İnsan Renal Arteriyel Dallarının Çok Düzeyli Mikrodiseksiyonu ve Fonksiyonel-Yapısal Profillemesi

Araştırmamız, insan renal arter dallarını izole etmek ve fonksiyonel olarak değerlendirmek için standartlaştırılmış yöntemler oluşturmayı, vasküler disfonksiyon mekanizmalarını ortaya çıkarmayı ve hedefe yönelik tedavilere rehberlik etmeyi amaçlamaktadır. Önceki araştırmalar, tel miyografimizin in vitro olarak insan renal arter fonksiyonunu doğrudan yansıttığı hayvan modellerine veya dolaylı görüntülemeye dayanıyordu. Yöntemimiz hassas, insana özgü vasküler analiz, tür sınırlamalarının üstesinden gelme ve translasyonel ilaç geliştirmeyi iyileştirme sağlar.

Başlangıç olarak, doku canlılığını ve yapısal bütünlüğünü korumak için taşıma sırasında böbrek dokusunun tamamen sıvıya batırılmış halde kalmasını sağlayın. Renal hilusun yerini belirleyerek ve kesiği hem renal pelvisten hem de lateral dışbükey sınırdan geçecek şekilde hizalayarak koronal düzlemi görsel olarak tanımlayın. Steril bir neşter kullanarak, iki simetrik yarım oluşturmak için böbreği bu koronal düzlem boyunca ikiye bölün ve böbrek piramitleri ve sütunları gibi iç yapıları ortaya çıkarın.

Stereo mikroskop altında, 10 santimetrelik siyah tabanlı bir kültür kabında interlobar, kavisli ve interlobüler arterleri titizlikle ayırmak için mikrodiseksiyon makası ve forseps kullanın. Ardından, iyice temizlemek için aynı 10 santimetrelik siyah tabanlı kültür kabında diseke edilmiş arterlerden çevredeki doku ve yağları nazikçe çıkarın. Mikrodiseksiyon makası kullanarak, vasküler fonksiyon çalışmaları için temizlenmiş arterleri yaklaşık iki milimetre uzunluğunda halkalara ayırın.

İlk kılavuz teli dikkatlice çanağın içindeki arteriyel halkaya yerleştirin. Kılavuz telin bir tarafını 90 derecelik bir açıyla bükün ve tel ile birlikte arteriyel halkayı hazneye aktarın. Arteriyel halkayı numune tutucuya sabitlemeden önce kap uzunluğunu kaydedin.

Halkayı iki tutucu arasına yerleştirin ve bir ölçek bölümünün 10 mikrometreye eşit olduğu mikrometre ölçeğini okuyun. Arter halkasının uzunluğunu ve genişliğini hesaplamak için tutucular birbirine dokunduğunda ölçülen ilk ölçek değerini çıkarın. Ardından, aletle sağlanan vidaları kullanarak arteriyel halkayı istiridye tipi numune tutucuya sabitleyin ve saat yönünde sıkın.

Ardından, arteriyel halkadan ikinci bir kılavuz tel geçirin. Teli her iki uçtaki sabitleme vidalarının etrafına saat yönünde sarın ve numune tutucunun yüzeyine sıkıca sabitleyin. DMT menüsünden Normalleştirme Ayarları'nı seçin ve Mercek kalibrasyonunu bölüm başına bir milimetre, Hedef basıncı 13,3 kilopaskal, IC1/IC100'ü 0,9, Çevrimiçi ortalama süresini üç saniye ve Gecikme süresini 60 saniye olarak ayarlayın.

Hedef artere karşılık gelen kanalı seçin ve DMT menüsünden Normalizasyon ekranını açın. Uygun alanlara, a1 sıfıra ve a2 milimetre cinsinden ölçülen damar uzunluğuna eşit olacak şekilde Doku uç noktalarını girin. Tel çapını 40 mikrometre olarak girin ve ölçekten Mikrometre okumasını girin.

Verileri kaydetmek için Nokta Ekle'ye tıklayın. Şimdi pasif esneme uygulayın ve üç dakika bekleyin. Bir sonraki nokta olarak yeni Mikrometre okumasını girin ve Nokta Ekle'ye tıklayın.

Kabın potasyum aracılı bir kasılmasını indüklemek için hazneye beş mililitre 60 potasyum iyonu çözeltisi ekleyin. 60 potasyum iyonu çözeltisini yıkamak için üç kez beş mililitre Krebs çözeltisi ekleyin. Fenilefrin kaynaklı, konsantrasyona bağlı kasılmayı değerlendirmek için, kümülatif fenilefrin 10'dan eksi dokuzdan 10'a kadar negatif dört azı dişinin gücüne kadar yarım log artışlarla uygulayın.

Ek uyuşturucu testi için, gerilim taban çizgisine dönene ve en az 10 dakika stabil kalana kadar hazneyi en az beş mililitre ılık Krebs solüsyonu ile yıkayın. İnterlober arter, renal medulladan başarılı bir şekilde diseke edildi ve yapısal bütünlüğü korumak için dikkatli bir şekilde çıkarılması gereken kalın bir damar duvarı ve çevresindeki yağ dokusu görüldü. Arkuat arter kortikomedüller bileşkede izole edildi, daha ince bir vasküler duvar ve kemerli bir yörünge sergiledi.

İnterlobüler arter, çok ince bir duvarla renal korteks boyunca doğrusal olarak uzanan ve kortikal doku ile sıkı bir şekilde bütünleşen olarak tanımlandı. Histolojik analiz, interlober arterin belirgin bir adventisya ile en kalın vasküler duvara sahip olduğunu, kavisli ve interlobüler arterlerin ise giderek daha ince duvarlar ve daha az düz kas tabakası sergilediğini ortaya koydu. Arteriyel normalizasyon, tekrarlanan mekanik germe ve potasyum kaynaklı stimülasyonu içeriyordu ve numuneler arasında stabil temel gerilim koşulları oluşturdu.

Fenilefrinin 10'dan eksi dokuzdan 10'a negatif dört molar konsantrasyonun gücüne kümülatif olarak eklenmesi, doza bağlı bir şekilde arteriyel halkalarda giderek daha güçlü kasılmalara neden oldu. Fenilefrin önceden kasılmış arterlerde, asetilkolin konsantrasyonlarının 10'dan eksi sekize, üç çarpı 10'dan eksi beş azı dişinin gücüne yükseltilmesi, konsantrasyona bağlı vazodilatasyona neden oldu.