افعل ذلك بنفسك جهاز لاستخراج العينات Cryopreserved سقطت سهوا في صهاريج التخزين المبردة

الهدف من هذا الإجراء هو تسهيل استرجاع العينات الموجودة في صناديق التجميد وأنابيب التجميد من الخزانات الثنائية المملوءة بالنيتروجين السائل باستخدام جهاز سهل التصنيع. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق إزالة رف أو رفين من رفوف التجميد من الخزان لتوفير مساحة للمناورة وإدخال الجهاز رأسياً في الخزان. وتتمثل الخطوة الثانية في كشط قاع الخزان برفق باستخدام الجهاز.

بعد ذلك، اسحب الجهاز عمودياً على طول جدران الوعاء. لانتشال صندوق التجميد من الخزان، تتمثل الخطوة النهائية في إمساك الصندوق المستخرج من قاع الوعاء وإعادة تركيب رفوف التجميد التي تمت إزالتها. وتكمن الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالطرق الحالية، مثل الصب أو استخدام قضيب مليء بالنيتروجين السائل، في أنها توفر بديلاً سهلاً وآمناً وسريعاً، يحافظ على سلامة العينات ويمكن تنفيذها بواسطة مشغل واحد. لبدء تجميع الجهاز المقاوم للتجميد، استخدم كماشة لفرد أحد جوانب رابط قوي ثلاثي الجوانب لصنع رابط قوي على شكل حرف L.

كما يظهر هنا، يمكن اختيار أبعاد الرابط القوي اعتماداً على قطر عنق الأداة. يجب صنع رابطين قويين من هذا النوع للسماح للجهاز باستعادة صناديق تجميد (cryo boxes) بمقاس 5.5 × 5.5 بوصة. يتم تثبيت هذه الروابط باستخدام حزام TST قوي بواسطة مسمار تاجي وصامولة وحلقة ومسمار لتشكيل قاعدة مغرفة التجميد (cryo scoop).

يجب أن يظهر الجهاز الآن كما هو موضح هنا. والآن، باستخدام لوحة مشقوقة، قم بمحاذاة الشقوق الموجودة على رابط T القوي مع الشقوق الموجودة في أحد طرفي اللوحة المشقوقة. ثم قم بتثبيتهما معاً باستخدام صواميل وبراغي Hillman.

قم بحفر ثقوب للتثبيت إذا كانت اللوحة المشقوقة والأربطة القوية لا تحتوي على ثقوب محفورة مسبقاً. وإذا رغبت في ذلك، يمكن تشكيل مقبض عن طريق ثني الطرف الآخر من اللوحة المشقوقة وتغليفه بالرغوة. ولضمان إمساك الجهاز بشكل أفضل، تأكد من إزالة الرغوة قبل التنظيف بالماء.

يمكن أيضاً تكييف جهاز الاستعادة المصنع يدوياً والمقاوم للتجميد لاستعادة أنابيب التجميد. يتضمن ذلك استبدال القاعدة المسطحة بمصفاة من الفولاذ المقاوم للصدأ تم تعديلها لغرف الأنابيب من السائل. لبدء التجميع، قم أولاً بفك الصواميل التاجية والبراغي، ثم قم بتثبيت حزام الإطارات المتين بالصفيحة المخددة.

بعد ذلك، وقبل تثبيت المصفاة المصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ بالصفيحة ذات الفتحات، قم بثني عنق المصفاة برفق باستخدام كماشة لتوجيه القاعدة بزاوية تشبه المغرفة. وإذا كانت المصفاة المستخدمة تحتوي على حافة، فاستخدم الكماشة لثني الحافة لأسفل؛ حيث سيؤدي ذلك إلى تسهيل عملية المناورة بالجهاز.

قم بمحاذاة الفتحة الموجودة في مقبض المصفاة مع الفتحات الموجودة في اللوحة المشقوقة، وثبّت المصفاة باستخدام صواميل وبراغي Hillman. قم بحفر الفتحات إذا كانت المصفاة لا تحتوي على فتحات محفورة مسبقاً. لبدء استخراج صناديق الحفظ بالتجميد من وعاء التخزين، تأكد أولاً من ارتداء القفازات المخصصة للتعامل مع درجات الحرارة شديدة البرودة.

بعد ذلك، قم بإزالة رف أو رفين من رفوف التجميد من الحاوية لإفساح المجال للمناورة بالجهاز. بعد ذلك، استخدم جهاز الاسترداد اليدوي (DIY) القائم والمقاوم للتجميد والمزود بقاعدة strong tie ttra لكشط الجزء السفلي من الحاوية برفق وجمع الصندوق الذي سقط في قاع خزان الحاوية. أخيراً، اسحب الجهاز بشكل عمودي على طول جدران الحاوية لغرف صندوق التجميد وإخراجه من الخزان.

لاحظ أنه يجب إمساك الجهاز بشكل رأسي وسحبه مباشرة إلى الأعلى لتجنب انزلاق الصندوق مرة أخرى داخل جهاز الاستخراج (doer). لاستعادة أنابيب التجميد، استخدم مغرفة التجميد المزودة بمصفاة لكشط قاع الجهاز بلطف على غرار عملية استعادة صندوق التجميد، ثم اسحب الجهاز إلى الأعلى وأمسك بالأنابيب التي تم تجميعها في المصفاة. يتمثل التحدي الرئيسي في دراسات التعبير الجيني في أن جودة RNA تعتمد على ظروف التخزين لكل من عينات الأنسجة المجمدة وRNA المستخلص.

يوضح هذا الشكل تأثير تداول العينات على سلامة الحمض النووي الريبوزي الكلي (total RNA)؛ حيث خضع total RNA من نفس مصدر النسيج لعمليات تداول مختلفة قبل التجربة. يظهر مستخلص total RNA السليم حزمًا واضحة من ribosomal RNA 28 s و18 s، وتكون حزمة ribosomal RNA 28 s أكثر كثافة بمرتين تقريبًا من حزمة ribosomal RNA 18 s، وهذا مؤشر على أن RNA سليم. وتصور الحارتان الثالثة والرابعة عينات تعاني من تحلل ملحوظ نتيجة عمليات تذويب جزئي متكررة بسبب استخراجها لفترات قصيرة من المجمد، وذلك لمحاكاة التخزين طويل الأمد مع عمليات سكب دورية تفرضها ضرورة استخراج الأنابيب الموجودة في أسفل الصناديق.

ومع ذلك، فإن العينات التي تم تخزينها في خدمة doer باستخدام جهاز DIY وبالتالي لم تتعرض لإذابة جزئية، تحتوي على RNA سليم في المسار الثاني. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية استعادة العينات من وعاء dvar المملوء بالنيتروجين السائل دون الحاجة إلى تفريغه.