Pamuk Yaprak ve Bracteal Nektarlarının Dijital Mikroskopi Kullanılarak Puanlama Doğruluğunu ve Veri Korunmasını Artırmak İçin Görselleştirme

Mevcut çalışma, nekter özelliğin ifadesini doğru şekilde puanlayan yöntemi hedeflemektedir. Nektar özellik ifadesini örneklemek için, hem pamuk yaprağı hem de bracteal nektarlar model dokular olarak kullanılmıştır. Bu yöntem, nektar ticaret puanlama için güvenilir olmayan ve yanlış olan geleneksel puanlama sınırlamasını aşmaktadır.

Başlamak için, bir soğutucu ve etiketli Ziploc poşetlerini örnek toplamak için seraya taşıyın, iki ila üç aylık serada yetiştirilen pamuk bitkilerinden genç yaprak dokusu toplayın ve etiketli örnek torbalarına yerleştirin. Her bitki örneği için en az iki yaprak etiketli numune torbasına yerleştirin ve toplandıktan sonra poşeti sıkıca kapatın. Yaprak dokusu içeren her mühürlü örnek torbasını soğutucuya yerleştirin.

Bitkiler orta çiçeklenme aşamasındayken üst dallardan sağlıklı çiçekleri toplayın. En az iki çiçek etiketli bir örnek torbasına koyup poşeti mühürleyin. Çiçek içeren mühürlü örnek torbalarını laboratuvara taşımak üzere soğutucuya aktarın.

Bir mikroskopu açın ve ilk başlatma adımlarını tamamlayın. Mikroskop aşamasının boyutuna uygun şekilde kesilmiş yarı katlanmış A4 beyaz bir levhayı sahneye yerleştirin. Konsol kontrolcüsündeki küçük ışık düğmelerini kullanarak mikroskop aşamasındaki ışığı maksimum yoğunluğa ayarlayın.

Sonra büyük parlaklık düğmesini dörtte üç boyunca döndürerek orta yüksekliğe ayarlayın. Bilgisayarda, mikroskop yazılımında 10 x büyütme seçeneğini seçin. Yaprak dokusunu mikroskop aşamasındaki önceden kesilmiş beyaz tabakanın üzerine abaksiyal tarafı yukarıya bakacak şekilde yerleştirin ve sahnenin ortasına yerleştirin.

Kursu nazikçe döndürün ve ince ayar düğmelerini yaprağın orta kaburgasına odaklanın. Görüntü net ve bulanıklaşmadan görünene kadar ayarlamaya devam edin. Orta kaburganın alt ucunu, nektarın görüş alanının merkezinde olduğu yere yerleştirin ve ayrılan yan damarların net görünürlüğünü sağlayın.

Kurs ve ince ayar düğmeleri kullanılarak odak daha da incelenir ve dijital görüntü netliğini artırır. Nektar görüntüyü yakalayın. Yazılım tarafından istendiğinde, örnek tanımlama numarasıyla gerekli konuma kaydedilin, ardından gözlemlenen yaprak nektar fenotipine göre birden dörte kadar puan atayın.

Çiçekten braktları çıkarmak için pens veya el kullanın. Çiçeği temiz bir kesme tahtası üzerine koyun. Steril bir bıçak kullanarak çiçeğin sapını kesin, ardından çıkarılan bractların kenarı boyunca düz bir kesi yapın.

Hazırlanan çiçek dokusunu mikroskop aşamasında önceden kesilmiş beyaz tabakanın üzerine ters yerleştirin. Ekranda görüntülenen görüntünün netliğini artırmak için parkuru ve ince ayar düğmelerini kullanın. Görüntüyü uygun örnek tanımlama numarasıyla kaydedin.

Orta kaburganın alt tarafındaki yaprak abaksial yüzeyinin dijital görüntü ölçümleri, orta kaburgada nektar olmayan iki fenotip ve skor birini gösterdi. Ve tam gelişmiş nektarlı bir nektarla dört puan al. Çiçek örnekleri bracteal nektarlar için analiz edildiğinde, iki fenotip gözlemlendi; birinci skor nektar yok, dördüncü skor ise tam oluşmuş nektar üreten nektar gösterdi.

Nektar bitkilerin dijital görüntüleri, hem yaprak hem de bracteal nektar yapılarını 10 x, 20 x ve 40 x büyütmede açıkça gösteriyordu. Standart puanlama formatına uygun seçilmiş yaprak dijital görüntüleri, nektar eksikliği ile birinci skor, gelişmemiş nektar ile ikinci puan, daha küçük nektar ile üçüncü puan ve tam gelişmiş nektar ile dördüncü puanı gösterdi. Nektar ve nektarı az çaprazlamaların ayrılan popülasyonlarından doğru puanlanması, bitki böcek zararını azaltabilecek ve verim kayıplarını azaltabilen nektarı az bitkilerin seçimi için gereklidir.

Bu özelliğin seçimi, belirtici destekli seçim için değerli araçlar olan nektarı az özellikle ilişkili DNA belirteçleri gibi sonraki uygulamalar için önemlidir.