Japon Ensefaliti Aşılı Çocuklarda Lenfositlerin Tespiti için Akış Sitometreleri Arasında Laboratuvarlar Arasında Transferin Standardizasyonu
10 Şubat 2023
Bu çalışmada, Japon ensefalit aşılı çocuklarda lenfositlerin tespiti için iki laboratuvarda iki akış sitometresi arasında deneysel ortamların ve analiz şablonlarının transferini kolaylaştırmak için bir yöntem geliştirilmiştir. Akış sitometresi deneyleri için standardizasyon yöntemi, araştırma projelerinin birden fazla merkezde etkili bir şekilde yürütülmesini sağlayacaktır.
Akış sitometresinin standardizasyon yöntemi, laboratuvar sonuçlarının karşılıklı akreditasyonu için uygulanabilir bir yaklaşım sağlar ve sonuçların birden fazla merkezdeki araştırma projeleriyle tutarlılığını sağlar. Zaman tüketimini en aza indirgeme yönteminin yürütülmesi kolaydır, otomatikleştirmek için donatılmıştır, şablonu analiz eder ve veri analizi gereksinimini önemli ölçüde azaltabilir. Sitometre A yazılımında, aktarma laboratuvarından, sitometre düğmesine tıklayarak ve görünüm yapılandırmalarını seçerek yeni bir yapılandırma oluşturmaya başlayın.
Konfigürasyon listesinde temel konfigürasyonlar klasörüne sağ tıklayın, yeni klasörü seçin ve yeniden adlandırın. Ardından, temel yapılandırmayı sağ tıklatıp kopyalayarak yeni bir yapılandırma oluşturun. Yeni klasörü sağ tıklayın ve yeni yapılandırmayı yeniden adlandırmadan önce temel yapılandırmayı yapıştırın, Standartlaştırılmış yöntem aktarımı"Parametreler listesinden FETC gibi parametre adını uygun dedektör 530/30'a sürükleyin, ayrıca yeni yapılandırmaya ek parametreleri düzenleyin.
Aktarımı yapan laboratuvarda denemeyi standartlaştırmak için, bu sitometre A kurulumunu kullanarak bir performans kontrolü çalıştırın ve Sitometre A'nın iyi performans gösterdiğini doğrulamak için boncukları izleyin. Yazılım tarayıcı penceresinde sitometre A ayarlarına sağ tıklayın ve uygulama ayarlarını seçerek bir çalışma sayfası oluşturun. Ardından, ileri saçılma alanının veya FSC'nin ve yan saçılma alanının veya SSC'nin ve tüm floresan parametrelerinin fotoğraf çarpan tüpünü veya PMT voltajlarını ayarlamak için lekesiz bir örnek kullanın.
Deneme sitometresi ayarlarına sağ tıklayıp uygulama ayarlarını seçerek uygulama ayarlarını kaydedin. Ücret kontrollerini otomatik olarak eklemek için, telafi denetimleri oluştur'u seçmeden önce deneme düğmesine tıklayın ve ücret ayarları menüsünü seçin. Tüm kompanzasyon kontrol boncukları için verileri kaydedin.
İşiniz bittiğinde, denemeye tıklayın ve kompanzasyon kurulumunu seçin, tek hücreli lekeli kontroller için verileri kaydetmeden önce telafiyi otomatik olarak hesaplayın. R7-18'in telafi değerini %15 APC'ye değiştirmek için CD45 RAA APC'yi, APC H7'nin telafi değerini %14 BB700'e değiştirmek için CD19 BB700'ü ve APC H7'nin ücret değerini %60 R7-18'e değiştirmek için CD8 R7-18'i kullanın. CST boncukları için verileri kaydettikten sonra, CST parlak boncukları için hedef değer şablonunun genel bir çalışma sayfasını oluşturun, bir kez bittiğinde, örnekleri akış sitometre dizisinde çalıştırın ve 25.000 lenfosit toplayın.
Örnekler için analiz şablonunun genel bir çalışma sayfasını oluşturun ve deneysel şablonu sitometre A.CD-ROM'u kullanarak deneysel şablonu dışa aktarın. Deneysel şablonu test laboratuvarındaki sitometre B'ye aktarmak için, sitometre B'nin iyi performans gösterdiğini doğrulamak için CST boncuklarını kullanarak bir performans kontrolü yapın. Deneysel şablonu sitometre A'dan içe aktarın ve şablonu kullanarak B sitometresi için bir deney oluşturun.
Aynı sayıda CST boncuğu kullanılarak, her floresan kanalı için floresan parametre voltajları önceki MFI cihazıyla eşleşecek şekilde ayarlanır. Gerekirse, lekesiz numuneyi kullanarak FSC voltajını ayarlayın. Deneysel sitometre ayarlarına sağ tıklayın ve uygulama ayarlarını kaydetmek için uygulama ayarlarını seçin.
Ardından, CD45 RA APC kullanarak R7-18 telafi değerini %15 APC olarak değiştirin. APC H7'nin telafi değerini %24 BB700 olarak değiştirmek için CD19 BB700 kullanın. APC H7'nin telafi değerini %60 R7-18 olarak değiştirmek için CD8 R7-18'i kullanın.
Telafi değeri modifikasyonundan sonra, örnekleri B akış sitometresinde çalıştırın ve 25.000 lenfosit toplayın. Sitometre kurulumu ve takibi için hedef değer şablonunun genel bir çalışma sayfasında veya CST parlak boncuklarda, 10 floresan kanalının histogram grafikleri elde edildi, histogram kapıları içinde medyan gösterilerek her parametre için hedef değer görüntülendi. cihaz standardizasyonundan sonra A ve B sitometresi kullanılarak elde edilen numunenin nokta grafikleri, otomatik bir analiz şablonu kullanarak farklı cihazlar arasındaki verilerin tutarlılığını göstermiştir.
Altı numuneden elde edilen sonuçlar iki farklı cihaz modelinde karşılaştırıldığında anlamlı bir fark gözlenmedi. Standartlaştırılmış yöntem kullanılarak farklı aletlerden elde edilen 15 lenfoid alt setin sonuçları oldukça karşılaştırılabilir veriler elde etmiştir. Aynı konfigürasyon adı, şablonun oluşturulması ve güvenlik boncuklarının ekoteknoloji değerlerinin farklı enstrümanlarda yapılması bu protokoldeki kritik adımlardır.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu çalışma, farklı laboratuvarlardaki akış sitometreleri arasında deneysel ayarların ve analiz şablonlarının aktarılması için standartlaştırılmış bir yöntem sunmaktadır. Bu yaklaşım, Japon ensefaliti aşısı uygulanmış çocuklarda lenfositlerin tespitini artırmayı ve böylece çok merkezli araştırma projelerini kolaylaştırmayı amaçlamaktadır.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Akış Sitometrisi
- İmmünoloji
- Standardizasyon Yöntemleri
Arka Plan
- Akış sitometrisi, lenfosit popülasyonlarının analizinde kritik bir araçtır.
- Laboratuvarlar arasında tutarlı sonuçlar elde etmek için standardizasyon esastır.
- Japon ensefaliti aşısı halk sağlığı için önemlidir.
- Laboratuvarlar arası iş birliği, araştırma sonuçlarını iyileştirebilir.
Çalışmanın Amacı
- Akış sitometrisi deneylerini standartlaştırmak için bir yöntem geliştirmek.
- Laboratuvarlar arası deneysel ayarların aktarımını kolaylaştırmak.
- Aşılanmış çocuklarda lenfosit tespitinin güvenilirliğini artırmak.
Kullanılan Yöntemler
- Akım sitometresi yazılımında yeni konfigürasyonların oluşturulması.
- Temel konfigürasyonların laboratuvarlar arasında aktarılması.
- Standartlaştırılmış analiz için parametrelerin düzenlenmesi.
- Veri analiz süreçlerinin otomasyonu.
Temel Sonuçlar
- Bu yöntem, laboratuvar sonuçlarının karşılıklı akreditasyonuna olanak tanır.
- Zaman tüketimini minimize eder ve uygulamayı basitleştirir.
- Otomatik analiz, kapsamlı veri işleme ihtiyacını azaltır.
- Standardize edilmiş konfigürasyonlar, merkezler arası tutarlılığı artırır.
Sonuçlar
- Standartlaştırılmış yöntem, laboratuvarlar arası iş birliğini geliştirir.
- Lenfositleri içeren araştırmalar için güvenilir sonuçlar sağlar.
- Bu yaklaşım, çeşitli çok merkezli çalışmalara uygulanabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama ve Önemi
Çok merkezli immünoloji çalışmaları, farklı akış sitometrisi platformları arasında veri karşılaştırılabilirliğini ve tekrarlanabilirliğini sağlamak için güçlü bir standardizasyon gerektirir. Bu yöntem, deneysel ayarların ve analiz şablonlarının farklı cihazlar ve laboratuvarlar arasında aktarılmasına olanak tanıyarak, portföy genelindeki immün izlemeyi ve merkezler arası veri entegrasyonunu doğrudan destekler. Standartlaştırılmış iş akışları, biyolojik ve operasyonel değişkenliği azaltarak, aşı araştırmaları ve ötesindeki immün fonksiyon değerlendirmelerinde öngörü güvenilirliğini artırır.
Biyofarma Ar-Ge'de Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Hedef doğrulama çalışmaları için farklı merkezler arasında tutarlı immün hücre fenotiplemesi sağlar.
- Enstrüman kurulumunu ve kapılama (gating) stratejilerini harmonize ederek mekanistik belirsizliği azaltır.
- Erken aşama programlar için immünolojik son noktaların öngörülebilir güvenilirliğini destekler.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Çok merkezli tarama kampanyaları için valide edilmiş akış sitometrisi analizlerinin hazırlanmasını kolaylaştırır.
- Standartlaştırılmış şablonlar aracılığıyla analiz tekrarlanabilirliğini ve kantitatif karşılaştırılabilirliği artırır.
- Farklı kohortlarda ve ortamlarda immün yanıtların güvenilir bir şekilde değerlendirilmesine olanak tanır.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Aşı geliştirme süreçlerindeki translasyonel biyobelirteç çalışmaları için immün izleme protokollerini uyumlu hale getirir.
- Keşif aşamasından preklinik doğrulamaya kadar immün fonksiyon verilerinin sürekliliğini sağlar.
- Laboratuvarlar arası değişkenliği minimize ederek riskten arındırılmış ilerleme kararlarını destekler.
İş Akışı ve Boru Hattı Entegrasyonu
Bu standardizasyon yöntemi, keşiften preklinik aşamaya kadar olan sürece entegre olarak, erken dönem araştırmalardan çok merkezli doğrulamaya kadar sorunsuz bir immün monitörleme imkanı sağlar.
- Keşif Biyolojisi: Tutarlı lenfosit tespitini sağlayarak hipotez testlerini ve yolak netleştirmelerini destekler.
- Tarama: Farklı platformlarda immün hücre alt küme analizi için assay hazırlığı ve tekrarlanabilirlik sunar.
- Analitik: Güçlü veri karşılaştırması için kantitatif floresan yoğunluğu ve kompanzasyon çıktıları sağlar.
- Translasyonel Araştırma: Çok merkezli aşı çalışmalarında biyobelirteç uyumunu ve veri bütünlüğünü korur.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Gelecekteki çok merkezli immünoloji projeleri için yeniden kullanılabilir bir standardizasyon protokolü oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: İmmün monitöringde öngörü güvenilirliğini artırır ve mekanistik belirsizliği azaltır.
- Operasyonel Değer: Analiz kurulumunu kolaylaştırır, manuel düzenlemeleri minimize eder ve tekrarlanabilirliği artırır.
- Stratejik Değer: Çok merkezli çalışmalarda güvenilir devam/dur kararlarına ve verimli kaynak tahsisine olanak tanır.
- Portföy Etkisi: Aşı ve immünoloji programları için riskle uyumlu önceliklendirmeyi ve çalışmalar arası veri entegrasyonunu destekler.
Uygulama Hususları
- Akış sitometrisi konfigürasyonu ve kompanzasyon ayarı konusunda uzmanlık gerektirir.
- Uyumlu yazılıma ve kalibrasyon için standartlaştırılmış floresan boncuklara erişim gereklidir.
- Şablon tasarımı ve gating stratejileri üzerinde ekipler arası mutabakat gerektirir.
- Farklı cihaz modelleri veya numune türleri için adaptasyon gerekebilir.
- Optimal karşılaştırılabilirlik için tutarlı reaktif lotlarına ve cihaz bakımına bağımlıdır.
Biyofarma SSS
Chapters in this video
0:05
Introduction
0:57
Create Identical Configuration with the Same Name on Different Cytometers
1:45
Standardizing Experiment Using Cytometer A in the Transferring Lab
3:48
Transferring the Experimental Template to Cytometer B in the Test Method Lab
5:02
Results: A Rapid and Feasible Standardization Method to Transfer Parameters Across Different Flow Cytometers
5:50
Conclusion
