Sosyal Kaçınma Niceleme için Basit Testi Drosophila melanogaster

Bu prosedürün amacı, sineklerin stresli bireyler tarafından yayılan sosyal sinyale verdiği tepkiyi ölçmektir. Bu, deneyden en fazla iki gün önce ilk toplama, yanıtlayıcı ve yayıcı sinekler ile gerçekleştirilir. İkinci adım, hem yayıcı hem de yanıtlayıcı sinekleri deneyden iki saat önce taze şişelere aktarmak ve tahlilin yapılacağı çevre kontrollü odaya alışmalarına izin vermektir.

Daha sonra, yanıtlayıcı sinekler TMA'lara yerleştirilir ve sineklerin daha önce vurgulandığı, böylece drosophila stres kokusunu içeren bir şişe ile taze bir şişe arasında seçim yapılır, son adım, DSO'ya yanıtlarını ölçmek için DSO şişesindeki ve asansördeki taze şişedeki yanıtlayıcı sineklerin sayısını saymaktır. Sonuç olarak, T labirenti, bir sosyal stres sinyalinin, özellikle de gilo stres koku vericisinin sineklerinden kaçınmayı ölçmek için kullanılır. Bu yöntem fikri ilk olarak Caltech'te doktora sonrası araştırmacı olduğumda aklıma geldi.

O zamanlar, Greg Sue ve doktora sonrası danışmanı David Anderson, Phyla'da korku veya sosyal kaçınma üzerine çalışıyorlardı, ancak bunun için mevcut bir test yoktu. Bana yaklaştılar çünkü S brands'ın laboratuvarında çok fazla davranış tahlili yapıyordum ve fototaksi ve koku öğrenme deneyleri yaparken, sineklerin o sırada elektrik şoku ile strese girdikleri şişelerden kaçınırken diğer sineklerin rahatsız edilmeden biraz zaman geçirdikleri şişelere çekildiğini fark etmiştim. Piskopos. Bu yöntemin gösterilmesi kritik öneme sahiptir, çünkü sosyal kaçınma testinin deneysel süreci, herhangi bir sinek veya DSL kaybetmeden bios'u aktarmada hızlı ve verimli olmak için biraz pratik gerektirir.

Bu tekniğin, bilgisayar destekli video izleme gibi mevcut yöntemlere göre sosyal etkileşimleri incelemek için temel avantajı, bunun ustalaşması ve uygulanması kolay bir tahlil olması, ancak stresli bireylerin sosyal kaçınmasını ölçmek için çok güçlü olmasıdır. Deneye başlamak için, 12,7 santimetreye 10,2 santimetrelik bir kutuyu kaplayacak şekilde gözenekli bir polietilen levha kesin. Kutuyu kırılmış buzla doldurun ve drosophila soğuk anestezi cihazını tamamlamak için tabaka ile örtün.

Homojen aydınlatma koşullarını sağlamak için deneyi beyaz bir tezgah örtüsü ve önünde beyaz tahta ile kaplı bir tezgah üzerinde gerçekleştirin. Ardından, girdap sinek aspiratörü takım arkadaşlarının aparatını, termometresini ve zamanlayıcısını hazırlayın. Deneyden bir ila iki gün önce kolon anestezisi sinekler.

Sinekleri bir huni ile 50 mililitrelik bir tüpe aktarın ve tüpü buz seviyesinin altında yalıtılmış bir buz kovasına yerleştirin. Sineklerin soğuk komaya girmesi için beş dakika bekleyin. Daha sonra sinekleri oda sıcaklığında gözenekli polietilen levhaya aktarın ve stereo mikroskop altında yanıtlayıcı sinekleri ayırın.

Üç ila yedi günlük erkek sinekleri dişi sineklerden ayırın ve bu sinekleri 40 kişilik bir grupta nazikçe karışık cinsiyetli Kanton yayıcı sinekleri toplayın. Ağız aspiratörü kullanarak sineklerin çıkmasına izin verin. Koleksiyonun davranış üzerindeki herhangi bir kafa karıştırıcı etkisini en aza indirmek için bir gecelik iyileşme.

Ardından, torbadaki eski plastik kokulu havayı temiz hava ile değiştirmek için test şişeleri torbasını açın. Deneyden önce, test odası sıcaklığının 25 santigrat derece olduğundan, odanın eşit ışığa sahip olduğundan ve nemin %30'dan fazla olduğundan emin olun. Deneyden iki saat önce, yanıtlayıcı ve yayıcı sineklerini taze gıda şişelerine aktarın ve deneyin yapılacağı tezgahta sineklerin ortama uyum sağlamasına izin verin. Çay labirentini vurma pedinin üzerine yerleştirin ve asansörün sabit olması için vida klipsini sıkın.

Daha sonra, yanıtlayıcı sineklerini yeni bir test şişesine aktarın ve yanıtlayıcı sineklerini içeren şişeyi çay labirentinin üzerine yerleştirin. Daha sonra çay labirenti aparatını eğin ve meyve sineklerinin asansöre düşmesi için vurma matına vurun. Sinekleri TMA'ların üst ve alt bölümleri arasına yerleştirmek için asansörün üst kısmını aşağı doğru hareket ettirin ve yanıtlayıcı sinekler yeni ortama uyum sağlarken sineklerin kaçmasını önlemek için asansörün seçim noktasının üzerinde olduğundan emin olun.

Yayıcı sineklerini yeni bir test şişesine yerleştirin ve üzerine bir parça pamuk koyun. Şişeyi bu şekilde mini bir girdap üzerinde çalkalayın. Sinekler DSO'yu yayacak, sinekleri bir gıda şişesine aktaracak ve DSO doldurulmuş şişeyi hızlı bir şekilde ekibin iki tarafından birine yerleştirecektir.

DSO dolgulu flakon için alternatif bir yerleştirme tarafı. Her yeni çalışmada, A takımının diğer tarafına yeni bir test şişesi yerleştirin ve ardından meyve sineklerinin taze test şişesi ile DSO dolgulu şişe arasında seçim yapabilmesi için asansörü tamamen aşağı indirin. Zamanlayıcıyı hemen başlatın.

Bir dakika sonra, taze şişedeki sinekleri ve DSO şişesini asansörde sıkışan sineklerden ayırmak için asansörü yukarı hareket ettirin. Her şişedeki ve asansördeki sinek sayısını sayın. Bunu tekrarla.

Her genotip ve/veya durum grubu için, yanıtlayıcı sineklerin büyüklüğü DSO'dan kaçınmalarını etkilemez. Deneyi 10 ila 80 sinek üzerinde gerçekleştirdikten sonra, bir T-testi, yanıtlayıcı sineklerin performans indeksleri veya PI'leri arasında istatistiksel bir anlamlılık göstermedi. Yayıcı sineklerin sayısı, farklı denemeleri temsil eden bu grafikte gösterildiği gibi DSO'nun sineklerden kaçınmasını etkiler.

Her biri 10 ila 160 yayıcı kullanarak uçar. Sadece 10 stresli sinek ile hala önemli bir kaçınma tespit edildi. Meyve sineklerinin seçimi, zamanı ve genetik arka planı, Kanton ve Elwood suşlarının bir tepkisini gösteren bu grafikte gösterildiği gibi DSO'ya verilen yanıtı etkiler.

Her iki genotip de DSO'dan Oregon'dan daha güçlü bir kaçınma ve gelişmesinden sonra bazı markin suşları gösterir. Bu teknik, sinirbilim alanındaki araştırmacıların, DSO'nun bileşenlerinden biri olan CO2'nin algılanması ve kaçınılmasının altında yatan nöro devreyi tanımlamasının yolunu açtı. Otizm adayı genlerin sosyal davranışı etkilemedeki rolünü incelemek için de kullanılmıştır.

Joseph Ano Gaster'da. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik replika başına beş dakikadan daha kısa sürede gerçekleştirilebilir. Bu videoyu izledikten sonra, emitör ve yanıtlayıcı sineklerinin test edilmeden önce hazırlanmasından, DSL alan bios'unun oluşturulmasına ve yanıt verenlere ikili bir seçenek sağlamak için ekip arkadaşlarının manipülasyonuna kadar bir sosyal kaçınma testinin nasıl yürütüleceğini iyi anlamalısınız.