon tahtası, pens, makas, kap etiketleri, tespit edici, ortamlar ve toplama kapları hazırlayın.

Hayvan ötanazi edildikten sonra, vücut kondisyonunu değerlendirin; deri ve tüy anormalliklerini, zayıflamayı ve dehidrasyonu kontrol edin. Ayrıca hayvan üzerinde yapay manipülasyon, implant veya cerrahi skar izleri olup olmadığını araştırın. Ardından, bir diseksiyon mikroskobu kullanarak tüm dış açıklıkları ayrıntılı bir şekilde inceleyin.

Bunlar arasında kulaklar, gözler, burun, ağız, anüs ve genital organlar yer alır. Şimdi, hayvanı diseksiyon tahtasına sırtüstü yatırın, derisini pensle kaldırın ve makas kullanarak deriyi anüsten çeneye kadar kesin. Ardından, deriyi yanlara doğru sıyırın ve karın duvarı ile göğüs kafesini kesin.

Göğüs kafesinin her iki yanından lateral olarak iki kesi yaparak torasik viseraları açığa çıkarın. Diyaframı kesin. Ardından, sternumun üzerinden enlemesine keserek göğüs kafesini çıkarın.

Şimdi, açığa çıkan torasik ve abdominal organları inceleyin. Herhangi bir renk değişikliğini, olağan dışı kokuları, boyut farklılıklarını ve eksik veya yer değiştirmiş organları belirleyin. Organ yüzeylerinin kıvamını inceleyin ve herhangi bir doku kitlesini veya sıvı dolu cepleri not edin.

Ayrıca, her iki boşlukta da sıvı olup olmadığını not edin. İncelemeye gastrointestinal kanal ile devam edin. Mezenteriyi, büyümüş lenf nodları veya doku kütleleri açısından inceleyin.

Gastrointestinal kanalın içeriğini tanımlayın ve duvar kalınlaşması, kitle veya hemoraji açısından dikkatlice kontrol edin. Böbreklerin içini incelemek için, bir bistüri yardımıyla sol böbrekten boylamasına, sağ böbrekten ise orta hattın dışından enine bir kesit alın. Parankimi herhangi bir anormallik açısından kontrol edin.

Şimdi erkeklerde ürogenital sistemi inceleyin. Seminal vezikülleri, testisleri, epididimisi, üreterleri ve dişilerdeki perüral bezleri tanımlayın. Uterusu, yumurtalıkları ve üreterleri tanımlayın.

Ürogenital sistemde tıkanıklıklar, sıvı birikimleri, hemoraji veya diğer anormallikler olup olmadığını inceleyin. Bu incelemeleri tamamladıktan sonra, daha ayrıntılı analizler için hedef organları izole edin ve çıkarın. Genellikle kalp, karaciğer, böbrekler ve dalak, çıkarıldıkları sırada toplanır.

Yeterli fiksasyon sağlamak için her organı bir fiksatöre daldırın veya dondurma ya da immünohistokimya gibi bu dokuları gerektiren bir protokolün ilk adımlarını takip edin. Genellikle dokular, bir hacim dokuya 20 hacim fiksatör oranında %10 NBF gibi bir koruyucuya daldırılır. Sıçanlarla çalışırken, nazal aspirattan önce bronşiyal aspiratı toplayın.

Sırasıyla, tükürük bezlerini ve servikal kas yapısını açığa çıkarmak için deri ile deri altı dokuları servikal bölgeden uzağa doğru yansıtarak başlayın. Ardından, trakeayı açığa çıkarmak için bu dokuları uzaklaştırın. Trakeada üç milimetrelik bir insizyon yapın ve bir mililitre örnekleme sıvısı yüklü bir pipeti, trakeal lümene doğru çeyrek açıyla yerleştirin.

Örnekleme sıvısını trakeadan akciğerlere doğru üç kez yavaşça pompalayın. Ardından örnekleme sıvısını geri çekin ve pipeti trakeadan çıkarın. Sıvının tamamı pipete geri dönmeyecektir.

Bu nedenle, daha fazla sıvıya ihtiyaç duyulursa işlemi tekrarlayın. Farelerde test etmek için; nazal aspirat veya bronşiyal aspirat örneği almak için, sterilize edilmiş makas kullanarak nazofaringeal ATU'ya erişin.

Temporomandibular eklemi kesin ve mandibulayı maksilladan uzaklaştırarak reflekte edin; böylece nazal aspirat toplamak için nazofarinks girişini açığa çıkarın. Farelerin nazofarinks girişine veya sıçanların trakeal lümenine bir mililitre örnekleme sıvısı yüklü bir pipet yerleştirin. Pipet kranial yöne doğru yönlendirilmeli ve içeri itilmelidir.

Böylece uç, nazal palata temas eder. Bu noktada, örnekleme sıvısını yavaşça enjekte edin. Sıvı nazal kaviteye girdiğinde, nazal orifiste menisküsler oluşturacak ve ayrıca yarı saydam oral palate üzerinden de görünür olacaktır.

Ancak, sıvı ağızdan dışarı çıkarsa pipeti yeniden yönlendirin. Tam olarak enjekte edildikten sonra, örnekleme sıvısını burun boşluğundan pipete geri çekin ve ardından pipeti çıkarın. İşleme, trakeyi pensle kavrayıp pensin hemen üzerinden keserek başlayın.

Ardından, tüm toraks dokuları çıkarılabilene kadar doku bağlantılarını keserek trakeyi nazikçe yukarıya doğru çekin. Şimdi, akciğerleri çalışma yüzeyine düz bir şekilde yerleştirin ve trakenin etrafına bir parça sütür veya ipi gevşekçe bağlayın. Düğümü çok sıkmayın, aksi takdirde iğneyi trakenin içine geçiremezsiniz.

Şimdi, bir şırıngayı fiksatif ile doldurun ve trakeyi iğneye sabitleyerek iğneyi trake açıklığına yerleştirin. Bir forseps yardımıyla, akciğerler tamamen şişene kadar onları yavaşça fiksatif ile doldurun. Kullanılacak fiksatif hacmi hayvanın yaşına, suşuna ve sağlık durumuna göre değişiklik gösterecektir.

Dokular yetersiz şişirilmişse düz görünür; fazla şişirilmişse, doldurulduktan sonra dokudan köpüklü sıvı sızacaktır; fiksatifin akciğerlerden geri akmasını önlemek için trakeayı çevreleyen dikiş malzemesini veya ipi sıkılaştırın. Ardından, şişirilmiş akciğerleri fiksatife yerleştirin. Kadavrayı temiz bir diseksiyon tahtasına ventral rekumbent pozisyonda yerleştirin ve kalfanın üzerindeki deri ile kası çıkarmak için makas ve pens kullanın.

Ardından, küçük bir makas kullanarak karkasın başını kesin. Alt bıçağı foramen magnum'a yerleştirin ve yukarı doğru bir hareketle kafa tası orta hattı boyunca kesin. Şimdi, kafa tasını pensle açarak beyni açığa çıkarın.

Patolog, beynin kesitlerini kafatası içindeyken almaya tercih ederse, beyni açık olan kafatasını hemen %10 NBF içerisine yerleştirin. Aksi takdirde, başı burun kısmından pens veya parmaklarla kavrayın ve dokunun kafatasından düşmesine yardımcı olmak için kafatasını nazikçe ters çevirin. Olfaktör loblardan başlayarak, kavisli pensi beynin dış kenarı boyunca dikkatlice kaydırın.

Penseti kranyum boyunca serebelluma doğru kaydırmaya devam ederken, aynı pensetle sinirleri nazikçe sıkıştırın. Beyin serbest kaldığında fiksatifin içine yerleştirin; mezenterik lenf düğümlerini bulmak için öncelikle bağırsağın sekum şeklindeki büyük kısmını bulun. Mezenterik lenf düğümleri, sekuma komşu mezenterdeki sarı oval veya küresel doku kitleleridir.

Bunlar genellikle çevreleyen mezenter ve yağ dokusundan biraz daha kalın ve doku olarak daha serttirler. Dokuları başlangıçta ayırt etmek için bir diseksiyon büyüteci faydalı olabilir, ancak deneyim kazandıkça buna gerek kalmayacaktır. Pens ve makas kullanarak mezenterik lenf nodlarını izole edin, ardından bunları kültür, PCR veya histopatoloji için kullanılmak üzere bir saklama tüpüne aktarın.

Protokol tamamlandıktan sonra, bir patolog veya bilim insanı için şunlar hazır olacaktır: ötanazi anındaki objektif ve sübjektif durumun yazılı bir raporu; dokuların fiksasyon öncesi objektif tanımı; fiksatif içindeki tüm ana abdominal ve torasik organlar; beyin ve mezenterik lenf düğümleri ile nazal ve bronşiyal aspirat örnekleri. Uzmanlaşıldığında, kısaltılmış bir nekropsi 30 dakikadan kısa sürebilir.

Bu prosedürü gerçekleştirirken, hayvanın ve dokularının durumuna ilişkin gözlemlerinizi kaydetmeyi hatırlamanız önemlidir. Bu videoyu izledikten sonra, perfüze edilmiş akciğerlerin, mezenterik lenf düğümlerinin ve beynin toplanmasını da içeren eksiksiz bir kemirgen nekropsisinin nasıl yapılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.