Bir Murin Kemik İliği Yaralanması Modelinde İntramembranöz Ossifikasyon Yoluyla Postnatal Osteogenezi İncelemek için Geliştirilmiş Metodoloji

Araştırmamız, kemik iliği yaralanması modelini kullanarak kemik onarım mekanizmalarını anlamaya odaklanmıştır. İyileşme sırasında intramembranöz ossifikasyonun nasıl düzenlendiğini ortaya çıkarmayı ve kemik rejenerasyonunu artırmak için kullanılabilecek terapötik yaklaşımları keşfetmeyi amaçlıyoruz. Bu alanda yapılan son çalışmalar, iskelet sapı ve progenitör hücreleri tanımlayan yüzey belirteçleri oluşturmuş ve kemik gelişimi ve onarımındaki kritik rollerini ortaya koymuştur.

Protokolümüz, intramembranöz ossifikasyon sırasında bu hücrelerin katkılarının araştırılmasını sağlar, bu da kemik onarımı sırasında regülasyonlarını ve terapötik hedefleme potansiyellerini keşfetmemize olanak tanır. Protokolümüz, klinik olarak anlamlı bir model kullanarak, doğum sonrası bağlamda yalnızca intramembranöz ossifikasyon yoluyla kemik onarımını anlamadaki boşluğu ele almaktadır. İntramembranöz ossifikasyonu incelemek için kullanılan diğer yaralanma modellerinin aksine, protokolümüz özellikle uzun kemiklerde daha kontrollü bir ortam ve tekrarlanabilir yaralanma yanıtları sağlar.

Gelecekte, laboratuvarımız, osteogenezin epigenetik düzenleyicilerini geçici olarak modüle etmek için lokalize farmakolojik yaklaşımların yanı sıra kemik iliği yaralanması modelini kullanacaktır. Amacımız, yeni terapötik yaklaşımlarla kemik yenilenmesini ve iyileşmesini artırmaktır. Başlamak için, tüm çalışma yüzeylerini klinik sınıf bir dezenfektan temizleyici ile hazırlayın ve dezenfekte edin.

Isıtma platformunu steril bir cerrahi ped ile örtün. Tüm steril aletleri ve reaktifleri toplayın ve düzenleyin. Şimdi, fareyi hassas bir terazi kullanarak tartın.

Mevcut buprenorfin formülasyonuna dayanarak, analjezik uygulama için gerekli hacmi hesaplayın. Fareyi uyuşturduktan sonra, indüksiyon odasından dikkatlice çıkarın. Hayvanı sırtüstü pozisyonda steril cerrahi pedin üzerine yerleştirin ve burun konisini farenin başının üzerine yerleştirin.

Fareyi burun konisinden kısaca çıkarın ve hesaplanan uzun süreli salımlı buprenorfin analjezik dozunu deri altı yoldan enjekte edin. Ardından fareyi dikkatlice burun konisi anestezi ünitesine geri yerleştirin. 26 gauge iğne ile donatılmış üç mililitrelik bir şırıngayı steril tuzlu su ile doldurun ve yan tarafa yerleştirin.

İşlemin elektrikli veya pille çalışan makaslar kullanılarak gerçekleştirileceği arka bacaktan kürkü çıkarın. Steril pamuk uçlu aplikatörler kullanarak ameliyat bölgesine %10 povidon-iyot ovma uygulayın, ardından %70 izopropil alkol ovma uygulayın ve alanın tamamen kurumasını bekleyin. Şimdi fareyi sırt üstü yatırın ve ameliyat bacağının dizini esnetin.

Bacağınızı, baskın olmayan eliyle, diz orta parmağın üzerine bükülecek şekilde tutun. İkinci parmak uyluk kemiğine ve başparmak tibiaya dayanır. Bir neşter kullanarak, patellanın hemen altında küçük, sığ bir yatay kesi yapın.

Bükülmüş diz boyunca yatay olarak yerleştirilmiş iğne ile eklem boşluğunu bulun ve uyluk kemiği ile kaval kemiği arasındaki boşluğu hissedin. 25 gauge iğne ile distal uyluk kemiğini dizden proksimal tarafa doğru manuel olarak delmek için bu anatomik kılavuzu kullanın. İğneyi patellanın içinden veya çevresinden geçirin.

İğnenin medüller boşluğa doğru yerleştirildiğini bir röntgen ile onaylayın ve merkeze mümkün olduğunca yakın olduğundan emin olun. 25 gauge iğneyi çıkardıktan sonra, hemen ilik boşluğundaki aynı deliğe 26 gauge bir iğne sokun. Medüller boşluğun kenarlarını pürüzsüz hissedene kadar en az beş kez dairesel hareketlerle raybalayın.

Ardından 26 gauge iğneyi çıkarın ve geri akış berraklaşana kadar boşluğu 1,5 ila 2 mililitre tuzlu su ile yıkayın. Şırıngayı ve iğneyi belirlenmiş bir kaba güvenli bir şekilde atın. Daha sonra, topikal bir yapışkan sütür kullanarak cilt yarasını kapatın.

Ameliyattan hemen sonra, daha önce hesaplandığı gibi kalan uzun süreli salımlı buprenorfin dozunu uygulayın. Normal, engelsiz solunum belirtileri için ısıtma yastığı üzerindeki hayvanı izleyin.