Cisterna Magna Fare Beyin Omurilik Sıvısı Seri Toplama Tekniği

Prosedür, farenin anestezi edilmesi ve cerrahi bölgenin hazırlanmasıyla başlar. Ardından fare, stereotaksik cihaza yüzüstü yerleştirilir. Oksiputun alt kısmından cilde sagittal bir insizyon yapılır ve cilt altı dokusu ile boyun kasları orta hat boyunca künt disseksiyonla ayrılır.

Ardından, vücudun arka kısmı, gövdenin sabitlenmiş başla 135 derecelik bir açı oluşturacağı şekilde yerleştirilir; CI sternum magna'nın dura materi cam kılcal boru ile delinir ve BOS toplanır. BOS örneklemesi tamamlandıktan sonra kaslar yeniden hizalanır ve deri sütürle dikilir; dehidrasyonu önlemek için deri altına yaklaşık bir mililitre %0,9 NACL steril serum fizyolojik enjekte edilir ve fare iyileşene kadar sıcak tutulur. Merhaba, ben Columbia Üniversitesi The Top Institute'deki Dr. Karen Duff'ın laboratuvarından Liu.

Bugün size farenin sistern magna bölgesinden beyin omurilik sıvısı toplamanın nasıl yapılacağını göstereceğim. Bu teknikle, aynı fareden iki ila üç ay aralıklarla üç defaya kadar seri BOS örnekleri toplayabiliriz. Laboratuvarımızda bu tekniği, Alzheimer hastalığının transgenik fare modellerinde farklı yaşlardaki BOS A beta veya tau seviyelerini belirlemek için kullanıyoruz ve bu değerleri beyindeki değerlerle korele ediyoruz.

Sonuç olarak, CSFA beta veya tau seviyelerinin hastalık seyri için potansiyel biyolojik belirteçler ve ayrıca farelerdeki terapötik çalışmalar için potansiyel kullanımıyla ilgileniyoruz. Öyleyse başlayalım. Bu prosedür için bir mikro pipet poları ile kapilerler oluşturmak gereklidir.

Burada kullanılan kapilerler Sutter Instruments firmasından BOA silikat cam B 175 10'dur; kapilerleri, ısı indeksi 300 ve basınç indeksi 330 olarak ayarlanmış bir Sutter P 87 alevli mikro pipet çekicisi ile çekin. Cam kapiler beş santimetre uzunluğundadır ve konik bir uca sahiptir. Kapilerin ucu, iç çapı yaklaşık 0,5 mm olacak şekilde makasla düzeltilir.

Cerrahi işlem, fareye intraperitonal olarak 100 mg/kg ketamin ve 10 mg/kg ksilazin uygulanarak anestezi yapılmasıyla başlar; anestezi sırasında fareyi 37 °C'lik bir inkübatörde sıcak tutun. Hayvanın tamamen anestezi altında olduğu parmak sıkma çekilme refleksiyle belirlendikten sonra boyun bölgesini tıraş edin ve ardından fareyi David Kink marka olan gibi bir stereotaksik cihaza yerleştirin. Isıtma pedine doğrudan temas edecek şekilde, pedden gelen ısının farenin vücut sıcaklığına göre ayarlanabilmesi için bir rektal sıcaklık probu yerleştirin.

Başı baş adaptörleri ile sabitleyin, boyun derisini %10 povidon iyot ve %70 etanol ile üç kez silin ve başın posterior kısmının veya oksiputun altına sagital bir insizyon yapın. Sonraki adımlar, künt pensler kullanılarak bir diseksiyon mikroskobu altında gerçekleştirilmelidir. Sternum magnanın dura materini açığa çıkarmak için deri altı dokusunu ve M ventrolateralis ile M rectus capitis dorsalis major kaslarını ayırın. Kasları ayrı tutmak için bir çift mikro retraktörü uygun şekilde kullanın.

Son olarak, fareyi başı gövdeye 135 derecelik bir açıda olacak şekilde yatırın. Fare artık CSF toplanması için hazırdır. Cisterna Magna'dan CSF toplama tekniği daha önce yayınlanmıştır.

Diseksiyon mikroskobu altında Şekil 1 A. Dura mater, medulla oblongata ve ana bir kan damarının görünür olduğu, parlak ve şeffaf bir ters üçgen şeklinde görünür. Arteria dural spinella Şekil 1 B. Medulla'nın ve bitişik BOS boşluğunun dolaşım pulsasyonu görülebilir.

Dura mater tabakasını steril bir pamuklu çubukla kurulayın, kılcal boruyu arteria dorsalis spinels'in lateralindeki dura mater üzerinden CI sternum magna'ya yerleştirin. Kılcal boru doğru şekilde yerleştirildiğinde dirençte belirgin bir değişim olacaktır ve ardından CSF kılcal boruya akacaktır. CSF toplandıktan sonra, kılcal boruyu dikkatlice çıkarın ve 1 mm iç çapa sahip polietilen tüp kullanarak üç mililitrelik bir şırıngaya bağlayın.

CSF'yi 0,5 mililitrelik bir tüpe enjekte edin. Tüpü etiketleyin ve hemen kuru buz üzerinde dondurun. Donduktan sonra, CSF'yi -80 °C dondurucuya aktarın.

Az önce gösterilen örnekleme tekniği son derece naziktir ve aynı fareden iki ila üç aylık aralıklarla sonraki BOS örneklerinin alınmasına olanak tanır. Bu nedenle, boyun bölgesinden örnekleme yapıldıktan sonra kaslar ve deri yeniden hizalanmalı ve sütürle kapatılmalıdır. Kesi sütürle kapatıldıktan sonra, fareyi rehidrate etmek için deri altına yaklaşık bir mililitre %0,9 NACL tuzlu solüsyon enjekte edin.

Fare, kendisini toparlayana kadar yaklaşık 37 °C'de sıcak tutulmalıdır. Ameliyattan sonra birinci ve yedinci günlerde ağırlığı takip edilmelidir. Farening sistemik mag'inden beyin omurilik sıvısının nasıl toplanacağını size göstermiş oldum.

Bu prosedür uygulanırken hatırlanması gereken üç önemli nokta vardır. Birincisi, Cy Magna'nın rotasının mümkün olduğunca açık olması için farenin başını ve vücudunu stereotaktik çerçeveye uygun şekilde yerleştirin. İkincisi, kapiler ile durometere girerken kan damarlarından dikkatlice kaçının.

Aksi takdirde, örneğiniz kanla kontamine olacaktır. Son olarak, hipotermiyi önlemek için tüm prosedür boyunca farelerinizi sıcak tutmayı lütfen unutmayın. Hipotermi sadece fareleriniz için zararlı olmakla kalmaz, aynı zamanda beta üretimi veya tall hipo fosforilasyon ilişkisini tetikleyerek sonuçlarınızı önemli ölçüde etkileyebilir.

Tamam, işte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler ve deneylerinizde başarılar dileriz.