توليد الخلايا العصبية عن طريق إعادة برمجة الخلايا الليفية الجلدية البشرية

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 مشاهدات • 3:32 د • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أدخل الخلايا الليفية الجلدية البشرية البالغة أو aHDFs ، المعلقة في وسط الخلايا الليفية ، في صفيحة دقيقة مغلفة بالبروتين خارج الخلية. احتضان للسماح بالالتصاق الخلية.

إدخال ناقل الفيروس العسسي المعدل وراثيا. عند استيعاب الخلية المضيفة ، يتم نسخ الحمض النووي الريبي الفيروسي عكسيا إلى الحمض النووي ، والذي يندمج في جينوم المضيف.

يعبر الحمض النووي الفيروسي عن عوامل النسخ والحمض النووي الريبي القصير لدبوس الشعر ، أو shRNAs. تعالج نوكليازات الخلوية shRNAs إلى RNAs صغيرة متداخلة أو siRNAs.

تعمل siRNAs المتولدة على تدهور مثبطات النسخ المشفرة mRNA ، وبالتالي تثبيط تعبيرها وتمكين تنشيط جينات التمايز العصبية.

تعمل

عوامل النسخ على تنشيط الجينات ، مما يعزز التمايز العصبي ل aHDFs.

قم بإزالة الوسيط الذي يحتوي على المتجهات غير الداخلية.

أضف وسيطا للتحويل العصبي المبكر يحتوي على عوامل النمو والجزيئات الصغيرة التي تحفز التمايز إلى خلايا شبيهة بالخلايا العصبية.

استبدل الوسط بوسط تحويل الخلايا العصبية المتأخرة الذي يحتوي على عوامل التغذية العصبية للنضج إلى خلايا عصبية.

الخلايا العصبية الناضجة جاهزة لإجراء فحوصات المصب.

قم بإعداد معلق خلوي من 1،320،000 خلية في 13.2 مل من وسط الخلايا الليفية من أجل تحقيق 100،000 خلية لكل مليلتر من الوسط. بعد شفط الجيلاتين من اللوحة ، اغسل الطبق بمحلول ملحي Dulbecco المخزن بالفوسفات مرتين. ثم أضف 500 ميكرولتر من تعليق الخلية إلى كل بئر ، واحتضن عند 37 درجة مئوية طوال الليل.

دافئ 13.2 مل من الخلايا الليفية المتوسطة إلى 37 درجة مئوية. ثم قم بإذابة ناقل الفيروس في غطاء المحرك الصفحي في درجة حرارة الغرفة. أضف الحجم المطلوب من الفيروس العدسي اللازم لإصابة الخلايا الليفية الجلدية البشرية البالغة بعدوى متعددة تبلغ 20 إلى الوسط دون أي معززات للتنبيغ.

بعد ذلك ، استبدل الوسط ب 500 ميكرولتر من وسط الخلايا الليفية مع إضافة ناقل الفيروس العسسي. احتضن اللوحة عند 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها. في اليوم التالي، يستعاض عن الوسط المحتوي على فيروس العدسات بوسط الخلايا الليفية الطازجة بدون ناقل الفيروسات العسسية. في اليوم الثالث بعد نقل الفيروس ، قم بإزالة وسط الخلايا الليفية وأضف 500 ميكرولتر من وسط التحويل العصبي المبكر.

مرتين أو ثلاث مرات في الأسبوع ، استبدل 225 ميكرولترا من الوسط القديم من كل بئر ب 250 ميكرولتر من وسط التحويل العصبي المبكر الجديد. في اليوم الثامن عشر بعد نقل الفيروس ، قم بإزالة وسط التحويل العصبي المبكر واستبدله ب 500 ميكرولتر من وسط التحويل العصبي المتأخر. استمر في تغيير الوسيط كل يومين إلى ثلاثة أيام كما كان من قبل حتى اليوم الخامس والعشرين أو نقطة النهاية التجريبية.

11:42

الأرقاء أعاده برمجه الخلايا الليفية البشرية عن طريق التعبير القسري من عوامل النسخ

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:53

توليد الخلايا العصبية البشرية والخلايا قليلة التغصن من الخلايا الجذعية متعددة القدرات لنمذجة تفاعلات الخلايا العصبية قليلة التغصن

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:42

في المختبر النمذجة للأمراض العصبية باستخدام التحويل المباشر من الخلايا الليفية إلى خلايا السلف العصبية والتمايز إلى الخلايا الفلكية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

13:02

توليد خلايا الجذع من خلال التعبير MEFS القسري لل2 - سوكس ، أكتوبر 4 ، ج Myc وKlf4

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:10

تعيين جيل من الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة عن طريق إعادة برمجة الخلايا الليفية الإنسان مع الإنسان الفيروسة البطيئة TF Stemgent

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:47

كفاءة اشتقاق أسلاف الإنسان متعلق بالخلايا العصبية والخلايا العصبية من افرة القوة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية التعريفي مع جزيء صغير

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

02:08

توليد الخلايا العصبية الهرمية القشرية من الخلايا الجذعية العصبية البشرية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:36

النسب-إعادة برمجة الخلايا المشتقة من خلية حوطية الدماغ البشري الكبار في الخلايا العصبية المستحثة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

13:58

الاشتقاق من الكبار الخلايا الليفية الإنسان والتحويل المباشر إلى داخل الخلايا العصبية للتوسيع السلف

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:07

جيل بسيطة من ثقافة عالية الغلة المستحث الخلايا العصبية من الخلايا الليفية الجلد الكبار البشرية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 22 أغسطس 2026