زرع مثلي الأورطي : نموذج الفأر لدراسة تطوير المزمنة اعتلال وعائي

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء نموذج دقيق وطريقة سهلة التنفيذ لدراسة تطور اعتلال الأوعية الدموية بعد الزرع. ويتم تحقيق ذلك باستخدام مزيج من سلالتي PVG و CI. وتتمثل الخطوة الثانية من الإجراء في استئصال الشريان الأبهر من المتبرع.

تتمثل الخطوة الثالثة من الإجراء في تحضير المستقبل. أما الخطوة النهائية من الإجراء فهي إجراء مفاغرة للشريان الأورطي للمانح مع الشريان الأورطي للمستقبل. وفي النهاية، يمكن الحصول على نتائج تظهر تكوّن الغشاء الباطن الجديد باستخدام الفحص النسيجي المرضي.

مرحباً، أنا سونيا شويفل، أستاذة في مناعة زراعة الأعضاء في مختبر Thet Eye في مركز جامعة القلب في هامبورغ بألمانيا. وأنا مانيش دوبوف، من مختبر TS Eye أيضاً.

يهتم مختبري بمجال مناعة الزرع. سنقدم لكم في هذا الفيديو نموذج زراعة الأبهر في الموقع الأصلي (Orthotopic aortic transplantation)، وهو نموذج سهل ومعتمد لدراسة تطور اعتلال الأوعية الدموية الناتج عن الزرع في الفئران. نحن نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا للبحث في الرفض المزمن في عمليات زراعة القلب والأوعية الدموية.

في نموذج زراعة الأبهر في الموضع التشريحي الصحيح، يمكن تقييم الأبهر نسيجياً بسهولة. بالإضافة إلى ذلك، فإن نموذج زراعة الوريد البابي (PVG) إلى القولون الصاعد (CI) مفيد بشكل خاص لدراسات اعتلال الأوعية الدموية بعد الزراعة، حيث أن الرفض الوعائي الحاد لا يشكل عاملاً مربكاً رئيسياً، كما أن تطور اعتلال الأوعية الدموية يشبه النتائج السريرية.

لنبدأ الآن. المتبرع المستخدم في عملية زراعة الأبهر في الموضع الأصلي (ORTHOTOPIC) هو جرذ من سلالة PVG يزن ما يقرب من 250 إلى 300 grams. بعد تخدير الحيوان، قم بحلاقة شعر منطقتيه البطنية والصدرية.

ضع الجرذ على ظهره وضع قناع وجه فوق أنفه وفمه. وللحفاظ على التخدير، قم بتطهير المنطقة البطنية والصدرية على نطاق واسع باستخدام يود Provo، يليه إيثانول 80%. بعد ذلك، تحقق من ردود أفعال الحيوان عن طريق قرص قدميه الخلفيتين.

للتأكد من تخدير الجرذ بشكل كافٍ. يتم تفريغ دم الجرذ عن طريق فتح البطن وعمل فتحة في الشريان الأبهر البطني. افتح الصدر بعناية للعثور على الشريان الأبهر الصدري النازل.

قم بتشريح الأبهر الصدري من الأنسجة المحيطة، مثل الأعصاب الدهنية والمريء. استأصل قطعة بطول 1.5 سنتيمتر من الأبهر باستخدام مقص حاد دون إلحاق ضرر بأنسجة الأبهر. قم بتروية رقعة الأبهر جيداً بمحلول ملحي بارد واحفظ الرقعة عند درجة حرارة أربع درجات مئوية.

إن المتلقي لعملية زرع الأبهر في الموضع التشريحي هذه هو جرذ من سلالة A CI يزن ما يقرب من 250 إلى 300 جرام. لبدء هذا الإجراء، قم بحلاقة منطقة البطن للجرذ المخدر ووضع مرهم للعين لمنع جفاف العينين أثناء التخدير. ضع الجرذ على ظهره وضع قناعاً على أنفه وفمه للحفاظ على حالة التخدير.

بعد ذلك، قم بتطهير منطقة البطن باستخدام اليود (provo iodine)، يليه الإيثانول بتركيز 80%ethanol. بعد قرص القدمين الخلفيتين للتأكد من تخدير الجرذ بشكل كافٍ، افتح البطن عن طريق إجراء شق جراحي في خط منتصف البطن وفصل الجلد والعضلات. خطوتان.

بمجرد فتح البطن، ضع الأمعاء في القفاز المبلل بالمحلول الملحي. اِطوِ القفاز حول الأمعاء لمنع فقدان الرطوبة. قم بإزالة النسيج الدهني الذي يغطي الأبهر البطني.

قم بتشريح الشريان الأورطي من المنطقة تحت الكلوية وصولاً إلى منطقة التفرع، مع الحرص على عدم إلحاق الضرر بفروع الأوعية الدموية. إذا لزم الأمر، قم بربط فروع الشريان الأورطي بعد الانتهاء من تشريحه. أولاً، استخدم مشبك جراحة مجهرية على الجزء تحت الكلوي من الشريان الأورطي لإيقاف تدفق الدم.

ضع بعد ذلك ملقطاً ثانياً بالقرب من تفرع الشريان الأبهر. والآن بعد توقف تدفق الدم، قم بإزالة قطعة قصيرة من الشريان الأبهر. ثم خذ طعم الشريان الأبهر المانح الذي تم حفظه في محلول ملحي 0.9% على الثلج.

قم بتقصيرها إلى الطول المناسب وضعها في الفتحة الموجودة في الأبهر. صِل الأبهر المانح بالأبهر المستقبل عن طريق إجراء غرز جراحية مستمرة من نوع prolene بمقاس 8/0، بدءاً بمفاغرة الطرف القحفي من طرف إلى طرف. عند الانتهاء من مفاغرة الطرف القاصي من طرف إلى طرف، افتح المشبك القاصي بعناية.

بعد ذلك، افتح الملقط القحفي بعناية. يجب أن يكون هناك نبض مرئي عند الطرف القاصي للأبهر. الآن، أعد الأمعاء إلى البطن واغسل تجويف البطن بمحلول ملحي معقم مُدفأ مسبقاً.

أغلق طبقة العضلات في جدار البطن باستخدام غرز البرولين المستمرة مقاس 6-0. بعد ذلك، استخدم غرز البرولين المستمرة مقاس 5-0 لإغلاق الجلد بينما لا يزال الجرذ تحت تأثير التخدير. احقن 4 إلى 5 mg/kg من الكاربروفين تحت الجلد.

أعد الحيوان إلى قفصه. أضف الميثيمازول إلى مياه الشرب كمسكن للألم لمدة ثلاثة أيام بعد عملية الزرع.

سيتم عرض نتائج الفحص النسيجي المرضي بعد 120 يوماً باستخدام مجهر الأنسجة الخاص بنا. وستظهر الصور بوضوح تطور اعتلال الأوعية الدموية الناتج عن الزرع. كما سيتم تسليط الضوء على تضيق اللمعة المتكون عن طريق الرسوم المتحركة الحاسوبية.

لقد قدمنا لكم للتو كيفية إجراء عملية زراعة الشريان الأبهر ذاتي الموضع في الجرذان. كما استعرضنا التطور الناجح لاعتلال الأوعية الدموية الناجم عن الزرع بعد 120 يوماً باستخدام الفحص النسيجي المرضي. تتيح هذه الطريقة استقصاء التأثيرات الأولية للأدوية على اعتلال الأوعية الدموية المزمن في الطعوم الخيفية.